天麻蜜环菌和萌发菌的分离培养

天麻属兰科植物,无根无叶,是一种较特殊的异养型植物。种子的萌发是从紫箕小菇或其它萌发真菌中获得营养,而其成株球茎则靠从蜜环菌获得营养。天麻蜜环菌和萌发菌在人工培养条件下会出现退化,需要更新,必须从自然界进行新菌种的分离培养工作。本文主要介绍这两种真菌的一些分离培养技术。     

一株乌天麻共生萌发菌培养条件的优化

以天麻共生萌发菌MY-001为试材,采用单因素试验和正交实验分析法,以菌丝生长速率和菌丝体生物量为主要指标,对萌发菌MY-001培养环境条件及培养基营养条件进行优化。结果表明:MY-001最适宜的环境条件为温度25℃,培养基质含水量200%下进行暗培养;MY-001最易利用的氮源和碳源分别是酵母膏、葡萄糖,复合维生素B也能促进菌丝生长,最佳的营养条件为酵母膏3g·L~(-1)、葡萄糖20g·L~(-1)、复合维生素B 0.005g·L~(-1),通过多元回归分析建立回归方程(Y=0.362+0.084A-0.014B-0.007C),方差分析显示方程为极显著。     

梯棱羊肚菌栽培菌株遗传多样性分析

以21个羊肚菌菌株为试材,采用核糖体DNA转录间隔区(ITS)序列分析技术、拮抗试验、菌丝生长特性比较及酯酶同工酶分析的方法,研究了梯棱羊肚菌栽培菌株的遗传特性及亲缘关系。结果表明:梯棱羊肚菌菌丝生长速度为6.90~10.57mm·d~(-1),菌株FY2的生长速度显著高于其它菌株(P0.05);10个梯棱羊肚菌菌株相异系数在0.53时分为3类,其中FY4菌株与其它菌株之间亲缘关系较远,遗传差异较大,FY1、FY5、FY6、FY7、FY9之间相异系数为0,说明这一类菌株间遗传差异小或为同一菌株;聚类分析结果与拮抗试验结果基本一致。该研究为梯棱羊肚菌遗传信息数据库的建立奠定基础,为优良品种选育和亲缘关系的研究提供依据。     

利用PCR扩增快速筛选天麻萌发真菌小菇属Mycena sp.的研究

设计能够鉴定小菇属真菌(Mycena sp.)的引物,可准确而快速发现萌发菌分离材料,从而分离小菇属真菌,对提高天麻种子萌发率及天麻产量具有重要现实价值。同时对全面了解小菇属真菌在自然环境中的物种分布情况具有一定生态学意义。根据适用于检测"环境DNA"中某物种的引物设计验证框架,运用Primer Premier v5.0软件,在ITS序列区间内设计了适用于小菇属真菌DNA快速检测的5对引物,并对他们的特异性、灵敏度和实际运用能力进行了评估。其中,特异性较好的4对引物分别为M52-2、M22-3、M11-4和BZZ-5。通过对来自3个门、125个属的125株真菌进行特异性测试,能测出的菌株数量分别为2.4%、6.4%、4.0%和7.2%。灵敏度较好的M22-3和BZZ-5两对引物能检测到小菇属真菌菌丝在土壤中的最小浓度均为0.033%,且能成功从天麻原球茎和种子萌发菌塘土壤样本总DNA中检测出小菇属真菌的存在。结果表明,经过利用2对和多对引物,可在实际运用中快速筛选和发现小菇属真菌。     

蛹虫草遗传多样性分析

比较12个蛹虫草菌株菌丝生长特性、子实体农艺性状,分析其酯酶同工酶,研究蛹虫草菌株的遗传特性及亲缘关系.结果表明:12个蛹虫草菌株的菌丝生长速度、菌丝密度、菌丝形态有一定差异,匍匐状菌丝更有利于现蕾;农艺性状不同的菌株间其酯酶同工酶酶带也不同,子实体农艺性状差异大的菌株其亲缘关系较远.酯酶同工酶电泳技术为蛹虫草良种选育...     

六个灰树花菌株遗传多样性分析

以6个灰树花菌株(灰分、灰通、灰怀、灰1、灰4和灰高)为材料,利用酯酶同工酶、RAPD和ISSR 3种分子生物学技术对其进行比较分析。结果表明:经酯酶同工酶经聚类分析,可将6个灰树花菌株分为三大类,灰分、灰通、灰怀和灰1为一类,灰4单独为一类,灰高单独为一类;经特异性较好的RAPD和ISSR引物验证,其结果与酯酶同工酶分析的一致。     

广西野生灵芝菌株的遗传多样性分析

以10个广西野生灵芝菌株为试材,采用酯酶同工酶分析和拮抗试验的方法,研究供试菌株的遗传多样性。结果表明:广西野生灵芝具有丰富的遗传多样性。试验共检测到22条谱带,10个菌株间的谱带均有差异。各菌株间的遗传相似系数在0.36~0.95;在相似系数为0.55时,10个菌株可以分为3类,即菌株C3(红芝)为一类,菌株C9(白芝)为一类,C1、C2、C4、C5、C6、C7、C8、C10(黑芝)为一类;在相似系数为0.64时,黑芝类又可分为2类,即C1、C2、C4、C8、C10为一类,C5、C6、C7为一类。菌株C4与C10、C5与C7间的遗传相似系数大于0.90,亲缘关系很近,且这2对菌株间无拮抗,说明菌株C4与C10为同一菌株,C5与C7也为同一菌株。     

香菇辽抚4号遗传差异性分析

辽抚4号是以长白山野生香菇杂交菌株0517和栽培品种L808为亲本材料,采用单孢杂交技术选育的香菇新品种,其性状优良,已经成为辽宁省主栽品种。采用拮抗试验与酯酶同工酶技术对辽抚4号与辽宁省其它主栽品种进行遗传多样性初步比较分析,结果表明:辽抚4号在拮抗试验方面与其它10个品种拮抗强度不同;在酯酶同工酶和聚类分析图上可以看出,在相异系数为0.47时辽抚4号单独聚为一类。拮抗试验和酯酶同工酶综合分析说明辽抚4号与其它10个香菇品种具有遗传差异性,不存在同种异名现象。     

四十个野生香菇菌株遗传多样性分析

以收集引进的40个野生香菇菌株作为试验材料,通过酯酶同工酶技术和ISSR分子标记技术,对其遗传多样性进行分析。结果表明:酯酶同工酶酶谱显示野生香菇菌株不同迁移率的酶带多达15条,聚类分析表明,当遗传相似系数约达71%时,将40个野生香菇菌株分为七大类群;通过ISSR分子标记共扩增出75条清晰的DNA多态片段,大小介于0.2~4.0kb;聚类分析表明,在遗传相似系数约达63%时,将40个野生香菇菌株分为七大类群。该研究为野生香菇种质资源驯化奠定了一定的基础。     

基于拮抗及ITS序列分析的河南香菇主产区种质资源鉴定及遗传多样性分析

应用核糖体基因转录间隔区域（Internal Transcribed Spacer,ITS）序列及拮抗法对河南食用菌主产区香菇栽培菌株进行鉴定,并分析遗传多样性。以收集的41个香菇栽培菌株为样本,两两之间进行拮抗测试分析,提取DNA并进行PCR扩增、回收、测序,采用比对邻接法（neighbor-joinging,NJ）构建系统进化树。结果表明,16个差异菌株拮抗现象明显,其余菌株无拮抗或者拮抗不显著,41个香菇菌株初步分为16个不同菌株及7个不同亚种;ITS序列比对及系统发育分析将41个香菇品种聚为独立进化的4个大类,即3个不同的菌株和8个不同的亚种,种内遗传距离为0.000 0～0.006 5,与Pleurotus ostreatus(KY962509)种间遗传距离为0.374 0。综上所述,“ITS+拮抗法”结合可以明确区分菌株间拮抗、无拮抗及拮抗不明显现象基因序列的相似度、遗传距离的差异及亲缘关系的远近,为香菇品种的鉴定提供理论支撑。     

利用天麻空窝和废菌材栽培白鬼笔技术

详细地阐述利用天麻空窝和废菌材栽培白鬼笔的方法.选好白鬼笔菌株,把握好天麻采收及白鬼笔播种时间,处理好天麻废弃窝、废菌材,提高利用天麻空窝和天麻废菌材栽培白鬼笔的成功率.该方法实现天麻与白鬼笔的轮作,充分利用土地资源和木材资源,适用于南方大部分天麻产区.     

镰刀菌属遗传多样性的ISSR分析

对运用分子生物学手段研究镰刀菌属的遗传多样性进展进行了综述,并对ISSR分子标记技术在镰刀菌属遗传多样性方面的应用前景作出了分析与展望。     

基于酯酶同工酶的暗褐网柄牛肝菌遗传多样性分析

从云南、四川两省9个采样地共收集31个暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)子实体,通过组织分离获得菌株,分别利用固体、液体培养基培养菌丝体,对其进行酯酶同工酶分析,通过酶谱聚类分析研究分离菌株的遗传多样性。结果表明,固体培养的菌丝体共检出10个酯酶同工酶条带、21种酶谱类型,每个菌株具有2条~5条同工酶条带;液体培养菌丝体共检出11个同工酶条带、23种酶谱类型,每个菌株具有2条~6条同工酶条带;2种培养方式下所有菌株均检出一条相对迁移率R_f=0.13、相对分子质量为136 kDa的同工酶条带;不同培养方式相同菌株的酯酶同工酶酶谱存在较大差异。在遗传距离为0.220时,固体培养菌丝体的酯酶同工酶酶谱聚为9类,液体培养的聚为7类;在遗传距离为0.300时,2种培养方式的酶谱均聚为4类;聚类结果与地理来源无相关性。暗褐网柄牛肝菌具有丰富的遗传多样性,为后续种质资源保护、优良菌株筛选和种性鉴定等工作提供参考。     

基于ITS序列分析黑龙江东部地区市售黑木耳品种遗传多样性

黑木耳(Auric ularia auric ula-judae)是一类栽培广泛的食药兼用菌,为调查黑龙江省东部地区市售黑木耳的种质资源,收集了东宁县黑木耳批发市场黑木耳干品11个和牡丹江市售黑木耳试管菌种6株.采用组织分离方法获得菌丝体,提取菌丝体DNA,扩增ITS片段并测序.测序结果发现,经比对,17株供试黑木耳菌株ITS序列同源性均在99%~100%,其中16株的ITS序列长度为559 bp;系统发育分析表明,供试17种黑木耳菌株可分为7种不同类型,表明市售黑木耳菌种存在商品名不同但实际为同一品种的情况.以上结果为黑木耳种质资源调查及当地黑木耳品种引进提供理论指导.     

掌叶木种子萌发过程中过氧化物酶和超氧化物歧化酶同工酶分析

以掌叶木种子为试材,应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法,对掌叶木去除种皮的种子萌发过程中过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶动态变化进行了研究。结果表明:在掌叶木种子萌发初期(0~2d),种子吸水打破休眠而合成少数POD、SOD同工酶;萌发中期(3~5d),种子开始萌动,胚根逐渐伸长,SOD和POD 2类同工酶均有新酶带合成,2类酶的种类、含量迅速增加,标志着种子开始萌发;萌发后期(6~9d),胚根继续伸长,子叶逐渐展开,胚芽开始生长,SOD、POD 2类同工酶酶含量有所减弱,但各同工酶的种类不减,仍有新酶合成。不同萌发时期同工酶的变化可作为掌叶木种子萌发各阶段的重要标志。     

蜜环菌菌株遗传多样性RAPD分析

应用RAPD技术对13个蜜环菌(Armillaria mellea)菌株进行了遗传多样性分析.结果表明,在供试的60条RAPD随机引物中,有16条可扩增出清晰、稳定的DNA条带;聚类分析表明,以黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens)为外类群,在相似系数0.760水平时,可将供试的13个菌株分成四大类:第一大类为A.m0010、洋县M-8、蜜0903、A.m0005、宁强A9-1、蜜环菌A9和A.m0006,第二大类为A.m0007、A.m0004和A.m0008;第三大类为蜜金乡和蜜三明;第四大类为A.m0001.研究结果表明RAPD技术可以有效区分蜜环菌菌株并分析其遗传多样性.     

荧光AFLP和拮抗实验对灵芝菌遗传多样性研究

应用荧光AFLP和拮抗实验对26株灵芝菌种进行了遗传多样性分析。荧光AFLP分析的结果表明,采用9对EcoRI／MseI引物（其中MseI引物为FAM荧光标记物）对26个菌株进行AFLP扩增,共得到1944条清晰易辨的多态性条带。聚类分析表明,26株灵芝菌株在遗传相似系数0．28处聚为3类,分别是美国灵芝类、赤芝类和树舌类。种间的遗传相似系数变化范围在0．23—0．73。荧光AFLP分析结果与拮抗性实验结果基本一致,可见拮抗试验在灵芝亲缘关系的初步鉴定中是有效的,荧光AFLP则更能区分出亲缘关系较近的灵芝菌株。     

蜜环菌和天麻、猪苓的关系及尚未大量人工驯化原因

主要概述了蜜环菌的主要特性和其与天麻、猪苓的关系,以及蜜环菌子实体尚未大量人工驯化的原因。     

基于ITS和ISSR标记的灵芝遗传多样性和群体结构分析

以来自不同地理区域的48个灵芝种质资源为试材,采用ITS和ISSR分子标记的方法,研究了灵芝遗传多样性,以期利用遗传信息数据较理想地显示出不同灵芝菌株的遗传多样性。结果表明：通过进行ITS序列扩增测序,将48个灵芝菌株分为赤芝(35个)、无柄灵芝(11个)、四川灵芝(1个)、古巴栓孔菌(1个)。5条ISSR引物共扩增得到53条条带,多态性条带比率为96.23%,Nei′s基因多样性为0.27,Shannon′s信息指数为0.43。ISSR标记遗传相似系数约为0.70,将48个灵芝菌株分为3组,其中第1组为11个无柄灵芝,第2组为菌株29“盆景1”,其他菌株为第3组,说明2种标记结合分析能够更加准确分析不同菌株间的亲缘关系。菌株16和17同为赤芝,且ISSR分子标记遗传相似系数达0.98,推测可能为同一品种,为生产中出现的同物异名现象。该研究选取的用于PCR扩增的ISSR引物,多态性较好、稳定性较高,能有效鉴别出无柄灵芝与其他灵芝,并揭示种质的遗传多样性和群体遗传结构,可为灵芝种质资源保护及优质种质材料选育提供参考依据,以期更好地推动灵芝产业健康发展。     

桦褐孔菌菌株遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记技术对21株不同来源的桦褐孔菌(Inonotusobliquus)菌株进行DNA指纹图谱分析,结果表明:从60条引物中筛选出11条ISSR引物对桦褐孔菌基因组DNA进行了ISSR-PCR扩增,共扩增出DNA谱带183条,其中多态性谱带169条,多态位点百分率为92.3%,遗传相似系数变化范围为0.605～0.880。在遗传相似系数为0.763时,可将21个桦褐孔菌菌株划为6大类群,菌株聚类结果与菌株的地理分布有关。