适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法

[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

适于AFLP分析的核桃幼叶DNA提取方法

以核桃幼叶为材料,采用改良CTAB法对核桃DNA提取进行了研究。经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,在CTAB提取液中添加3%PVP40、50mmol/Lβ-巯基乙醇和10mmol/LNa2S2O5,能得到高纯度的总DNA,OD260/OD280在1 8～2 0之间,蛋白、多糖、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.     

一种快速高效适于橡胶树叶片AFLP分析的DNA提取方法

以近200个巴西橡胶树种质材料（品种及无性系）幼嫩叶片为材料．采用改良的cTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,DD260／DD280的比值均为1．8～2．0,1％琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,无降解现象,KNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析（引物EcoRI-TA／MseI—CTT）条带清晰,多态性好,说明此方法提取的巴西橡胶树幼嫩叶片基因组总DNA较适于AFLP分析。     

适于AFLP分析用的荔枝DNA提取方法

A：F7ll,（AJnpMedfraglnntlengthhorphism）具有共显性表达,不受环境影响,无复等位效应,带纹丰富,DNA用样量少,灵敏度高,快速高效,重复性好等优点．AFLP被认为是最有效的分子标记方法,近年来发展很快,在芒果、愕梨（Reteretal,1995）等果树上均有研究．然而有关荔枝Alllil,分析却少见报道．A：FIP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片断及凝胶电泳分析3个步骤,其中高分子组成基因组DNA的成功制备和避免部分分解是AFLP成功的关键．传统的DNA提取方法包括以下几种：①碱法;②0？A：II;③SDS法．其中碱法多用于…     

适于AFLP分析的盾叶薯蓣DNA的提取方法

用传统CTAB法和改良CTAB法提取盾叶薯蓣样品的基因组DNA。结果表明:传统CTAB法与改良CTAB法提取的基因组DNA完整性都比较好,但传统CTAB法获得的DNA含有较多杂质,不能被限制性内切酶消化,改良CTAB法提取的基因组DNA杂质去除彻底,条带清晰,可以完全酶切,并能获得清晰的预扩增图谱和有丰富条带稳定的AFLP指纹,完全适合于盾叶薯蓣分子标记鉴定所需。     

基于AFLP分析的蚕豆DNA提取方法

蚕豆是高蛋白含酚类物质较多的作物,为了提取适于蚕豆AFLP分析的高质量DNA,采用改良CTAB法,以β-巯基乙醇和PVP抗氧化剂浓度为因素进行了试验。结果表明,用改良的CTAB法提取的蚕豆DNA质量较好,纯度高,OD260/OD280平均值为1.915,变幅在1.81~2.08之间,绝大多数集中在1.9左右。β-巯基乙醇和PVP对蚕豆DNA纯化具有替代作用,其中在CTAB提取液中加入1%β-巯基乙醇和0.5%的PVP或直接加入1%PVP后,提取的DNA纯度较高,OD260/OD280平均值分别为1.868、1.865,而且电泳谱带最清晰,最适于AFLP技术的要求。     

适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法

以龙眼“石硖”、“大乌圆”、“大广眼”、“龙荔”叶片为试材,研究了一种适宜AFLP分析的龙眼基因组DNA提取方法,其改良策略是:在细胞核被裂解前先除去多酚类等次生物质,防止多酚类的氧化,细胞裂解后再加入10%的CTAB,进一步除去杂质。此方法不仅适用于嫩叶采样,也适用于老叶采样,所提取的基因组DNA可成功进行AFLP标记分析,为龙眼的分子生物学研究提供了科学依据。     

适用于AFLP分析的泡桐DNA提取方法研究

分别采用3种方法提取了豫杂一号泡桐组培苗叶片DNA,并对其得率和质量进行了检测.结果表明,DNAkit,CTAB-Ⅰ和CTAB-ⅡI法提取DNA的得率分别为0.250,0.284,0.312 mg·g~(-1);CTAB法提取的DNA片段大于DNA kit法;利用CTAB-Ⅱ法得到的DNA可被EcoRI,MspⅠ和Hpa Ⅱ完全酶切,该DNA经AFLP-PCR扩增电泳后,产物带型清晰,稳定,重复性好.CTAB-Ⅱ法为泡桐DNA提取的最佳方法.     

柿AFLP银染技术体系的建立

通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿AFLP分析的银染技术体系:酶切体系20μL总体积中含纯化后的DNA450ng,EcoRI和MseI各3U,37℃酶切4h;酶切完成后加入连接液,37℃连接10h(或过夜),然后65℃变性10min;连接产物稀释5倍用于预扩增,预扩增体系中EcoRI和MseI引物均不含选择性碱基;预扩增产物稀释5倍用于选择性扩增,选择性扩增体系中EcoRI和MseI引物均含3个选择性碱基,选择性扩增完成后,加入10μLLoadingbuffer,95℃变性10min,立即冰浴;取6 5μL变性后的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,电泳完毕后,对胶板进行固定、脱色、水洗、银染、冲洗、显影、定影及干燥等银染程序。     

橡胶树AFLP银染体系建立前期的准备

以橡胶树杂交群体为材料,来寻找适合于研究橡胶树的AFLP技术体系的建立,优化是在多方面原因的,在众多关键因素的影响中,其中优化的关键前提为质量较高的基因组DNA。本实验采取CTAB改良法提取DNA为橡胶树的AFL,P技术后续工作顺利开展打下基础。     

大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立

1材料与方法1．1材料供试大白菜种质材料32份,分别由北京市农林科学院蔬菜研究中心品种资源库及蔬菜研究中心大白菜育种课题组和中国农业科学院蔬菜花卉研究所国家种质资源中期库提供。材料编号、品种名称、来源地见表1。     

黄瓜叶片DNA的提取及AFLP分析体系的建立

以黄瓜叶片为研究材料提取基因组DNA并进行了AFLP扩增。对影响AFLP分析体系的关键因素进行了比较和优化,探索出适宜黄瓜的DNA提取方法,并建立了AFLP分析体系,得到了较为清晰可辨的AFLP指纹图谱,为进行黄瓜的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位等研究奠定基础。     

大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立(英文)

[Objective] The obtained clear AFLP fingerprint of Chinese cabbage provided basis for studies on the molecular markers of Chinese cabbage cultivars and the phylogenetic relationship among Chinese cabbage cultivars. [Method] With the test materials of leaves of Chinese cabbages, the high-quality total DNA from leaves of Chinese cabbages was extracted by the modified CTAB method. DNA restriction-ligase reaction, pre-amplification and selective amplification were optimized, and the AFLP silver-staining reaction system for Chinese cabbage was established. [Result] The quality of DNA template influenced restriction enzyme digestion and the subsequent ligase amplification reaction, while the modified CTAB extraction method could be used in AFLP analysis of Chinese cabbage to obtain a clear AFLP fingerprint. The optimum conditions for restriction enzyme digestion of genomic DNA from Chinese cabbage were as follows: 150 g DNA template, 12.5 μl reaction volume, 1.25 U Eco R Ⅰ, 1.25 U Mse Ⅰ and 5×Reaction Buffer with 4 h at 37 ℃. The ligation reaction with 2.5 h at 20 ℃ was the optimum condition. Six pairs of primers including E-AAC/M-CAG, E-AAG/M-CAC, E-ACA/M-CTG, E-ACT/M-CAC, E-ACT/M-CTT and E-ACT/M-CTC all had its own stable and clear patterns. [Conclusion] With abundant bands and high polymorphism, AFLP selective amplification is an efficient molecular marker for genomic polymorphism of Chinese cabbage.     

核果类果树基因组DNA提取方法的研究

以核果类果树油桃、扁桃、杏、山桃、榆叶梅和樱桃的幼叶为试材,进行了基因组DNA的提取方法的比较研究,其中改良SDS法效果最好;采用改良SDS法提取油桃的幼叶、花蕾和韧皮部基因组DNA的效果表明,三者均可以作为基因组DNA提取的材料,且以幼叶效果最理想;采用改良的SDS法可在自然阴干的扁桃和油桃叶片中提取到完整的DNA;将改良SDS法提取的油桃不同部位和自然阴干的扁桃和油桃叶片基因组DNA,经SSR-PCR检测发现,扩增效果清晰稳定,完全可以应用于果树分子生物学研究.     

核桃AFLP银染技术体系的建立

为了建立准确、高效、实用的核桃AFLP体系,应用于核桃品种鉴别、优异基因的分子标记,本试验针对核桃叶片中多糖、酚类等次生代谢物比较多的特点,采用改良CTAB法,通过添加抗氧化物质,得到了适合核桃AFLP分析的基因组DNA提取方法;在此基础上进行了AFLP体系中主要参数的优化研究,比较了两种银染方法的效果,并从64对选择性扩增引物中筛选出了18对适合核桃AFLP分析的引物,建立了能得到清晰指纹分析图像的核桃AFLP技术体系。