猪品种部ESR基因PCR—RFLP的初步研究

利用聚合酶链反应（PCR）技术,检测了不同猪品种的ESR基因     

ESR基因在猪产仔数选育中的应用研究

采用PCR－RFLPs方法对114头长白猪，101头大白猪，32头杜洛克猪的ESR基因型进行多态性检测，并对不同品种进行遗传分析，为培育高产品系的猪群奠定基础。     

猪肺炎支原体168弱毒株P46基因的克隆和鉴定

猪肺炎支原体的表面抗原基因Ｐ４６基因可引起宿主早期特异性免疫反应,其分子量约４６ｋＤａ,根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的Ｐ４６序列设计１对能扩增１３７７ｂｐＰ４６结构基因的引物作ＰＣＲ,成功地从猪肺炎支原体１６８弱毒株染色体ＤＮＳＡ中扩增出目的基因。ＰＣＲ产物克隆于ｐＵＣ１９质粒中,部分测序表明克隆基因与Ｊ株基因因同源性达９６％。     

三个外种猪原始核心群ESR及FSHβ基因多态性检测

运用某种猪场杜洛克、长白猪、大白猪育种核心群作为素材，采用聚合酶反应(polymerase chain reac-tion：PCR)，对上述三个猪种基因组DNA进行ESR和FSHβ基因的多态性分析。结果观察到上述三个猪种群体中ESR基因的A和B基因的频率分另4为0．8194和0．1806，0．7921和0．2079，0．7051和0．2949；而对于FSHβ基因，A和B基因的频率分别为0．0833和0．9167，0．2865和0．7135，0．2231和0．7769。因此，该场应侧重选留ESR基因的B等位基因，以进一步提高猪群产仔数。     

毛叶枣APETALA1基因的分子克隆初报

毛叶枣(ＺｉｚｉｐｈｕｓｍａｕｒｉｔｉａｎａＬａｍ.),亦称印度枣、台湾青枣,为鼠李科枣属的常绿木本果树毛叶枣童期特别短,无论是实生苗还是嫁接苗,均可在种植的当年开花、结果[1],这一特性在众多木本果树中是罕见的因此,研究其极短童期形成机理,克隆有关基因,将对缩短木本果树乃至其他木本植物的童期,提高有性杂交育种的效率,产生积极深远的影响笔者以毛叶枣栽培品种“高朗1号”当年嫁接树的花蕾和开放的花朵中提取的基因组ＤＮＡ为材料,用ＰＣＲ扩增方法首先进行花分生组织特征的因子ＡＰＥＴＡＬＡ1(ＡＰ1)基因[2～4]的分子克隆研究,…     

玉米抗病相关侯选基因DNA片段克隆

根据已克隆的植物抗病基因的保守序列设计引物,对玉米ＤＮＡ进行扩增、克隆并对部分克隆进行了测序。测序结果与Ｇｅｎｅｂａｎｋ进行序列同源性比较分析。其中ｐＧＥＭ２－２３号克隆与玉米中乙醇脱氢酶基因（ａｄｈ１）在１５０４７～１５２７２ｂｐ处具有８５％同源性;ｐＧＥＭ２－２５号克隆与水稻ＢＡＣ库中１０号染色体的ＯＳＪＮＢａ００５５Ｐ２４克隆片段在６７００５－６７１５１ｂｐ处具有８２％同源性。推测ｐＧＥＭ２－２３克隆为－与乙醇脱氢酶有类似作用的抗病相关侯选基因的片断。     

玉米抗病相关候选基因DNA片段克隆

根据已克隆的植物抗病基因的保守序列设计引物,对玉米DNA进行扩增、克隆并对部分克隆进行了测序.测序结果与Genebank进行序列同源性比较分析.其中pGEM2-23号克隆与玉米中乙醇脱氢酶基因(adh1)在15047～15272 bp处具有85%同源性;pGEM2-25号克隆与水稻BAC库中10号染色体的OSJNBa0055P24克隆片段在67005-67151bp处具有82%同源性.推测pGEM2-23克隆为一与乙醇脱氢酶有类似作用的抗病相关候选基因的片断.     

猪LPL基因多态性及其部分DNA片段的测序

脂蛋白脂肪酶是影响动物脂肪沉积的关键酶之一。本利用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法,对猪的ＬＰＬ基因进行了多态性分析,发现其５端区域存在ＤＮＡ多态性。脂肪型猪种梅山猪和通城猪表现出３种等位基因型（ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ）,其等位基因Ａ和Ｂ的频率分别为０．７６、０．２４和０．７７、０．２３;而瘦肉型猪种长白猪和大白猪表现出另外不同的３种等侠基因型（ＣＣ、ＣＤ、ＤＤ）,其等位基因Ｃ和Ｄ的频率分别为０．７６、０．２４和７     

豚鼠ESR2基因新的可变剪接体克隆及序列分析

[目的]对豚鼠雌激素受体2(ESR2)基因进行克隆及序列分析,并预测分析其编码的蛋白序列,为提高豚鼠产仔性能及其育种打下基础.[方法]根据GenBank已公布的豚鼠ESR2基因序列(登录号XM003472337)设计引物,以豚鼠卵巢组织总RNA为模板,RT-PCR扩增ESR2基因编码区序列(CDS),利用生物信息学分析其编码蛋白氨基酸的组成及理化性质、二级结构及与相关物种的同源性.[结果]克隆获得的豚鼠ESR2基因CDS长度为1650bp,编码549个氨基酸,比参照序列(XM 003472337)少54个碱基,是ESR基因新的可变剪接体,且第7外显子缺失;蛋白质二级结构预测结果表明,豚鼠ESR2成熟肽包含α螺旋、β折叠和无规卷曲3种二级结构元件,由于缺失18个氨基酸导致蛋白质结构发生变异;同源性分析结果显示,豚鼠与长尾龙猫、奥氏更格卢鼠、马、达马拉鼹鼠、裸鼢鼠、鼠狐猴、八齿鼠、猪和人的ESR2基因序列同源性分别为91%、87%、86%、91%、92%、86%、88%、92%和86%.[结论]克隆获得的豚鼠ESR2基因为新的可变剪接体,可作为研究豚鼠产仔性能及豚鼠育种重要的候选基因之一.     

猪Ob-Rb基因的克隆与分析

[目的]采用RT-PCR法克隆与分析瘦素受体06-Rb cDNA序列。[方法]从160日龄初情期的苏姜猪的下丘脑中提取组织总RNA．根据GenBank中猪06．RbmRNA全序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）进行cDNA扩增,获得1条343bp的片段,将PCR产物克隆于pGEM—Teasy载体后进行测序分析。[结果]用紫外分光光度计检测所提取的RNA质量,0D260／OD280=1.9,证明所提RNA的质量较好,无降解和蛋白质污染;用1％的琼脂糖检测所提RNA,有3条清晰的条带,分别是28S、18S、5S,28S与18S浓度比约为2：1．说明所提的RNA的完整性较好。所获D6-RbcDNA序列用Blast程序与在GenBank中发表的猪06-Rb cDNA序列（AF092422）比较表明,其同源性为100％,说明所扩增的序列是正确的。[结论]该研究为进一步探索Ob-Rb基因组织表达和作用机理奠定了理论基础。     

猪SIRT1基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

根据GenBank中猪SIRT1mRNA序列设计引物,使用杜大长商品猪大脑RNA经RT-PCR扩增得到猪SIRT1基因全长表达序列,通过Ω-PCR将SIRT1蛋白末端抗原表位序列插入载体pET-28a(+),在大肠杆菌中表达并纯化得到45ku大小的蛋白,以其免疫新西兰大白兔并制备出抗体滴度达212的多克隆抗体。结果表明,成功制备出可以特异性识别猪SIRT1蛋白的抗体。     

猪PILRB基因的克隆及多态性分析

Ⅱ型配对免疫球蛋白样受体(Paired immunoglobulin-like type 2 receptors,PILRs)是近年发现的免疫球蛋白超家族成员之一,含有两个亚型,PILRα和PILRβ。在机体天然免疫反应中发挥重要作用,目前猪PILRB基因基因组序列尚未得到克隆、测序。研究利用PCR方法克隆猪PILRB基因部分基因组序列并分析该区域多态性。结果表明,获得猪PILRB基因序列长1 127 bp,包含完整外显子1、内含子1、外显子2、内含子2、外显子3和部分内含子3。猪PILRB基因内含子1和内含子2为研究首次克隆,全长分别为9和314 bp。在该区域共检测到15个SNPs,其中6个为中度多态位点,共形成5种单倍体型,ACACCG为优势单倍体型。研究结果为进一步揭示这些SNPs对PILRβ功能的影响及其在猪抗病育种中的作用提供基础。     

猪FSHβ亚基和ESR基因的研究进展

在猪的高繁殖力特性研究中，证实促卵泡素（FSH）β亚基和雌激素受体（ESR）基因，是可影响产仔数1－1．5头的主基因，本文从FSHβ亚基和ESR基因的生物作用、基因结构特点及与产仔数的关系等方面作一综述。     

ESR基因在苏姜猪世代选育中的遗传变异及与猪群繁殖性状的关联

【目的】探讨苏姜猪ESR基因的PvuⅡ酶切位点多态性在世代选育过程中的遗传变异及与猪群繁殖性状的关系。【方法】采用PCR-RFLP的方法对906头、2-6世代苏姜猪ESR基因PvuⅡ酶切位点的多态性进行分析,并采用最小二乘法和单因子方差分析该位点多态性与苏姜猪群的繁殖性状的关联效应。【结果】ESR基因在苏姜猪的第2-6世代中B等位基因频率呈现出不断增加的趋势,BB基因型个体从第三世代开始出现,并且频率呈现出上升的趋势。仅考虑公猪基因型时,与配母猪总产仔数、产活仔数及死胎数之间无显著差异,但不同基因型公、母猪交配后母猪产仔数则有显著差异（P＜0.05）。【结论】ESR基因的PvuⅡ酶切位点的多态性对不同基因型公、母猪交配后母猪的产仔数有显著影响。     

IBV S1基因RT—PCR产物的分子克隆

报道了在两条引物的５‘端加有不同酶切位点的ＩＢＶ Ｄ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物与ｐＵＣ１８进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法，经回收的插入片段的分子量大小及ＨａｅⅢ酶切分析，证明获得了两株重组质粒转化子。     

猪伪狂犬病毒湖北株gE基因的克隆与序列分析

[目的]通过对从湖北省某猪场分离获得的伪狂犬病毒的gE基因克隆和测序,分析其遗传变化规律。[方法]参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies Virus,PRV)gE基因的序列设计1对引物,对PRV湖北株gE基因进行PCR扩增和序列分析,PCR产物克隆到pMD 18-T载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,与GenBank收录的国内外其他地区的标准参考毒株进行同源性分析和比较。[结果]与标准参考毒株的核苷酸序列同源性为95.0%~98.0%,进化树分析表明,PRVHBXS2014株与河南焦作株EU561349-China同属于一个分支,亲缘关系较近,但存在个别位点的基因突变。[结论]为有效防控该病提供参考。     

猪IRGC基因的克隆与序列分析

[目的]对猪IRGC基因进行序列分析,为进一步研究其功能奠定基础。[方法]采用EST信息和测序相结合的方法分离了猪IR-GC基因,并与人、牛、犬和猩猩IRGC基因进行序列相似性分析。[结果]获得了1 558 bp的cDNA序列,其登录号为EU703776,与人、牛、犬和猩猩IRGC基因的序列分别有86%、90%、91%和84%的相似性。序列分析表明,该基因编码的464个氨基酸与人、牛、犬和猩猩的相似性分别达到了90%、93%、95%和90%。[结论]成功提取了猪IRGC基因,其具有人、牛、犬和猩猩类似的结构和功能。     

中国地方猪种ESR基因PvuⅡ多态性及其与产仔数关系的研究

试验采用PCR-RFLPs方法,研究了中国成华猪、内江猪和太湖猪3个地方品种ESR基因的多态性及其与产仔数间的关系。结果表明,成华猪、内江猪和太湖猪的B等位基因频率分别为0 6389、0 6613和0 6855。在3个猪品种中,除成华猪只检测到AB、BB两种基因型外,在内江猪和太湖猪中都检测到了AA、AB和BB3种基因型。对3个品种不同基因型个体间产仔数的比较研究表明,不同ESR基因型的个体其产仔数存在一定的差异,各品种无论头胎还是经产,总体表现为BB基因型的产仔数高于AB型和AA型个体,而AB型又高于AA型个体。其中,太湖猪BB型个体头胎产活仔数(NBA)(11 13头)显著高于AB型个体(9 42头)(P<0 05)。证明B基因是对提高产仔数有利的基因。同时还分析了ESR基因PvuⅡ-RFLP的应用前景及其存在的问题。     

猪的微卫星DNA的克隆与分析

本研究应用多种DNA限制性内切酶切割基因组DNA从而浓缩微卫星DNA的方法克隆测定了8个不同位点的猪的微卫星序列,统计分析结果表明（1）猪的基因组中大于或等于40bp的微卫星序列约占基因组全部微卫星序列的10％,（2）GTG）n和（GAG）n类型的微卫星序列,在猪的基因组中分别约每250－500kb的片段中就有一个。     

猪LBP基因电子克隆及生物信息学分析

利用电子克隆技术,以人脂多糖结合蛋白（LBP）基因（NM₀04139）为种子序列,克隆猪LBP基因。结果表明:所克隆的LBP基因开放阅读框长为1 446bp,编码481个氨基酸。推导其氨基酸序列与人、小鼠、大鼠、牛、狗的相似性分别为74.2%、64.8%、63.2%、77.1%和74.6%。进化树分析显示,猪与牛LBP基因进化距离最近,与大鼠最远。生物信息学分析表明,所克隆的猪LBP蛋白分子大小为53.036 7ku,理论等电点为6.43;亚细胞定位预测猪LBP属于分泌蛋白,主要在线粒体（44.4%）和高尔基体（22.2%）中表达;N端存在信号肽,且在25～26位氨基酸可能存在裂解位点。N端的疏水性较强,且位于信号肽处,最大疏水性值为2.478,最大亲水性值为1.956;由胞外区（1～6位氨基酸）、跨膜区（7～29位氨基酸）和胞内区（30～481位氨基酸）3个部分组成的膜蛋白,有9个Ser、8个Thr和2个Tyr,可能成为蛋白激酶磷酸化的位点;LBP膜外区蛋白由多个α螺旋,膜内区由多个β折叠构成,α螺旋和β折叠平行交替排列,构成一个弯曲螺旋状结构;在33～256和271～474位氨基酸残基之间分别有1个BPI1和BPI2的保守结构域。