新城疫病毒广西强毒株的分离与鉴定

从广西某规模化鸡场两个鸡群病死雏鸡中分离到2株有血凝性的病毒，这2株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制和中和，经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、血清中和试验和RT-PCR检测结果，确定为新城疫病毒。2株病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为52和54h，脑内致病指数(ICPI)分别为1．975、1．875；鸡胚半数致死量(ELD50)分别为：10^-9.38／0.1mL、10^-9.68／0．1mL，实验结果证明该2株病毒为新城疫病毒强毒株。     

鸡新城疫病毒地方野毒株的分离鉴定与致病性试验

从某一疑似新城疫病例的蛋鸡群中分离到一株病毒，经HA和HI试验、血清中和试验和动物回归试验。最终确认所分离毒株为新城疫病毒。经对分离株的MDT、ICPI和IVPI等致病指数的测定，表明该毒株为新城疫强毒株。     

两株鸡新城疫病毒强毒株的分离与分子鉴定

从上海市发病鸡群中分离到两株新城疫病毒(NDV),其MDT分别为51.2 h和50.4 h,ICPl分别为1.850和1.875,均为强毒株.用RT-PCR扩增F基因cDNA片段,并将其分别克隆到pGEM-T easy载体中.序列分析结果表明,两分离株的F基因片段均为1 654 bp,编码551个氨基酸,其F蛋白的氨基酸序列同源性达100%,但与常见疫苗株的氨基酸同源性仅为78.3%～83.7%.F蛋白裂解位点序列均为112R-R-O-K-R-F117,属于基因Ⅶ型NDV.     

新城疫病毒地方株分离鉴定及部分生物学特性研究

从某养鸡场发病率为90％、病死率为80％的鸡群中分离到一株病毒。通过血凝(HA)试验、血凝抑制 (H1)试验、鸡胚中和试验及回归试验初步鉴定为鸡新城疫病毒。继而进行了鸡胚半数感染量(EID50)、最小致 死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)测定等生物学特性研究和对不同动物红 细胞的凝集试验,证明该分离株属新城疫强毒力毒株,命名为YL株。     

鸽新城疫病毒分离鉴定

从病死美国鸽脾脏分离到１株病毒,经血凝抑制试验（ＨＩ）和电镜观察,确诊为新城疫病毒（ＮＤＶ）。采用ＳＰＦ鸡胚和ＳＰＦ鸡测定其致病指数分别为：ＭＤＴ＝６１．４,ＩＶＰＩ＝２．５３,ＩＣＰＩ＝１．６８,属于强毒株,该毒株经滴鼻／点眼途径可在９６ｈ致死６周龄非免疫鸡并出现典型的新城疫病变和症状,鸽子攻毒试验同样出现了新城疫症状和病变,超过鸽子产生高滴度的ＨＩ抗体。     

新城疫强毒河南株分离鉴定及二价油乳剂灭活苗研制

从河南豫北某蛋鸡场病死鸡中分离出1株病毒，经HA试验、HI试验、回归试验确认所分离毒株为新城疫病毒，经对分离株的MDT、ICPI的测定表明该分离株为新城疫强毒。用新城疫Lasota株和分离株制备成新城疫二价油乳剂灭活苗．在河南一些种鸡场和蛋鸡场应用，获得了满意的效果，有效地控制了新城疫的发生和流行。     

鸡新城疫病毒昌黎强毒株的分离与鉴定

对昌黎县某鸡场爆发的以呼吸困难、甩头、头颈扭曲、排黄绿色稀粪、气管出血、腺胃乳头出血、肠道出血等为特征的传染病进行了流行病学调查,其发病率90%,病死率77%,用鸡新城疫I系苗紧急接种几乎无效。为查明原因,尽快研究防治对策,从病鸡群中采集了病料,进行病毒的初步分离与鉴定。该病毒能凝集鸡的红细胞,HA为8log2,这种凝集作用可被鸡新城疫标准阳性血清所抑制,证明所分离的病毒为鸡新城疫病毒。动物回归试验表明,分离毒株肌肉注射非免疫的鸡能使之发病、死亡,出现与自然发病一致的症状与病变。对分离株进行了鸡胚平均死亡时间（MDT）测定,一日龄雏鸡脑内致死指数（ICPI）的测定结果：MDT为36.0小时,ICPI为1.89。两项试验均表明,分离毒株为强毒株。     

新城疫病毒山东分离株F和HN基因克隆与进化分析

选取山东2007 ～ 2008年的5株NDV流行株,克隆融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因全长并测序.结果表明,5个分离株F基因长度为1662 bp,编码553个氨基酸.F蛋白裂解位点的氨基酸序列均为112 R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株F基因裂解位点的氨基酸序列特征.对F基因47 ～420 nt序列进行比对,发现4株鸡源毒株基因型为Ⅶd,另一鸽源毒株基因型为Ⅵ.5个分离株间F基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.8％～99.7％和94％～99.3％,与LaSota、Clone30、F48E9的氨基酸同源性分别为88.4％～89.5％、87.7％～88.8％、90.8％～92.4％.HN基因长度为1801bp,编码571个氨基酸,5个毒株均含13个半胱氨酸残基且位置保守.与LaSota的氨基酸同源性为87.2％～88.8％,与8个山东NDV流行株的同源性为89.8％～98.6 ％.     

产蛋病鸡脑组织中一株新城疫弱毒株的分离鉴定

2005年2月,湖北省某种鸡场40周龄产蛋鸡开始时出现呼吸道症状,3～5 d后产蛋下降10%,解剖发现肠道出血,疑似新城疫感染,用5倍量ND弱毒疫苗饮水免疫,2周后鸡群出现死亡,部分鸡出现神经症状,取病鸡脑组织做病原分离,接种10龄鸡胚,72～96 h后收获鸡胚尿囊液,测定血凝效价(HA)达1∶256以上,经对鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)等生物学特性试验表明,鸡脑组织分离的病毒为一株新城疫弱毒.     

新城疫野毒株的分离鉴定

2000年春从河南省不同地区的鸡群中分离到2株新城疫病毒，该二毒株经鸡胚传代培养，血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)，鸡胚平均死亡时间(MDT)试验，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定，6周龄非免疫鸡静脉接种指数(IVPI)测定及空斑试验等生物学特性试验，结果表明该二毒株为新城疫强毒株。     

鸡新城疫强度株的分离鉴定与免疫保护试验

从河北省保定地区发病鸡群中分离到2株有血凝性的分离物,其血凝作用可被NDV阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS 76所抑制,表明2株分离物均为新城疫病毒。对2株NDV的毒力指数(MDT、IC-PI、IVPI)测定结果显示:MDT分别为40.8 h和53.7 h,ICPI分别为1.96和1.86,IVPI分别为2.89和2.72,表明2株NDV均为新城疫强毒株。采用分离的HBW株制成油乳剂灭活疫苗,分别以HBW株和LaSota株的灭活苗免疫试验鸡,进行疫苗免疫效果比较和交叉免疫保护试验。结果显示:(1)分离株灭活苗免疫组鸡各个时期所产生的HI抗体效价和Lasota灭活苗免疫组鸡的抗体效价相差不明显,2组的升降规律也基本一致。(2)分离株灭活苗免疫组鸡(HI抗体效价为6log2以上时)对相同剂量F48E9标准毒株和2个分离株的攻击可给予100%的保护,Lasota灭活苗免疫组鸡(HI抗体效价为6log2以上时)对相同剂量F48E9标准毒株和2个分离株的攻击不能给予100%的保护。说明NDV不同基因型毒株间的毒力和抗原性有一定的差异。     

鸡新城疫病毒S_1山东分离株的生物学特性研究

通过SPF鸡致病性试验、MDT、ICPI、血凝解脱速率和血凝素热稳定性试验 ,结果表明 ,从山东分离的鸡新城疫病毒S1株与Lasota、F4 8E8间存在生物学差异。对S1株的鸡胚增毒量进行了研究 ,结果显示 ,10 3 5EID50 接毒量既不影响病毒的增殖量也不影响其感染性     

鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽新域疫病鸽群中分离到1株病毒，该病毒株能凝集鸡红细胞，这种凝集作用能被抗新域疫病毒阳性血清抑制。血凝素热稳定指数为1min，具有快速血凝素的解脱率，病毒对氯仿、乙醚、胰蛋白酶、盐酸(pH5.0)敏感，0.1％甲醛溶液能完全灭活病毒。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡，出现与自然发病鸽一致的症状和病变。对该分离株作进一步生物学特性鉴定，鸡胚平均死亡时间(MDT)为74．6h，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1．53。结果表明本分离株为强毒型鸽新域疫病毒。     

传染性法氏囊病病毒超强毒地方株HN01的分离鉴定及分子系统进化分析

用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)地方分离株HN01,经处理后接种SPF鸡,36h后接种鸡开始发病,发病率为100%,死亡率为70%以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化,如肌肉、腺胃、心脏出血,法氏囊水肿且多呈"紫葡萄"样外观。经血清学试验、毒力试验、鸡胚接种试验、分子生物学和电镜形态学观察均证明该分离物为超强毒株,从而证明河南省鸡群中存在不同于IBDV一般强毒株、经典株和变异株的超强毒株。通过对IBDV不同毒株VP2基因高变区氨基酸序列的聚类分析发现,HN01与华南超强毒株G9201、欧洲超强毒株UK661关系最接近,而与HK46,OKYM,D6948,UPM92-04和KS等毒株关系依次渐远。     

猪源性新城疫病毒的分离与鉴定

从猪身上分离到NDV AS株,其HA和HI效价均为1∶5 124,ELD50/0.1 ml为10-6.0。     

羊口疮病毒新疆流行株的分离鉴定及其遗传进化分析

【目的】研究羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)新疆流行株的遗传变异情况。【方法】采集新疆石河子地区疑似感染ORFV的羔羊唇部结痂病料,通过PCR扩增、Vero传代细胞分离培养、电镜观察、动物回归试验等方法,检测、分离和鉴定ORFV毒株,对分离鉴定的3株ORFV毒株保护性抗原基因B2L和F1L及毒力基因VIR、GIF和VEGF分别进行克隆、测序及遗传进化分析。【结果】从病料中分离鉴定出3株ORFV新疆流行株(ORFV-SHZ1、ORFV-SHZ2和ORFV-SHZ3)。分析结果显示,ORFV分离株保护性抗原基因B2L、F1L相对保守,B2L和F1L基因编码氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为88.6%~97.9%和86.7%~97.4%;3个毒力基因的变异相对较大,尤其是VEGF基因。VIR、GIF和VEGF基因编码氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为91.8%~97.3%,85.2%~97.0%和71.5%~98.5%。基于B2L和VIR基因的遗传进化树分析表明,ORFV-SHZ1和ORFV-SHZ2分离株均与台湾分离株的亲缘关系最近。【结论】试验分离的ORFV新疆流行株可能是由台湾株与其他毒株重组后产生的,且其毒力基因发生了较大的变异。