兽药残留检测中酶联免疫试剂盒的选择原则与使用注意事项

畜产品中药物残留主要包括β-受体激动剂类、抗生素类、性激素类等药物。ELISA检测技术因其灵敏度高、特异性强、仪器设备简单、成本低、方法快速、简便等优点,成为畜产品中药物残留目前最理想的检测技术之一。为了考察试剂盒的各项指标与标示指标是否一致和能否正确使用试剂盒,本文就ELISA检测技术在畜产品中兽药残留检测试剂盒的选择原则和使用注意事项进行了归纳总结。     

ELISA法检测畜产品中克伦特罗残留

克伦特罗单克隆抗体ELISA试剂盒的应用,打破了动物源食品中β受体激动药残留的检测仅限于拥有先进仪器的检测单位能够检测的现状,使得基层单位、生产企业现场快速检测克伦特罗残留成为可能,扩大了我国兽药残留的检测范围和检测数量,使得国家兽药残留监控计划得到更好的实施。克     

ELISA试剂盒与我国动物兽药残留检测

ELISA方法以其灵敏度高、特异性强．仪器化程度低、检测速度快、样本前处理相对简单、价格低和适于开发成携带方便的试剂盒等优点．已成为国内兽药残留检测现场监控、大量样本筛查的主要方法，本文就其应用进展作一简单概述。     

兽药安全评价与残留检测技术研究获重大进展

旨在确保老百姓安全食用动物源食品(肉、蛋、奶、水产及其制品)的“十五”国家科技攻关“兽药安全评价与残留检测技术研究”课题。在科技部农社司鼎力资助下获重大进展。由中国农业大学沈建忠教授主持。中国兽医药品监察所和北京望尔生物技术有限公司等单位参加的课题组。经过三年努力，     

尿样中莱克多巴胺残留ELISA检测试剂盒的比对实验

酶联免疫吸附技术（ELIsA）由于其快速、简便、适合同时处理大量样品的特点，被国内外普遍应用于进行口一兴奋剂等各种兽药残留的筛选检测。国内目前销售的菜克多巴胺残留ELISA试剂盒主要有4种，据悉新的试剂盒还将推出。但国内外尚缺乏对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒的检测性能的权威评估。由于不同试剂盒的检测效果可能存在差异，检测试剂不统一，可能导致检测结果差异较大，将不利于政府残留监控计划的实施和企业维护自身权益。本研究拟通过比对检测试验，对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒进行评估和比对，为制定合理的莱克多巴胺残留检测技术方案和准确评判检测结果提供科学依据。     

兽药残留专家委员会第三次工作会议在京召开

全国兽药残留专家委员会第三次工作会议于2 0 0 1年 7月 2 5～ 2 7日在北京举行。会议由主任委员陈杖榴教授主持 ,农业部畜牧兽医局于康震副局长、董义春处长、中国兽医药品监察所王泰健副所长和残留专家委员会委员参加了会议。中国兽医药品监察所等制标实验室的有关专家列席了会议。会议首先由陈杖榴教授介绍了美国 FDA、新西兰等国家关于残留检测方法的批准程序 ,然后讨论了以下问题 :1 .动物源性食品中兽药残留检测方法标准编制规则及其制定程序。会议决定采用快速制标程序 ,允许建立多种检测方法 ,按 GB1 .1 - 2 0 0 0规定编制标准。…     

酶联免疫分析法及其在兽药残留检测中的应用

介绍酶联免疫分析法(ELISA)的原理及其在兽药残留检测中应用的技术要点,并对酶联免疫分析法在兽药残留检测中的应用前景作了展望。     

兽药残留免疫检测技术应用进展

免疫检测技术（Immunoassays,IAs)是利用抗原与抗体在体外的特异性反应建立起来的检测技术。兽药属于小分子物质（MW＜1000D），没有免疫原性，必须与大分子物质交联成人工抗原才能获得免疫原性。本文从兽药人工抗原的制备、抗体的制备、免疫检测方法的建立等三个方面对免疫技术在兽药残留检测的应用进行了综述，并展望了兽药免疫检测技术的发展趋势和前景。     

动物组织中兽药残留免疫学检测结果的若干影响因素

从受检样品保存条件、样品处理方法及分析方法3个方面阐述了影响动物组织中兽药残留免疫学检测结果的因素.     

兽药残留危害与检测特性

本文阐述了兽药残留的危害及兽药残留检测特性,可为兽药残留检测工作提供一定的指导作用。     

SMD残留检测的ELISA方法的建立和初步应用

用戊二醛法将SMD与载体蛋白BSA偶联 ,制备合成抗原SMD BSA作免疫原 ,同法合成包被抗原SMD OVA ,免疫健康家兔获得抗血清。分别用双向琼脂扩散试验和ELISA试验对抗血清进行定性定量测定 ,结果表明所获抗血清特异性针对SMD。用所制备的抗血清建立间接竞争ELISA方法。优化了ELISA的工作条件 ,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度 (50 μg/mL) ,抗血清最佳稀释度 (1∶1 0 0 ) ,酶标抗体的最适工作稀释度 (1∶50 0 ) ,并建立了ELISA标准工作曲线。工作曲线表明在 1 0～ 2 0 0 0 μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。该法检测底限为 63μg/L,低于国际规定残留限量 (1 0 0 μg/kg)和国内规定残留限量 (30 0 μg/kg)的要求。本法同时测定了回收率以及实际样品血清中的SMD的残留含量     

直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用

用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。     

夹心ELISA快速检测蓖麻粕中残留的蓖麻毒素

通过实验建立了蓖麻粕中残留蓖麻毒素的夹心ELISA检测方法(双抗原夹心法)。蓖麻粕样品经pH值7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)提取,使蓖麻毒素充分溶出后可直接用于ELISA检测。在本文确定的实验条件下,蓖麻粕中杂质对蓖麻毒素的检测无显著影响;方法检出限小于2.5ng/ml,以蓖麻毒素浓度(5～80ng/ml)对数做校准曲线,R2=0.995。经高压灭菌锅0.1MPa处理1h的蓖麻粕中未检出蓖麻毒素,并以此作为蓖麻粕的阴性对照,对实际样品进行了测定。     

猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白P30作为ELISA诊断抗原,进行了ELISA诊断试剂盒的建立,并对互助县猪弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的139份猪血清抗体进行检测,共检出阳性血清8份,阳性率为5.76%。结果说明互助县猪群中存在弓形虫病的感染。     

鸡传染性鼻炎ＰＣＲ和阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎ＰＣＲ试剂盒可直接检测病料中的病的ＤＮＡ、可测出１pg的DNA和１０^2-10^3个细菌，这可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的２－３倍，可重复性好，特异性为１００％，在４℃可保存１２个月，在－２０℃可保存１５个月。阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为１００％，重复性好，试剂盒在３７℃可保存７d以上，４℃可保存１０个月，－２０℃可保存１年以上，用两个诊断试剂盒检验１５５份可疑病料、２１９１份血清，ＰＣＲ的阳性率为３２．３％；Ａ型抗体阳率为２７．４％，Ｃ型抗体阳性率为１１．５％。     

酶联免疫法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留

为了建立鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）残留酶联免疫（ELISA）检测方法。将N-琥珀酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酸4-硝基苯胺（SAN）与载体蛋白偶联作为抗原免疫动物,获得抗DNC抗体,在此基础上建立了鸡肉中尼卡巴嗪残留的检测方法。人工抗原中SAN与载体蛋白的结合比约为12：1,血清效价1：2000倍,鸡肉中检测限为9．2μg／kg,添加回收率在49．4％～118％之间,批内、批间变异系数均小于20％。该方法在灵敏度、精密度和准确度方面均能满足兽药残留筛选检测要求。     

猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

以纯化的猪附红细胞体特异性抗原为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上对各反应参数进行了优化,并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被质量浓度为30 mg/L,被检血清稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作滴度为1∶4 000,底物TMB最适反应条件为室温15 min;检测血清的判定标准为D450值≥0.13定为阳性反应,D450值≤0.11定为阴性反应,0.11~0.13定为疑似反应;该试剂盒不与猪大肠杆菌病、猪弓形虫病及猪瘟等阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;在不同时间对阴阳性样品重复检测8次,阴阳性血清的D450值变异系数均未超过10%,说明该试剂盒具有良好的重复性;通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实,该试剂盒的保质期暂定为6个月;应用保存6个月的试剂盒通过对吉林省延边地区的60份猪血清样本检测,并与间接ELISA比较,其阳性符合率达100%,说明该试剂盒具有较好的稳定性。     

禽蛋和禽肉中兽药残留检测技术研究进展

随着我国家禽产业的规模不断扩大,兽药残留问题也更加严峻。兽药残留对人体与环境危害重大。现对目前禽蛋和禽肉中常见的兽药残留种类及最大残留限量进行综述,探讨了(超)高效液相色谱法、(超)高效液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法和免疫学检测法、分子印迹技术、生物芯片技术、生物传感器检测法在禽蛋和禽肉中的应用价值,以期为兽药残留检测和监管提供依据。     

兽医群体药代动力学的研究进展

群体药代动力学(PPK)和群体药效学(PPD)是近年来快速发展的药学领域。文章综述了群体药代动力学近年来的发展,包括优缺点、研究方法、参数估算以及在兽医上的应用。在研究方法中,以非线性混合效应模型法(NONMEM)应用最广,而最大期望值法(EM)也有其优点。群体药代动力学在兽医应用范围不断拓宽,已在群体药效学分析、个体化给药、临床用药和新药开发等方面发展。     

沙丁胺醇残留的酶联免疫检测方法的建立

用自主制备的沙丁胺醇特异性抗体建立了针对沙丁胺醇残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并与高效液相色谱方法进行了对比性分析。结果显示:沙丁胺醇药物残留的间接竞争酶联免疫检测体系的检测范围为1～80ng/mL,灵敏度为0.58ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率为70～99%,与盐酸克仑特罗、硫酸特布他林交叉反应率分别为107%、10%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%;采用HPLC方法进行沙丁胺醇药物残留的检测时,其检测范围为10μg/mL～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为80～95%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊与HPLC方法。