青藏高原燕麦附着耐低温乳酸菌的筛选与鉴定

为筛选出能改善燕麦低温青贮发酵品质的潜力乳酸菌菌株,对青藏高原不同海拔地区种植的燕麦表面附着乳酸菌资源进行了采集,通过限制性培养方法筛选耐低温菌株,对其耐酸性和耐盐性、产酸速率和生长速度进行分析比较,并用16S rDNA序列分析方法进行了鉴定。结果表明：从不同海拔地区的燕麦植株上初步分离到232株乳酸菌,经进一步革兰氏染色、镜检观察和过氧化氢酶试验筛选,获得56株菌株,对其进行低温筛选,共得到18株耐低温乳酸菌资源,均能在5~20 ℃、3.0%和6.0% NaCl以及pH为3.0~5.0条件下生长,其中14株为同型发酵乳酸菌,4株为异型发酵乳酸菌。14株同型发酵乳酸菌中,OCPP₃、OL₃、OL₈、OL₂₅、OL₃₆、OL₅₄、OL₇₇和OL₁₂₂的产酸和生长速率较高,3株（OCPP₃、OL₃₆和OL₇₇）为戊糖片球菌,2株（OL₃和OL₅₄）为戊糖乳杆菌,3株（OL₈、OL₂₅和OL₁₂₂）为植物乳杆菌。在培养25 h后,菌株OL₇₇的OD值在所有培养菌株中最高（2.52）,其次为OL₅₄（2.50）。从耐低温、产酸速率和生长速率及多样性角度综合考虑,戊糖片球菌OL₇₇、戊糖乳杆菌OL₅₄和植物乳杆菌OL₁₂₂适宜作为青藏高原地区燕麦低温青贮的备选添加菌株。     

鸡源乳酸菌细菌素的分离筛选及鉴定

为了分离鉴定产乳酸菌细菌素,采用双层琼脂扩散法,对从健康鸡肠道内容物分离到的68株乳酸菌进行筛选,获得对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡白痢沙门菌均有抑制作用的17株乳酸菌,在排除酸、过氧化氢等因素作用后仍具有较强抑菌活性,表明发酵液中还有其他抑菌活性物质的存在,用蛋白酶处理上清液后有6株菌的抑菌效果消失,表明抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素类物质。筛选出的菌株所产抑菌物质是一种广谱细菌素,它们对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有较强抑制效果。结合形态鉴定、生理生化特性试验以及16S rRNA序列同源性分析鉴定菌株LABJN02、LABJN05、LABJN06和LABJN14分离菌为唾液乳杆菌,LABJN16为约氏乳杆菌,LABJN31为卷曲乳杆菌。细菌素作为潜在的抑菌物质,与其产生菌一起在平衡肠道菌群中具有重要意义。     

高抗菌活性乳酸菌的筛选及菌种鉴定

研究旨在筛选适用于饲料青贮的高抗菌活性乳酸菌,并进行菌种鉴定。以藤黄微球菌、沙门氏菌、大肠杆菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从玉米、水稻、蔬菜残渣、猪粪、鸡粪等样品中分离出的121株乳酸菌进行抑菌试验。通过生理生化,碳源发酵试验和16S rRNA分子鉴定及recA基因扩增对所选菌株进行鉴定。菌株ZZU 575具有较强抗菌活性,排除酸、过氧化氢干扰后,其发酵上清液对大肠杆菌抑制作用消失,但对藤黄微球菌及沙门氏菌仍有很强的抑制活性;其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失;ZZU 575被鉴定为植物乳杆菌。菌株ZZU 575在饲料青贮中具有潜在应用价值。     

抑制黄曲霉乳酸菌的筛选与鉴定

黄曲霉是玉米(Zea mays L.)青贮过程的主要污染物之一,本研究旨在从玉米青贮饲料中分离筛选出能够抑制黄曲霉菌生长的乳酸菌,为改善和提高青贮饲料品质提供优良菌种。本试验采用双层平板法,从玉米青贮饲料中筛选抑制黄曲霉的菌株,并对其进行生理生化鉴定及同源性分析,构建系统发育树,明确各菌株的分类地位。结果表明：从青贮发酵不同阶段筛选得到50株乳酸菌,其中有7株乳酸菌对黄曲霉有明显抑制作用(P<0.05),抑菌圈直径均大于3.60 cm,均为革兰氏阳性同型发酵乳酸菌,7株乳酸菌中Q39(49.40%)和Q40(49.60%)抑菌效果最好,抑菌圈直径为4.15 cm和4.17 cm,显著高于其他5株乳酸菌(P<0.05);菌株Q11,Q28,Q40,Q44与22种碳水化合物作用均呈阳性,菌株Q39和Q49与鼠李糖作用呈阴性,与松三糖反应呈弱阳性,菌株Q13相较于其他6株菌株对于碳源的利用情况较弱;经16S rDNA鉴定确定菌株Q39和Q49为植物乳杆菌,Q11,Q13,Q29,Q40,Q44为戊糖乳杆菌。菌株Q39和Q40可作为全株玉米青贮发酵的备选添加菌株。     

高寒牧区不同菊芋品种茎叶青贮的饲用价值

为筛选高寒牧区产量高、营养价值高的菊芋(Helianthus tuberosus)品种,采用随机区组设计和袋装青贮方法,研究了3个本地菊芋品种(菊芋17号、菊芋47号、菊芋119号)的利用价值和青贮潜力。结果表明,1)品种间地上生物量、株高均差异极显著(P0.01)。参试品种119号株高最高,地上生物量最大。2)品种间青贮pH和有机酸含量均呈极显著差异(P0.01)。17号pH最高,乳酸含量最低,而其余两品种间差异不显著(P0.05);119号乙酸、丙酸含量最高,分别为0.71%、0.60%。3)品种间干物质(DM)、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、粗灰分(Ash)、相对饲用价值(RFV)均差异显著(P0.05)。119号DM含量最高,为19.8%;47号CP和Ash含量最低,119号和17号CP和Ash含量均差异不显著(P0.05);119号NDF、ADF含量显著低于17号和47号(P0.05);119号RFV为170.63,较17号、47号分别高出15.8%、17.6%。综合各品种干物质产量、相对饲用价值、青贮发酵品质和营养品质,菊芋119号作为青贮饲料在高寒地区具有较大的潜在推广利用价值。     

耐低温乳酸菌的筛选鉴定及其对黑麦草青贮的影响

本研究通过限制性培养方法,以温度和pH值为限制因素筛选耐低温菌株;并利用生理生化及16S rDNA同源序列分析方法综合鉴定筛选菌;将筛选菌分别添加于多花黑麦草(Lolium multiflorum)新鲜和晾晒青贮原料中,观察其在低温条件下的青贮发酵效果。结果表明:LT1,LT2及LT3均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),可在10℃,pH4.0下生长。单纯晾晒可提高黑麦草的青贮品质。15℃条件下,无论是否晾晒,添加3株耐低温乳酸菌均可促进乳酸发酵,降低pH值,减少蛋白质或氨基酸的分解,显著提高青贮饲料的发酵品质,效果优于对照菌,而2个对照菌对晾晒的黑麦草无效果。     

长白山原始森林土壤源耐低温乳酸菌的筛选

试验旨在筛选长白山原始森林土壤中耐胁迫生长能力强、产酸能力强、体外抑菌特性好的耐低温乳酸菌,并对其相关生物学特性进行分析,为东北地区寒冬季节低温青贮提供优良乳酸菌菌种资源。采用低温（10℃）进行耐低温乳酸菌初筛,经不同pH、温度及盐度等条件下进行乳酸菌生长特性测定后,进行候选菌株的种属鉴定,并对候选菌株进行生长曲线、产酸曲线、耐酸和耐胆盐性能、抑菌性能测定及小鼠饲喂试验。结果显示,通过10℃低温条件培养,初筛获得11株能够良好生长的耐低温乳酸菌,其中C37、C34和C4212经16S rRNA测序分析后鉴定为植物乳杆菌,在培养7 d时,pH均可下降至4.25以下,均能够在4℃、45℃、pH 3.0、6.5% NaCl等条件下良好生长。生长曲线分析发现,3株乳酸菌均在4 h达到对数生长期,10~12 h后进入生长稳定期。在培养24 h时,C37、C34和C4212可将pH分别降至4.04以下,在pH 3.0条件下,C37和C4212具有较高的存活率,且对0.5%胆盐具有一定的耐受性,其存活率均在80%以上。对常见病原菌体外抑菌表明,3株乳酸菌对产肠毒素大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及肠炎沙门氏菌均有抑制作用,小鼠饲喂试验表明生物安全性好。本试验结果表明,从长白山原始森林土壤中筛选和鉴定出的乳杆菌C37、C34、C4212可作为东北地区寒冬季节低温青贮优良乳酸菌菌种资源。     

一株乳酸菌GF103的分离鉴定及体外益生效果评价

本研究旨在利用分子生物学手段鉴定乳酸菌GF103的菌种属性,并通过体外法评价其作为益生菌的益生效果,筛选出具有益生作用的乳酸菌。试验从北京市大兴种猪场附近土壤中分离得到一株能抑制病原菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的乳酸菌,编号为GF103,经16SrRNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。经体外益生效果评价得知,乳酸菌GF103在pH=3的条件下活菌数较高,能够耐受0.3%胆盐。乳酸菌GF103在人工模拟胃液中培养0.5 h活菌数不受影响(P>0.05),培养3 h活菌数降低1 log值(P<0.01);在人工模拟肠液中培养3 h活菌数不变(P>0.05)。结果表明,乳酸菌GF103具备益生菌特性,可进一步研究其作为微生物添加剂在动物上的应用效果。     

耐低温乳酸菌的分离与优化培养

从青贮玉米(Zea mays)以及新鲜泡菜中分离乳酸菌,通过初筛和复筛获得1株产酸能力较强的耐低温乳酸菌L2;对其进行了形态学描述和生理生化鉴定,对照伯杰式手册确定其种属;采用Box-Behnken实验设计进行培养条件优化实验,确定了该菌的最佳发酵条件。结果表明,该菌的最佳发酵条件为接种量3.1%、初始pH6.4、培养温度18.4 ℃。     

添加乳酸菌对营养期菊芋茎叶青贮发酵品质动态变化的影响

为研究乳酸菌对菊芋茎叶青贮品质和发酵特性的影响,以菊芋茎叶为试验材料,利用青贮发酵罐调制青贮饲料。以添加0.2%乳酸菌(T)为试验组,不添加乳酸菌(C)为对照组,分别在发酵1、7、15、30、60 d开封,分析添加乳酸菌对菊芋茎叶营养品质、发酵特性及体外产气量和干物质消化率(IVDMD)的影响。结果表明：1)盛花期菊芋茎叶DM含量为320.7 g/kg(鲜样基础),可溶性糖(WSC)含量为22.60%(DM基础),缓冲能值为50.62 mEq/kg(DM基础),较适合制作青贮饲料。2)添加乳酸菌可降低菊芋茎叶青贮饲料pH值、乙酸、丁酸和NH₃-N含量(P<0.05),增加乳酸含量、DM含量、WSC含量,提高感官品质(P<0.05),而对中性洗涤纤维(NDF)及酸性洗涤纤维(ADF)无显著影响(P>0.05)。3)随着发酵时间的延长,两处理青贮菊芋的pH值、DM和WSC含量均表现出逐渐下降的趋势,而乙酸、丁酸、NH₃-N和乳酸含量则在第7天显著增加,之后趋缓,第60天最高。4)添加乳酸菌可以增加青贮菊芋体外24 h总产气量和I...     

青贮饲料中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株筛选

为研究青贮饲料中乳酸菌的分类及形态学与生理生化特性,从苜蓿(Medicago sativa L.)及玉米(Zea maysL.)青贮饲料中分离得到5株乳酸菌。经16S rRNA序列分析,2株(GI7,GI24)为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),其余3株(GI11,GI44,GI62)分别为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);5株菌均为同型发酵乳酸菌,除弯曲乳杆菌GI44在pH3.0,4.0,8.0等条件下不能生长外,其余菌株均可在5,10,40,45℃等不同温度条件下、pH3.0~8.0等环境下以及3.0%和6.5%NaCl溶液中良好生长或微弱生长。同时,通过产酸速率和生长曲线等指标筛选出产酸较快、生长迅速的GI62可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂的优良菌株。     

地源性优势青贮发酵乳酸菌的筛选与鉴定

为了获得饲料青贮发酵优势乳酸菌株,用其研制高效青贮微生物添加剂.通过产酸和抑菌效果试验,对前期分离得到的6株地源性乳酸菌进行检测,然后采用PCR技术和最适生长条件试验,将产酸和抑菌效果均优良的乳酸菌株作进一步鉴定筛选.结果表明,6株地源性乳酸菌菌(编号为F1、F2、F3、T1、T2、T3)中的F1和T2株产酸效果最好(...     

不同乳酸菌添加剂对高寒地区玉米与燕麦青贮品质的影响

为探究不同添加剂在高寒地区燕麦、玉米青贮中的作用,以无添加剂处理为对照,研究了复合乳酸菌添加剂（ZLM)和单一乳酸菌添加剂（GN1)对燕麦和玉米青贮品质的影响。研究结果表明：不同添加剂对青贮品质的影响存在极显著差异（P <0.01）,GN1可显著提高燕麦的粗蛋白质、乳酸、乙酸与乳酸菌含量,分别提升22.75%、7.62%、62.31%、50.00%(P <0.05),对丁酸与酵母菌的含量有显著（P <0.05）的抑制作用;ZLM可显著提高玉米的粗蛋白质、乳酸、乙酸、乳酸菌含量,分别提升14.46%、12.71%、37.67%、95.92%(P <0.05);同时通过青贮的感官评价得出,燕麦添加GN1添加剂的青贮感官评价得分最优,为17分,玉米添加ZLM添加剂的青贮感官评价得分最优,为16分。     

青贮用乳酸菌的分离鉴定及生物学特性评价

本研究旨在从构树青贮、玉米青贮及饲喂构树青贮的羔羊粪便中分离鉴定可饲用乳酸菌,为开发构树青贮用乳酸菌提供试验材料。以构树青贮、玉米青贮以及饲喂构树青贮的羔羊粪便为菌株分离来源,使用含有1%碳酸钙的MRS琼脂培养基分离纯化乳酸菌,获得菌株经16S rRNA测序鉴定后对其中可饲用菌株进行生长、产酸性能的筛选,评估在pH 3.0、3.5、4.0条件下存活率和对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑制能力,并对筛选菌株进行菌株之间拮抗性测定。结果表明：获得可饲用乳酸菌共37株,包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)4种,不同的菌株在生长和产酸性能上表现出差异,在不同pH中存活率和抑菌性能也具有菌株特异性。综合比较不同菌株之间的生物学特性,植物乳杆菌GQ-3-2、GQ-3-29及GQ-5-4具有良好的生长、产酸及抑菌性能;粪肠球菌Y-3-15在发酵2 h进入对数生长期,能够为植物乳杆菌的大量繁...     

海兰褐蛋鸡盲肠中乳酸菌的分离与鉴定

试验旨在从海兰褐蛋鸡盲肠食糜中分离筛选优质乳酸菌。试验采集健康的海兰褐蛋鸡盲肠食糜,将内容物置于无菌生理盐水中,过滤后倍比稀释,采用平板划线分离法进行划线分离,反复提纯,选择疑似菌株,对其进行菌落形态观测、通过革兰氏染色镜检、16S rDNA基因序列分析鉴定,绘制24 h生长、产酸曲线。结果显示,在蛋鸡盲肠食糜中分离出两株菌,分别为唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）和敏捷乳杆菌（Lactobacillus agilis strain）,命名为JZ1和JZ2。两株菌均在10 h达到生长平台期,培养24 h后JZ1的pH值约为4.2,JZ2的pH值约为5.3。研究表明,JZ1具有生长速度快和产酸能力强的优势,耐酸（pH值3.0）、耐高温（45℃）、耐低温（15℃）和耐盐（6.5%NaCl）能力优于JZ2,更适合作为畜牧养殖中的优质菌源。     

牦牛肠道与粪便乳酸菌的分离鉴定及PCR-16SrDNA鉴定

以取自四川省不同地区的牦牛粪便、肠道内空物为材料，用MRS琼脂双层培养基进行厌氧培养，分离到50株乳酸菌，经生化鉴定为嗜热链球菌（2株）、乳酸乳球菌（1株）、保加利亚乳杆菌（5株）、嗜粪乳杆菌（10株）、嗜酸乳杆菌（8株）、乳酸乳杆菌（9株）、肠乳杆菌（10株）、弯曲乳杆菌（5株）。采用乳酸菌16 SrDNA通用引物，对分离的8种菌的16S rDNA-段可变区序列进行扩增，均得到大小约470bp的产物；扩增产物经纯化、测序后与GenBank中标准菌株的核甘酸序列比较，同源性均大于97．5％，同源性分析与生化试验的结果是一致的。证实，牦牛肠道和粪便的乳酸菌较为丰富，且乳杆菌的数量较多，这可能与牦牛复杂的生长环境有关。     

甘蔗尾中乳酸菌的分离筛选和鉴定

该研究利用传统培养法从0–90 d打包青贮发酵的甘蔗(Saccharum sinense)尾中分离得到20株乳酸菌。通过形态学观察、API 50 CH生化试剂盒鉴定及16S rDNA基因序列分析法对分离纯化的菌株进行鉴定,并测定其产酸能力。结果显示,菌株Y42是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),菌株Y32、Y59是副干酪乳杆菌(L. paracasei),其余的17株是植物乳酸杆菌(L. plantarum);分离的20株菌株在培养18 h后,菌株发酵液的pH可降低至3.70以下,Y67菌株的pH最低,为3.57。从甘蔗尾中分离的20株乳酸菌产酸能力均较强,具备良好的青贮潜力,可作为制备青贮饲料发酵剂的菌种。