小鼠半胚冷冻的研究

对半胚冷冻的方法和条件进行了系统研究，证明采用下述程序冷冻小鼠半胚可显著提高解决半胚的成活率：①在含10%甘油的磷酸缓冲液中平衡35-40min；②在-6.5℃7或-7℃诱发结晶；③以0.05℃/min的速度缓慢降温15min；④以0.3℃/min的速度降温至-35℃投入液氮；⑤在30-35℃的水浴中解冻；⑥在含不同浓度（6.6%,3.3%,0%)甘油和0.3mol/L蔗糖的磷酸缓冲液中平衡35-40min，却除甘油。将按上述程序冷冻-解冻的16对半胚移植后，获半胚鼠12只，其中5对为同卵双生。     

小鼠半胚冷冻的研究

对半胚冷冻的方法和条件进行了系统研究,证明采用下述程序冷冻小鼠半胚可显著提高解冻半胚的成活率:①在含10％甘油的磷酸缓冲液中平衡35～40min;②在-6.5℃或-7℃诱发结晶,③以0.05℃/min的速度缓慢降温15min;④以0.3℃/min的速度降温至-35℃投入液氮;⑤在30～35℃的水浴中解冻;⑥在含不同浓度(6.6％,3.3％,0％)甘油和0.3mol/L蔗糖的磷酸缓冲液中平衡35～40min,去除甘油。将按上述程序冷冻—解冻的16对半胚移植后,获半胚鼠12只,其中5对为同卵双生。     

奶牛和小鼠半胚低温冷冻的研究

本实验对小鼠裸半胚采取了多种不同的处理方式，其中冷冻前不培养、冷冻前经短时间培养和冷冻前经长时间培养的冷冻半胚解冻后培养发育率分别为１４．５５％、２６．６７％和６．１２％；装透明带半胚和装透明带后再用琼脂包埋半胚的解冻后培养发育率分别为５６．６７％和６４．２９％；小鼠半胚快速冷冻解冻的培养发育率为６２．００％。此外．将１０枚奶牛半胚装带、包埋、冷冻解冻后，移植给５头受体．结果有１头妊娠；奶牛整胚冷冻后分割的半胚移植妊娠率为２８．５７％（４／１４）。     

山羊半胚冷冻试验

 试验研究了诱发结晶温度、缓慢降温速度、冷冻速度、解冻温度和冷冻前短暂体外培养对半胚冷冻效果的影响，证明在下述条件下对琼脂包被半胚进行冷冻和解冻可显著提高山羊半胚冷冻效果：①在-7℃诱发结晶；②以约0.05℃/分的速度缓慢降温15分钟；③以0.3℃/分的速度降温至-35℃投入液氮；④在30-50℃的水浴中解冻；⑤在冷冻前对半胚进行2小时短暂体外培养。将按上述条件冷冻一解冻的12枚半胚移植于6只受体，结果有4只妊娠（66.7%），共产半胚羔5只（41.7%），其中包括1对异龄同卵双生羔和1对同龄同卵双生羔（33.3%）。     

小鼠桑椹胚玻璃化冷冻前后生物频谱处理对体外发育的影响

本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚,研究对其体外发育的影响,结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组,解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组（94％）比较无显著性差异（P＞0．05）。当在EFS40中处理1min的一步法冷冻组的胚胎,照射后发育率由对照组的54％提高到97％差异极显著（P＜0.01）。改用GFS40一步法冷冻的胚胎照射后的发育率也明显高于对照组（P＜0．05）。另外,对冷冻前胚胎进行照射,其解冻后发育率（87％）也得到了显著提高（P＜0．01）。     

小鼠胚胎冷冻和重复冷冻的研究

研究了不同冷冻方法对小鼠胚胎的冷冻保护效果及能否进行重复冷冻、重复冷冻后胚胎的继续发育率情况.采用乙二醇(1.8 mol/L、2.7 mol/L、3.6 mol/L、4.5 mol/L)和EFS玻璃化液(EFS20、EFS30、EFS40)对小鼠的桑椹胚和囊胚进行程序化冷冻和细管法玻璃化冷冻并再进行重复冷冻.结果表明以1.8 mol/L EG和EFS30对小鼠的胚胎冷冻效果最好,一次冷冻解冻后的发育率桑椹胚分别为92.5%和91.5%,囊胚分别为82.8%和81.3%,两种冷冻方法差异不显著(P>0.05).经1.8 mol/L EG首次冷冻再经EFS30重复冷冻的效果最好,桑椹胚和囊胚的发育率分别为53.8%和33.9%.     

家兔胚胎一步冷冻试验

自从Whittingham(1971)在小鼠胚胎冷冻上首次获得成功以后,国外在牛(1973)、绵羊(1974)、家兔(1974)、大鼠(1975)、山羊(1976)、马(1982)、羚羊(1983)、人(1983)、狒狒(1984)的胚胎冷冻方面陆继成功。在国内,对绵羊(1979)、小鼠(1980)、家兔(1980)、牛(1983)及山羊(1988)的胚胎冷冻亦相继成功。近十几年来,随着胚胎冷冻技术的不断改进和在生产上的推广应用,对冷冻程序和除去冷冻剂的方法越来越要求简化。     

移植双半胚对牛妊娠率的影响

胚胎分割是20世纪70年代末80年代初发展起来的,人工将胚胎一分为二,获得同卵双生的胚胎显微操作技术。胚胎分割不仅能增加胚胎的数量,生产同卵双生后代,还可以避免牛异性孪生雄性不育,在畜牧业、特别是养牛业的发展中具有广阔的应用前景。20世纪30年代,相关研究证明哺乳动物2细胞胚胎的每个卵裂球都具有发育成正常胚胎胎儿的“全能性”。把分割后的牛半胚进行移植,妊娠率64．3％(9／14)。1989年我国奶牛胚胎分割获得成功,鲜半胚移植妊娠率58．3％(7／12)。据报道移植全胚和半胚的妊娠率无差异。     

影响猪胚冷冻效果的若干因素的研究

屠宰（或手术）采取３￣７日龄猪胚，分别就胚胎不同发育时期，２５℃和－７℃两个冷冻起始温度，甘油、丙二醇和乙二醇３种防冻剂及６％、８％、１０％３种甘油浓度进行冷冻比较。结果表明，冷冻解冻后及解冻后在Ｍ１６＋１０％ＦＣＳ中培养２４小时的胚胎存活率均与胚胎发育时期有关。胚胎存活率以孵化囊胚最高，分别为５８．８％和５２．９％，高于校内发育（２４．４％和１７．１％）或体外培养发育（２１．４％和１７．９％）的     

小鼠卵泡卵母细胞的一步冷冻研究

通过对冷冻液和平衡时间的筛选,研究了裸露小鼠卵泡卵母细胞的一步冷冻。结果表明:当冷冻液含25％的1,2—丙二醇和0.25mol/L的蔗糖,平衡时间为10min时,冷冻效果最为有效,解冻后存活率和形态正常率分别达66.2％和58.1％.解冻后形态正常的卵泡卵母细胞可以发育成熟,成熟率为22.7％。     

冷冻液平衡时间和复温时间对小鼠胚胎冷冻解冻效果的影响

本试验以 1 5mol/L乙二醇为小鼠胚胎一步细管冷冻保护剂 ,观察小鼠胚胎在冷冻液中平衡时间和复温时间的冷冻解冻效果 .结果表明 ,以冷冻液中平衡 6 8～ 10 1min和细管解冻时在室温中停留 15s更利于胚胎在体外培养发育 ,其发育率为 86 96 %     

不同发育时期鼠胚对一步细管内冷冻一解冻耐受性的研究

本试验采用一步添加防冻剂（１０％甘油）、１２．５％蔗糖一步细管内脱除甘油，３７℃温水快速解冻法，对３９３枚处于不同发育时期的优良胚胎做了冷冻研究，旨在探索不同发育时期的胚胎对一步细管内冷冻解冻耐受性存在的差异，为哺乳动物胚胎冷冻和移植提供资料。解冻后体外培养结果表明，晚期桑椹胚（包括致密桑椹胚和致密后桑椹胚两个阶段）的抗冻能力最强，体外发育率致密桑椹胚为８０．０％（３２／４０）、致密后桑椹胚为７８．０％（３２／４１）；早期桑椹胚和早期囊胚次之，体外发育率为６２．２％（２８／４５）和６６．１％（３９／５９）；囊胚和扩展囊胚的抗冻能力最低，体外发育率仅为５１．６％（３１／６０）和５４．５％（１８／３３）。     

安哥拉山羊胚胎冷冻试验

对安哥拉山羊用总量350IUFSH按递减法处理,配种结束后第6天经子宫手术回收桑椹胚和囊胚供冷冻试验.选用1.4mol/L甘油、1.2mol/L和1.5mol/L乙二醇做防冻保护剂,快速冷冻,-36℃投入液氮保存.采用直接水浴或在空气中停留6～10s使胚胎温度回升,再水浴解冻.胚胎解冻后,用0.5mol/L蔗糖PBSS脱除保护剂,移入2%PBSS中,手术移植于发情后6d的适移受体.结果表明,1.5mol/L乙二醇具有良好的冷冻保护作用.在18～20℃空气中使胚胎温度稍回升,再水浴解冻,可降低胚胎解冻过程中热应激导致的透明带破损,移植于适移受体的妊娠率达45.5%.     

小鼠胚胎直接投入液氮冷冻保存试验

室温下,将292枚小鼠胚胎在含128.9g/L甘油PBSS(含20％犊牛血清的磷酸盐缓冲液)和含193.2g/L甘油+85.6g/L蔗糖PBSS内分别孵育片刻,装管后直接投入液氮冷冻保存。冻胚快速解冻后,用含342.3g/L蔗糖PBSS脱去甘油,用PBSS清洗后镜下观察评定,胚胎回收率为86.9％(254/292),胚胎形态正常率为77.1％(196/254)。其中部分桑椹胚经体外培养,囊胚发育率为71.4％(20/28)。将110枚冻胚移植给7只受体,3只妊娠,产仔12只(5,7),妊娠率为43％(3/7),产仔率为10.9％(12/110),其中囊胚移植1只受体妊娠产仔3只,产仔率为25％(3/12)。     

冷冻处理对香水梨香气成分的影响

采用顶空固相微萃取(HS-SPME)及气质联用(GC-MS)技术,利用面积归一化法对常温和冷冻(-20℃,60d)后酸、甜两种品系香水梨果肉的香气成分进行提取及分析鉴定。常温酸梨共检出21种香气成分,其中酯类(89.07%)、醇类(4.49%)、胺类(3.30%)的相对含量较高;冷冻酸梨共检出18种香气成分,其中酯类(82.73%)、酮类(11.75%)、醇类(2.22%)的相对含量较高;在冷冻酸梨中未检测到常温酸梨中的胺类,但检测到了常温酸梨中未发现的酮类、醋酸酐(0.77%)成分。常温甜梨共检出20种香气成分,其中酯类(88.00%)、胺类(1.98%)、醋酸酐(1.62%)的相对含量较高;冷冻甜梨同样检出20种香气成分,其中酯类(88.22%)、醇类(4.21%)、酸类(3.76%)的相对含量较高;在冷冻甜梨中未检测到常温甜梨中的胺类,但检测到了常温甜梨中未发现的醇类、酮类(1.47%)成分。两种品系梨酯类含量均很高,说明酯类可能是香水梨果肉的主要呈香物质,冷冻处理梨的香味物质较常温梨总量变化不大,并未影响香水梨风味。     

青花菜的速冻工艺

为探讨青花菜速冻工艺对其品质的影响,研究了漂烫工艺和不同速冻方式速冻对青花菜中Vc、叶绿素含量,过氧化酶及可溶性物质含量的影响。随着漂烫处理温度升高、时间延长,过氧化物酶失活率提高,但同时青花菜的褪色明显,Vc的损失也随之增大。青花菜经深冷冰箱、鼓风速冻机、液氮超速冻结3种冻结方式冷冻后,深冷冰箱速冻方式对青花菜品质变化的影响最小,表现为可溶性蛋白和可溶性糖含量损失最小。