冷冻保存对藏獒犬精子超微结构的影响

为观察藏獒犬精子冷冻保存后超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的犬精子制备扫描电镜和透射电镜标本.结果表明:超低温保存造成精子结构不同程度的损伤,主要表现为精子头颈部发生部分或全部断裂,质膜消失,顶体外膜泡状化,环状沟模糊、消失或呈锯齿状,颈部肿胀,线粒体结构模糊.     

冷冻保存对猪精子DNA完整性及形态结构的影响

采集姜曲海猪精液,对其进行超低温冷冻保存,解冻后分别通过显微镜、扫描电镜和吖啶橙染色观察其形态、超微结构和DNA完整性,探讨冷冻保存对猪精子DNA完整性及形态结构的影响,同时探讨海藻糖和乳糖对冷冻精子的保护作用。结果表明,冷冻后精子形态正常率(海藻糖组和乳糖组分别为74.7%、67.6%)及DNA完整率(海藻糖组和乳糖组分别为66.4%和63.2%)均显著低于新鲜精子(95.5%和94.7%),且冷冻组间也存在显著差异(P0.05);冷冻造成精子结构不同程度的损伤,主要表现为精子头颈部发生部分或全部断裂,颈部肿胀,顶体结构损伤。     

中间球海胆精子超低温冷冻损伤的研究

应用透射电镜技术研究了超低温冷冻保存对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子超微结构的影响。结果表明：不加抗冻剂的情况下,精子线粒体和顶体结构不完整,质膜、鞭毛破损。加入保护剂后,多数精子结构完好,部分精子细胞器受损,表现为质膜褶皱或膨胀举起,与核膜的间隙明显增大;顶体肿胀、破裂或脱落;线粒体嵴间隙增大,内部出现空泡,甚至线粒体内膜破损,内嵴减少,呈弥散状;鞭毛被膜肿胀,呈波浪状,＂9＋2＂型结构模糊;细胞核结构没有明显变化。应用单细胞凝胶电泳技术研究了精子冷冻保存前后DNA的损伤。结果表明,不加抗冻剂的冷冻组及添加抗冻剂的试验组精子DNA损伤情况与鲜精相比均无显著差异（P〉0.05）,冷冻对精子结构的损伤是造成精子活力及受精率下降的主要原因。     

超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文)

[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。     

扫描和冰冻蚀刻法观察冷冻前后家兔精子超微结构的变化

以扫描和冰冻蚀刻法电镜技术观察冷冻前后的家兔精子形态变化。兔精子冷冻后,顶体赤道段及其附近首先出现肿胀,其头部质膜、顶体膜特别易于破裂和部分脱落,而顶体肿胀向前方突出的现象不常见。据冰冻蚀刻复型膜观察所见,正常兔精子头部质膜PF面,依其颗粒多少可划分为较光滑的顶脊区;颗粒最多,呈疏密相间散在分布的中央扁平区和颗粒稀少的核后帽区;并在头基部,由较粗大颗粒组成的索状物呈平行或斜行排列环绕周围。不同平面劈裂的核内染色质大多为有规则平行排列的索状结构,仅近基结部者有杂乱排列的现象。经冷冻后,顶脊区质膜PF面颗粒增加,中央区首先出现块状隆起,继而核后帽前区出现小长方型隆起,颗粒增加。头基部索状物颗粒有分散现象,并向前部迁移。此外,兔精子的颈部及相邻的中段常出现局部严重肿胀和质膜破损。     

冷休克和冷冻对猪精子微细结构和精清内酶的影响

用9头梅山、8头二花脸和4头苏白公猪的精液进行了冷休克和冷冻试验.共分原精(对照)、稀释、稀释后平衡和冷冻四种情况,10个处理组别。结果表明,冷休克使猪精于活力明显下降,并随着低温处理的延长和冷冻过程而加剧.冷休克后光镜下顶体形态主要表现为质膜膨大,顶脊突出或形成皱褶。稀释后平衡有保护顶体减轻冷休克损伤的迹象.冻后精子主要表现为顶体严重肿胀,起泡乃至破裂.原精的顶体完整率与活力呈正相关(r=0.60,p<0.01),低温处理后这两个性状的相关不显著。猪精子冷冻前后的电镜观察研究揭示,解冻后精子的主要损伤部位在顶体.冻后精子质膜严重膨大、破裂,顶体外膜肿胀,形成小泡,顶体內容散失.试验中未见到由质膜和顶体外膜共同形成的所谓“杂合泡”。冷休克和冷冻后精清内 GOT 和 LDH 活性增加,冻后精清內 LDH 为原精的1.5倍,GOT 为原精的13.6倍。低温处理对精清内 GPT 活性的影响不大。用琼脂糖凝胶电泳分离猪精清,得到5条 LDH 同功酶区带.原精冷休克后 LDH—4上升(p<0.05),解冻后精清內 LDH—4上升(p<0.01),原精经稀释平衡后,M—LDH明显升高。     

不同温度下水牛和奶牛精子微细结构与细胞外酶活性的变化

在不同低温下,就水牛和黑白花奶牛中精子的活力、顶体结构和细胞外 GOT、GPT 及 LDH 活性的变化进行了比较研究。根据海子水牛和黑白花奶牛各4头精液的测定,经冷休克及冷冻的水牛与奶牛精子活力的变化(包括解冻后活力)基本无差别,但冻后水牛精子的正常顶体率比奶牛少28.9%。50%的顶体损害均发生在冻前阶段。冷却至5℃平衡对稀释后一小时的水牛精子正常顶体率虽影响不大,但有约30%的受损害顶体变得严重肿胀,而对奶牛精子受损害的顶体并无作用。经过稀释、冷却和冷冻,水牛精清中的 GOT 活性,奶牛精清中的 GOT、GPT、LDH 活性逐渐增加,而且有显著差异,但水牛精子释放 GOT、LDH 的程度高于奶牛精子。冻后精子活力、正常顶体率、精清中酶活性之间的相关性较低,但水牛精清中 LDH 活性在冷冻期间的变化与冻后精子活力相关极显著。海子水牛冻精超薄切片的电镜观察表明,顶体外膜的“空泡化”过程明显,细胞膜本身发生膨胀与裂解,而未能证实形成“杂合泡”的现象。此外,尚见到类似“结节状”精子的顶体肿胀形态,可能意味着水牛精子顶体对低温处理的敏感性。     

超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响

为探讨超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响,对冷冻前后德国牧羊犬精子采用扫描电镜和透射电镜观察超微结构变化;采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子透明质酸酶、顶体酶和酸性磷酸酶活性进行研究。结果表明:鲜精和冻前精子形态变化不显著,而超低温冷冻后精子头部、颈部和尾部发生形态变化的精子数极显著高于鲜精和冻前精子;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性极显著降低;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性与精子活率和顶体完整率呈正相关(P0.01),与畸形率呈负相关(P0.05)。     

猪体外受精精子冷冻后的超微结构研究

猪鲜精冷冻后，虽保持了一定的活力，但受精能力明显降低。精子结构特别是顶体遭到不同程度的损伤。应用超微结构方法，观察了鲜精体外获能顶体反应（对照组）及冻精解冻（实验组）后顶体结构的改变。二者在质膜膨胀断裂、囊泡化方面，有着十分相似之处，显示冷冻解冻后，可以使有些精子产生一种假顶体反应（ＰｓｃｕｄｏａｃｒｏｓｏｍａｌＲｅａｃｔｉｏｎ），从而导致受精率下降。     

绵羊冷冻精液品质评定的研究——电子显微镜检查和生物化学的方法

精子在异常的条件下受损害的迹像之一,是其顶体完整性丧失,因此,许多学者研究了精子超微结构的改变和生理生化特性与受胎率的相关性。Foulkes(1975)以精清中透明质酸酶(Hyase)的活力评定牛精子的完整性。Cralo(1972)测定猪冷冻精液     

冷冻前后牛羊精子表面三种凝集素受体的定量研究

 用自己设计的酶标凝集素法测定了乳用牛、乳肉兼用牛、中国美利奴羊、澳洲美利奴羊新鲜和冷冻精子表面的麦芽凝集素（WGA）受体、大豆凝集素（SBA）受体及伴刀豆球蛋白A（Con A）受体的相对数量。在乳用牛精子，冷冻后WGA受体数量显著下降（P< 0.01），穿透实验表明WGA受体数量与精子的穿透率呈高度正相关（r=0.86），另两种受体的数量在冷冻后无显著变化，与精子的穿透率也无相关关系。在乳肉兼用牛精子，冷冻后数量显著下降的是SBA受体（P< 0.01）在中国美利奴羊精子是WGA受体（P< 0.05）和Con A受体（P< 0.05），而在澳州美利奴羊精子三种受体的数量均无显著变化。     

有鳞类爬行动物成熟精子超微结构的研究

目前,有鳞类爬行动物精子超微结构主要被用于科级水平系统关系的研究。介绍了国内外关于有鳞类爬行动物精子超微结构的研究现状,探讨了其成熟精子超微结构,并对该项研究的方法进行了总结和说明,提出了描述有鳞类爬行动物精子超微结构的方法,说明了有鳞类爬行动物精子超微结构与系统发育间的关系。     

低温定向冷冻法冻存食蟹猴精液的研究

[目的]使用低温定向冷冻方法建立有效的精子冻存条件。[方法]采用低温定向冷冻方法冻存食蟹猴精液,并与常规方法进行对比,探讨冷冻方法和甘油浓度对精子冷冻存活率的影响。[结果]在相同甘油浓度下,低温定向冷冻的食蟹猴精子的活力与顶体完整性显著高于常规冷冻法(P0.05),定向冷冻方法在保存食蟹猴精液效果明显优于常规冷冻方法,且甘油浓度5%时能够达到更好的冷冻效果。[结论]与常规冷冻相比,低温定向冷冻能显著提高精子存活率。在食蟹猴的精液冻存中,采用定向冷冻仪冻存精液能达到较好的冻存效果。     

Study on Semen Freezing Preservation of German Shepherd Dogs

In order to prolong semen preservation and improve pregnancy rate, semen freezing was studied with German shepherd dogs for experimental animals. The semen of four dogs was collected 40 times in four d...     

德国牧羊犬精液冷冻保存的研究

以德国牧羊犬为实验动物,用两种不同的冷冻方法和剂型对犬的精液进行冷冻,以冻精解冻后的活率作为评定指标,提高犬精液利用效率和扩大犬精液的使用范围。采集4条公犬的精液40次,分别在四种稀释液中稀释,冷冻成两种剂型,根据冻后活率比较优劣。结果表明,稀释液2颗粒冻精的冻后活率显著高于稀释液1、稀释液3和稀释液4(P0.05);对犬的精液进行炸熏法和程序冷冻法冷冻,炸熏法冷冻的精液冻后活率均显著高于程序冷冻法冷冻的精液(P0.05)。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

哺乳动物精子超微结构研究进展

精子超微结构研究是检验精液品质,揭示精子发生机制,开展受精生物学研究的一项重要内容。从哺乳动物的精子形态结构出发,综述了不同情况下精子变化的特征,论述了国内近些年来在哺乳动物精子超策结构上的一些研究进展,以及开展哺乳动物精子超微结构研究的意义。     

Influence of Gossypol on Ultrastructure and mRNA Expression of Bax and Bcl-2 in Mice Testis

The objective was to evaluate the toxicity effect of gossypol on ultrastructure of mouse testis and the expression of Bax mRNA and Bcl-2 mRNA of sperm cells in mice.Forty-eight male mice were randomly divided into four groups:control group,L-group(30 mg·kg~(-1)·d),M-group(60 mg·kg~(-1)·d)and H-group(120 mg·kg~(-1)·d)and were orally administrated with gossypol diluted by sodium carboxymethyl cellulose(SCC)or SCC(control group)for 20 days.On the 21st day,all the mice were killed and ultrastructure changes of testis were observed by TEM.mRNA expression of Bax and Bcl-2 in testis was measured by semiquantitative RT-PCR.The results showed that the testicular ultrastructure in three treated groups was gradually damaged,according to the dosage of gossypol and cellular structure disordered and organelle degenerated,manifesting vacuolation of mitochondria,expansion of endoplasmic reticulum.mRNA expression of Bcl-2 in testis significantly increased(p0.05)in L-group and then significantly decreased(p0.05,p0.01)in M-group and H-group compared with that in the control group;mRNA expression of Bcl-2 in M-group and H-group significantly decreased(p0.05,p0.01)than that in L-group and Bcl-2 mRNA expression in H-group showed a significant decrease(p0.05)compared with that in M-group.On the other hand,mRNA expression of Bax significant increased(p0.05,p0.01)in M-group and H-group than that in the control group.The ratio of Bcl-2/Bax significantly reduced(p0.05,p0.01)in the treated group than that in the control group and was found to be an obvious dose-dependent.It demonstrated that the gossypol could induce the changes on ultrastructure of mice testis,down-regulate mRNA expression of Bcl-2 and up-regulate mRNA expression of Bax,which indicated that sperm cells were induced apoptosis.