种子蛋白质与品种的真实性和纯度鉴定

种子中的蛋白质组分是基因表达的产物,记录了物种在发育过程中的亲缘关系,以及种间与品种间的遗传差异.种子蛋白质的多态性是鉴别品种间遗传差异的重要标志,其差异不易受环境条件的影响,这在品种真实性和纯度检验上有着非常重要的意义.     

农作物品种真实性鉴定分子检测技术的研究进展

本文概述了分子标记技术在农作物品种真实性鉴定中的应用,以及我国主要农作物品种真实性鉴定分子检测技术研究进展。     

SSR标记鉴定玉米品种真实性及纯度的研究

[目的]探讨杂交玉米及其亲本种子真实性和纯度的分子检测判读标准。[方法]以16个玉米杂交种及其双亲和202个骨干自交系为引物筛选材料,分别构建3个杂交种和3个自交系人工群体的验证试验材料,用CTAB法提取幼苗叶片DNA,选137对SSR引物进行SSR扩增及产物检测,用于玉米品种的真实性鉴定和纯度检测,并与同批移栽至大田的种植鉴定结果相比较。[结果]从137对SSR引物中筛选出了多态性信息含量（PIC值）高、扩增条带清晰和重复性好的20对一级和20对二级核心引物,用一级核心引物对杂交种人工群体进行真实性鉴定,根据一级核心引物的扩增结果,从中选取3对（phi080、umc1196、umc2084）表现较好的引物用于杂交种人工群体的纯度检测。ssR分子检测结果与田间种植鉴定结果具有高度一致性。[结论]利用SSR标记技术鉴定玉米品种真实性和纯度的方法是可行的。     

基于SNP分子标记的玉米杂交种基因型分析与纯度鉴定

为研究SNP 分子标记鉴定玉米杂交种纯度的方法,选用甘肃省推广的6 份玉米杂交种为试验材料,通过应用SNP 分子标记的KASP 技术鉴定玉米杂交种的基因型和纯度,试验结果为95.83%-98.96%之间,说明SNP 分子标记KASP 技术结果可靠,实现了高效率、高灵活性、简便快捷、低成本的技术优势,可以作为玉米杂交种纯度检测的新方法,并在今后基于SNP 标记的玉米品种分子鉴定中发挥越来越重要的作用,能够有效为我省乡村振兴战略背景下玉米制种品种质量监测技术研究提供技术参考。     

SSR分子标记在玉米品种真实性鉴定上的应用

跟田间种植鉴定相比,SSR 分子标记鉴定品种真实性具有快速、准确、不受环境影响等特点,是打击套 牌侵权、维护品种权人合法权益的有效途径。利用20 对核心引物对玉米品种进行真实性鉴定,有9 对核心引物扩增 产物出现明显差异,11 对核心引物扩增产物没差异,表明利用SSR 分子标记鉴定玉米品种真实性是可行的。     

基于SNP标记的种子纯度高效检测分析模型的建立

单核苷酸多态性(SNP)标记具有二态性等优点,可用于种子纯度鉴定。应用焦磷酸测序技术对黄瓜SNP位点CLA13(C/G)进行了分析。结果表明,该位点在16个黄瓜杂交种中多态信息量达0.556,处于高度多态,适于其中7个品种的纯度检测;为提高种子纯度鉴定效率,引入DNA Pooling技术,建立高效率的3Pooling SNP Pyrosequencing检测分析模型,并验证了分析模型的可行性。     

应用SNP标记高效鉴定黄瓜杂交种纯度

以71个市售黄瓜品种为材料,应用高分辨率熔解曲线技术筛选可用于黄瓜纯度检验和品种鉴定的SNP位点,并通过焦磷酸测序验证,得到14个SNP位点,这些位点在71个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.079~0.528。为确保结果的准确性,利用该鉴定方法检测黄瓜杂交种F1的94粒种子,结果显示,Chr0108等6个SNP位点检测的种子纯度均为100%,且鉴定结果与SSR标记检测方法相符。表明,对供试样品同时进行这6个SNP位点的检测分析,能够更加可靠、准确、高效地鉴定其纯度,并可用于DUS测试分析,为今后葫芦科作物的品种审定和新品种保护等工作奠定基础。     

玉米品种真实性鉴定中SSR技术体系的优化

[目的]优化玉米品种真实性鉴定中的SSR技术体系。[方法]以11份玉米骨干自交系为材料,通过对影响SSR扩增质量的Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶的浓度等因素进行优化和比较,建立了适于玉米品种真实性鉴定的SSR标记技术体系,并以5个玉米杂交种为例,验证该体系在玉米杂交种真实性鉴定中的可行性。[结果]Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。dNTPs浓度为0.3 mmol/L时,扩增效果最好。引物浓度为0.2μmol/L较为适宜。TaqDNA聚合酶浓度为1.0 U时,扩增效果较好。优化后的PCR反应体系为:1×PCR缓冲液,2.5 mmol/LMg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L正、反向引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,40 ng样品DNA,总体积25μl。[结论]该研究优化的SSR技术体系可以有效地对玉米杂交种进行真实性鉴定。     

利用SSR标记鉴定当归的真实性

采集当归及近缘属种材料,从文献中搜集SSR引物,及从NCBI中下载当归EST序列并设计若干引物,采用SSR标记技术筛选可用于鉴定当归真实性的特异标记。结果表明,共合成引物75对,利用2个当归模板进行引物筛选,能够扩增出清晰条带的引物有21对,有效引物扩增率为28%,筛选出多态性引物5对,多态引物扩增率为6.7%。5对引物在36份当归及近缘属种间共检测到41个位点,平均为8.2个;多态性位点41个,多态性比率(PPB)为100%;多态信息含量为0.118 7～0.310 1,平均为0.258 8。遗传距离和相似度分析表明,当归与独活的遗传距离最近,与红柴胡遗传距离最远。当归与近缘属种间的遗传距离最小值明显大于4个产地的当归种内遗传距离最大值,因此,SSR标记可有效地鉴定区分当归与其它近缘属药材。     

山东省菜豆品种资源嫩荚品质鉴定

<正> 菜豆(俗称芸豆)是重要的蔬菜作物之一。为掌握山东地方菜豆品种的质量性状,便于选种和生产利用,我们在“七五”期间对已收集到的172份菜豆品种资源进行了嫩荚产品干物质、蛋白质和纤维素含量测定,筛选出一批质量性状较好的种质资源。     

秦优10号油菜杂交种纯度的SSR标记鉴定

SSR分子标记技术是近年来发展起来的一种新型杂交品种鉴定技术,已经在玉米、黄瓜等多种作物杂种鉴定中得到了很好的应用。然而,目前尚未见SSR标记在秦优10号杂交油菜品种鉴定方面的报导。研究首先利用SSR引物在秦优10号的亲本之间进行扩增,从中筛选到2对扩增效果好、条带清晰且差异片断在亲本间能够重复出现的引物,然后利用其对秦优10号杂种进行了分子鉴定。实验和统计学结果表明,真正的杂种F1同时表现出父母本的特征条带,而假杂种只表现出母本的带型,SSR分子标记鉴定的结果与田间种植鉴定的结果有很好的一致性和相关性,说明采用SSR标记可以对秦优10号进行快速准确的鉴定。     

利用SSR标记快速检测玉米品种纯度

为了快速检测玉米品种纯度,降低检测成本,提高检测效率及准确性,利用建立的高效、快速、经济的玉米种子纯度SSR标记检测体系,检测组配的5个强优势组合。5个玉米组合材料SSR标记检测纯度最高100%,最低97%,平均98.8%。盐溶蛋白电泳检测纯度最高98.5%,最低96.7%,平均97.7%。二者检测结果进行相关分析,差异不显著。利用SSR标记对品种纯度进行检测,能够迅速、准确地得出结果。     

水稻品种纯度鉴定方法及应用现状

品种纯度是种子质量评价的重要依据,品种纯度鉴定在种子生产、加工及经营贸易等方面具有重要意义和应用价值。介绍了水稻品种纯度鉴定的方法及应用现状,主要包括形态鉴定、化学鉴定、生理生化鉴定及分子生物学鉴定。     

利用SSR方法鉴定棉花品种纯度

以86-1号、冀棉668、新棉99B、中棉19及中棉12共5个棉花栽培品种为材料,利用15对SSR引物对其随机选择个体进行分析,确定分析品种纯度所需引物数,为棉花品种资源的保存及品种指纹图谱的建立提供理论依据。通过15对SSR引物对5个品种各选100个单株的检测和引物组合法检测,发现中棉12品种纯度最高为98%,86-1号最低为85%。引物组合法具有高效性和结果可靠性,完全可以用于检测品种纯度。     

绿豆品种联合鉴定试验与评价

为了筛选出适宜山西省绿豆产区种植的高产优质、符合生产加工需要的绿豆新品种,以中绿5号为对照,对来自全国12个省市的24个绿豆新品种(系)进行联合鉴定。结果表明,综合各因素表现较好的品种(系)依次为1009-2-5、潍绿11号、潍绿12号、宛绿2号、辽绿10L708-5和142-139,产量较对照显著增产23.1%~53.7%。     

基于SNP标记的桃矮化基因精细定位

【目的】矮化型桃树体矮小、节间短,是盆栽观赏和砧木育种的重要遗传资源。明确矮化性状形成的遗传机制并对桃矮化基因进行精细定位,是建立目标性状分子辅助选种体系和遗传改良的前提,可为有目标的选育矮化观赏桃和砧木品种奠定基础。【方法】以‘05-2-144’(‘97矮’ב鸳鸯垂枝’桃)套袋自交获得的395个后代单株构建的分离群体为材料。参考桃基因组信息并基于Sanger技术开发的SNP标记对亲本和后代单株进行分析,在扩大群体单株中进行连锁关系分析,确定连锁的SNP标记,初步定位目标基因。在定位区域内基于二代测序技术开发更多的基因型和表型一致的SNP标记,对后代单株进行基因分型,完成目标性状的精细定位。然后在精细定位区域内开发SNP标记,即杂交群体双亲均为Aa杂合基因型,对‘10-7’ב96-5-1’杂交后代89个单株进行分子鉴定,以验证基因定位结果的准确性。【结果】通过对桃单株‘05-2-144’自交后代实生苗表型鉴定表明,普通型和矮化型单株数分别为300株和95株,性状分离比例接近3﹕1(P值为0.67;χ2为0.19),符合孟德尔遗传规律,桃矮化性状受隐性单基因控制。用于分子鉴定的单株来源于‘10-7’(普通型)ב96-5-1’(普通型)杂交组合,共获得89个后代单株,其中普通型66株;矮化型23株(P值为0.854;χ2为0.034)。基于Sanger测序技术开发了SNP标记,在桃基因组数据库Pp06上25 230 425 bp和27 191 090 bp处获得了连锁的SNP标记,且目标基因位于这两个标记的右侧,初步获得了连锁的SNP分子标记。在此基础上,对亲本进行66.89X深度测序,继续开发符合Aa杂合基因型的SNP标记位点。根据参考基因组和物理距离区间共设计了15对SNP引物,其中12对引物与重测序结果中SNP的类型一致,3对引物与重测序结果中SNP的类型不一致,连锁标记的基因分型成功率为80.0%。通过基于SNP基因分型分析,最终完成了目标性状的精细定位,位点位于Pp06的28 712165 bp(引物为JXSNP-5)和28 899 661 bp(引物为JXHRM-SNP-3)之间,遗传距离分别为0.38 c M和0.13 c M,物理距离约为277 kb,精细定位区域内有54个已知转录本。在定位区域内桃基因组Pp06的28 108 436 bp处和29 247 763 bp处开发SNP标记用于杂交后代表型的鉴定,结果表明所有后代单株基因型和表型鉴定结果完全一致,鉴定准确率为100%。【结论】本研究精细定位了桃矮化基因,物理距离约为277 kb,为基因克隆、亲本早期筛选以选育矮化观赏桃和砧木品种等奠定了基础。     

应用SSR技术进行白菜品种纯度鉴定的研究

以5个白菜杂交种和8个亲本为试验材料,利用白菜单粒干种子DNA快速提取方法,筛选出能够区分5个杂交种与双亲,并具有互补带型的SSR引物,建立适于SSR分子标记检测白菜种子品种纯度的反应体系。试验结果证明这套检测技术体系可用于白菜杂交种品种纯度室内快速鉴定,从而为SSR分子标记技术在白菜种子纯度鉴定中的应用和推广打下了坚实的基础。     

主要番茄品种的分子鉴别研究

 采用了RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对22个番茄品种进行了分子鉴别的研究。通过引物筛选，选用了7个RAPD随机引物，扩增后共产生了17个多态性位点；2对RGA引物，产生了12个多态性位点；1对SRAP引物，产生了8个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现，RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。为了鉴别22个番茄品种，分析了双引物组合和三引物组合的鉴别能力，双引物组合不能完全区分22个番茄品种，利用引物BI26和PK1+PK2再加上S91或S92中的任一个就可将22个番茄品种区分开来, 并获得各品种独特的核酸指纹。另外，通过聚类分析发现，现代番茄品种之间存在着较为复杂的亲缘关系，用有限的标记位点很难取得理想的聚类结果。     

一种基于PCR的水稻SNP标记检测方法

旨在找到一种简便的SNP检测方法用于水稻种性鉴定及遗传多样性分析,本研究以245份长江中下游主推杂交水稻品种及亲本为研究材料,从1319个SNP位点中筛选出124对多态性高的位点,建立SNP的高效检测体系。选用其中的一个标记sf0141821553和SSR的标记RM7120来检测水稻的纯度,分别利用Caps-AccI标记和SNP-sf0601764762扩增分析亲本及杂交后代Wx的基因型,两者结果完全一致,说明水稻功能性SNP标记完全可用于水稻种品纯度和种真实性的鉴定。用124对位点对245份杂交水稻进行遗传多样性分析,聚类分析显示,245个品种间的遗传相似系数在0.64~0.97之间,以遗传相似系数0.64为阈值,可以将245个水稻品种分为两个类群,这两个类群分别在遗传相似系数为0.712和0.667处又可以分为两个亚群,结果表明材料间存在明显的群体结构,能精确区分待测品种的基因型以及品种间的遗传差异。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来实现SNP标记的检测,方法简便且不需要大型仪器设备和昂贵的试剂,便于实验室开展水稻品种的鉴定工作。