牛的巴贝斯虫18S rRNA基因序列比较研究

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫（包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种）的18S rRNA基因序列进行了测定与比较。自感染动物的血液中纯化虫体，提取基因组DNA，PCR扩增靶基因，然后将其连接到pGEM—T Easy载体上，进行克隆测序。研究结果显示：牛的巴贝斯虫18S rRNA基因大小在1653～1699bp之间；用所测得的和自GenBank下载的各种动物的巴贝斯虫18S rRNA基因序列构建了系统发生树，发现由刻点血蜱传播的大巴贝斯虫伊犁株与由长角血蜱传播的3株卵形巴贝斯虫存在明显差别，应属于2个独立种；由小亚璃眼蜱传播的牛巴贝斯虫未定种不同于目前已报道的任何种类，在中国应为一个新种。因而，中国存在5种牛的巴贝斯虫，即：牛巴贝斯虫，双芽巴贝斯虫、大巴贝斯虫，卵形巴贝斯虫和巴贝斯虫未定种。     

牛瑟氏泰勒虫吉林株18S rRNA基因的扩增及系统发育研究

本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列与GenBank中8种已知泰勒虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与水牛泰勒虫亲缘关系最近,与小泰勒虫亲缘关系较远。这一结果说明宿主因素对泰勒虫的基因型影响较大。     

18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用

为揭示18S rRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026) 18S rRNA基因序列,在其V4高变区设计引物.将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析.系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远.序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变.而马巴贝斯虫和泰勒虫18S rRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大.以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18S rRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一.马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属.     

东方巴贝斯虫分泌性抗原的免疫保护作用研究

体外培养获得的东方巴贝斯虫分泌性抗原经离心浓缩土用于免疫预防作用的研究。１０头从东方巴贝斯虫病非疫区购回的１岁左右的健康水牛犊分为３组,免疫组４头牛有不同和分泌性抗原和弗氏完全佐剂混全是隔二免疫二次,佐剂对照２头牛,用弗氏完全佐剂间隔二周注射二次。空白对照组４头牛不作处理。二免后一个月取液氮保存的东方巴贝斯虫含虫血进行攻击,结果发现免疫组牛获得了良好的免疫保护,除出现红细胞数及血红蛋白含量的下降外     

水牛巴贝斯虫病病原—牛巴贝斯虫体外培养的研究

本研究采用微气静相培养技术,对一株采自人工感染的去脾脏水牛犊的牛巴贝斯虫(Babesia bovis)进行了80天的连续体外培养·继代26次,累积增殖6.51×10~((?))倍;累积稀释2.19×10~(35)倍。培养24小时红细胞的染虫率为2.63±0.50％;48小时为7.18±1.39％;72小时为20.78±4 52％。最高红细胞染虫率达33.50％。体外培养的牛巴贝斯虫与采自病牛血液内的牛巴贝斯虫形态一致,说明已建立了水牛巴贝斯虫病病原——牛巴贝斯虫的体外培养。 对影响牛巴贝斯虫体外培养的几种因素进行的实验结果表明:培养液pH值显著地影响虫体的繁殖,最适的体外连续培养的pH为7.2;合适的血清浓度为40％;血清灭活后,支持牛巴贝斯虫生长繁殖的能力明显降低;脱纤血分离的血清和自然凝固血析出的血清用于培养的效果相同;RPMI-1640和TCM-199培养液支持牛巴贝斯虫生长繁殖的能力没有差异。     

牛卵形巴贝斯虫不同靶基因PCR检测方法的比较

旨在筛选出检测牛卵形巴贝斯虫特异、敏感的PCR方法。本试验以牛卵形巴贝斯虫18S rRNA、AMA-1和CCTη基因为靶基因进行PCR检测,从敏感性、特异性和临床检出率方面进行比较。结果显示,以18S rRNA基因的PCR方法敏感性最高,最小检出率为16 fg/μL;以CCTη为靶基因的PCR方法敏感性最低,检测量为1.6 pg/μL;而以顶膜抗原(AMA-1)为靶基因的PCR方法的最低检测量为160 fg/μL。三种靶基因均扩增不出牛瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫基因片段。通过60份临床血液样本的检测结果表明,以18S rRNA基因设计引物的检出率最高,为30%(18/60),明显高于以AMA-1基因25%(15/60)和CCTη基因21.67%(13/60)。本试验为卵形巴贝斯虫病的诊断提供了更为敏感、特异的检测技术。     

南京地区的巴贝斯虫病

对严重危害南京地区奶牛、水牛和犬的蜱媒疾病－巴贝斯虫病，从病原、传播媒介，发病季发，发病对象、症状、病理变化和治疗等方面作了综合的概述，分析和讨论。     

寄生于中国水牛Bubalus Vbubalis的巴贝斯虫一新种(梨形虫目:巴贝斯科)

经作者等深入研究，发现湖北省水牛巴贝斯虫病病原不是牛巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｂｏｖｉｓ与双芽巴贝斯虫Ｂ．ｂｉｇｅｍｉｎａ，而是一新种——东方巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓｓｐ．ｎｏｖ．。病牛红细胞中的虫体呈梨形（单梨形多于双梨形）、椭圆形、指环形、边虫形及杆状。以梨形虫体居多，病的初期其长度均小于红细胞半径，其平均大小为２．２×１．３μｍ，双梨形虫体尖端相连多排列成钝角或一字形，位于红细胞偏中央处。病的后期（出现虫血症后５～６ｄ）及体外培养７２ｈ，有少部份（１～２％）虫体直径大于红细胞半径。新种的传播者为镰形扇头蜱Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓ经卵传递（由第二代成蜱传给健康牛）。在成蜱的血淋巴中的虫样体（裂殖子）呈圆锥状、一端钝圆、尾部直而尖，不形成钩。新种对黄牛不能感染致病，只能使水牛致病。以１９９培养基加黄牛血清进行体外培养（微气静相培养技术）不能生长繁殖     

从日本牛体分离的卵形巴贝斯虫新种

从日本牛体分离的卵形巴贝斯虫新种译者白启作者南,哲郎,石原忠雄除冲绳本岛而外,对从日本牛体分离的巴贝斯虫未定种作了鉴定。与双芽巴贝斯虫（Ｂａｂｅｓｉａｂｉｇｅｍｉｎａ）、牛巴贝斯虫（Ｂ．ｂｏｖｉｓ）、分歧巴贝斯虫（Ｂ．ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）和大巴贝斯虫...     

Study on some molecular characterization of Babesia orientalis

The study on buffalo babesiosis indicated that its pathogen was different from other Babesia on many aspects such as morphology, transmission and pathogenicity. Therefore, it was named as a new species—Babesia orientalis. In order to prove the validity of this taxon, molecular taxonomic study on the pathogen was done in this experiment. The complete 18S rRNA gene sequence of B. orientalis was determined by PCR. It was sequenced and blasted. The results indicated that the classification of the parasite belonged to the genus Babesia. The 1700 bp complete sequence was compared with 15 other Babesia sp. available in GenBank. The data were analyzed and a phylogenetic tree was established. The results indicated that the hereditary distance of the parasite was close to that of Babesia sp. from South Africa and Babesia ovis, and the hereditary distance was far from Babesia bigemina and B. bovis.     

驯鹿18S rRNA基因的克隆测序

对驯鹿 (Rangifertarandus)的 1 8SrRNA基因片段进行了克隆测序 ,序列长度为 1 1 47bp ,并且已被发送到Genebank上 ,其登录号是AY1 45 5 2 7。     

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。     

Identification and phylogenetic analysis of Babesia parasites in domestic dogs in Nigeria

The present study examined the presence of Babesia parasites in 104 domestic dogs in Nigeria. Sequentially, Babesia parasites infecting domestic dogs underwent genetic and phylogenetic analyses. The results of nested PCR based on the Piroplasmida 18S rRNA gene illustrated that 13.5% (14/104) of the samples were positive. The obtained positive samples determined the nucleotide sequences of the 18S rRNA genes. In the genetic and phylogenetic analyses, four of five nucleotide sequences were similar to Babesia canis rossi, and one sample exhibited a close similarity to a Babesia sp. isolated from a raccoon in Hokkaido, Japan. The present study revealed the widespread presence of B. canis rossi among domestic dogs in Nigeria.     

10株火鸡组织滴虫18S rRNA基因的克隆及进化分析

应用聚合酶链反应(PCR)鉴定湖南娄底(简称HMLD1-3)、湘潭(HMXT1-2)、永州(HMYZ1-3)和宁乡(HMNX1-2)共10株火鸡组织滴虫,并用18S rRNA部分序列重构火鸡组织滴虫与其它相近原虫的种群遗传关系.作者通过PCR扩增火鸡组织滴虫虫株的18S rRNA部分序列,将PCR扩增出的片段纯化后克隆...     

狍18S rRNA基因的克隆测序

为了研究狍与鹿种其它动物之间的系统关系和进化历史 ,用所查文献引物 ,对鹿科动物狍的 18SrRNA基因序列进行基因克隆、测序 ,序列测定测得的序列长度为 115 4bp ,并与其它鹿科动物的相应序列进行比较。同时将该序列发送到Genebank上 ,其登录号是AY6 2 6 16 1。     

牛无浆体16S rRNA基因的克隆测序及分析

从自然感染无浆体的重庆黄牛无菌采集血液,提取全血基因组,用血营养菌16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1500 bp的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序,并与5条边缘无浆体、4条中央无浆体、4条牛无浆体、4条羊无浆体和3条嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因序列进行系统发育分析.结果表明所克隆的基因片段长度为1412 bp,GenBank登录号为FJ169957.序列比较结果显示,所获得的序列与Kawa-hara公布的牛无浆体日本株(AB211163)同源性最高,达到99.0%,系统发育分析发现,该序列被聚类到牛无浆体群,并与嗜吞噬细胞无浆体群聚类到一个大的分支.本文从分子水平证实重庆地区存在牛无浆体,牛无浆体与嗜吞噬细胞无浆体的亲缘关系比其他3种无浆体更近.     

菲菜氏温扬球虫18S rDNA基因的扩增与克隆分析

菲莱氏温扬球虫是鸭球虫病的重要病原之一,为了寻找种特异性的遗传标记,本研究采集广东省某鸭场的新鲜鸭粪,通过Sheather's蔗糖漂浮法收集球虫卵囊,经形态学鉴定为菲莱氏温扬球虫;提取该球虫DNA样品,经过PCR扩增,首次获得了该虫的18S rDNA基因部分片段;对该基因进行了克隆和测序,比较了该虫株与其他原虫的亲缘关系.结果显示,对菲莱氏温扬球虫序列与艾美耳科其他球虫关系较近,系统进化树分析属于艾美耳科的另一分支.表明18S rDNA基因在鸭菲莱氏温扬球虫的分类鉴定上是一种有效的分子标记.