雏鹅病毒性肝炎的诊治

近年来,在南京及安徽省周边地区雏鹅频发病毒性肝炎,根据病鹅的临诊症状、病理变化以及流行病学调查、治疗性诊断、实验室检查结果,初步认为是由鸭肝炎病毒1型引起。     

贵州松桃县雏鸭暴发病毒性肝炎调查报告

20 0 0年 7月 12日 ,地处梵净山麓东部的贵州省松桃县普觉镇的 17户养禽户 ,从相邻的湖南凤凰县某养鸭孵化场购买肉用雏鸭 10 0 6 0只 ,2 d后各雏鸭群均突然发病和死亡 ,共发病815 0只 ,发病率为 81% ,死亡 2 30 1只 ,死亡率为 2 8.2 % ,存活余鸭 775 9只 ,出栏为 77.1% ,通过系统调查 ,综合分析 ,诊断为鸭病毒性肝炎     

一例雏鹅感染鸭病毒性肝炎的诊治

鸭病毒性肝炎(DVH)是雏鸭的一种急性致死性的传染病，它发病较急，传播较迅速，死亡率高，临诊表现角弓反张。病理变化为肝肿大、质脆、点状出血。近三、四年，在重庆市荣昌县周围15个县市屡见有雏鹅感染鸭病毒性肝炎病例．并有逐步扩展之势。现仅就一例雏鸭感染鸭病毒性肝炎病例的诊冶情况报告如下：     

国内雏鸭病毒性肝炎的研究进展

本文就国内雏鸭病毒性肝炎的病原特性、疾病诊断和防制等做一简要综述，并提出了该病今后的研究方向。     

雏鸭病毒性肝炎的研究

１９９１年从云南某地疑似鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的病雏鸭肝脏分离到一株病毒，经鸡胚染试验，电镜形态观察，中和试验鉴定，证明为鸭病毒性肝炎病毒１型（ＤＨＶ－Ｉ）毒株。该病毒对鸡胚高度适应，传递至８０代对雏鸭无致病力，经易感雏鸭连传代毒力无反强现象，故命名为ＤＨＶ－ＫＭ６０株。鸡胚测试其滴度为ＬＤ５０１０６－７．３２／０．２ｍｌ。采用ＤＨＶ－ＫＭ６０制备疫苗，经口服免疫，对１日龄雏鸭的安全性高，免疫原性     

雏鸭疑似病毒性肝炎的诊治

<正> 鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒引起的一种以肝脏出血性炎症为特征的急性高致死性传染病,主要侵害3周龄以内雏鸭,是危害雏鸭的主要传染病之一。1 发病情况河北省昌黎县樵夫山村畜主宋某2006年5月1日购进10日龄雏鸭2000只。前2天采食饮水正常,第3天发现少数病鸭打蔫、不食,并死亡20只,第4天死亡180只,离群病鸭增多,精神萎靡、部分病鸭表现剧烈抽搐、转圈、头向后仰,最后呈角弓反张样死亡。畜主来不及投药,前来本站求诊。2 病理变化10只病死鸭全部呈现角弓反张姿势,剖检可见:心肌柔软,肝肿胀、呈金黄色或土黄色,表面有大小不等的出血斑及出血点,胆囊充盈、胆汁浓稠呈黑褐色,脾肿大呈花斑状,肾微肿、瘀血,少数胰脏轻度充血,其他器官无异常。     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

鸭病毒性肝炎俗称"背脖病",它是由鸭肝炎病毒引起的一种病毒性传染病。病程极短,传播快,死亡率高,以肝炎为其主要特征。本病多发于1～5周龄的雏鸭,临床上主要表现为雏鸭突然发病,身体侧翻仰卧,头向后背,两脚痉挛后蹬,角弓反张。鸭病毒性肝炎有3种血清型,即鸭病毒肝炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,它们都能引起雏鸭病毒性肝炎,但在我国主要流行的是以血清Ⅰ、Ⅱ型为主,对养鸭业的危害极大,若防治不当,就可能时养鸭户造成巨大的经济损失。     

表达Ⅰ型鸭甲肝病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒的构建

扩增鸭瘟病毒(DPV)生长非必需区的TK基因,并在其中间引入Bgl II酶切位点,再之克隆到pUC19载体,获得载体pTK。用限制性内切酶从已有质粒pcDNA-LacZ上切下CMV启动子、多克隆位点、SV40及LacZ的完整的基因表达盒,插入到pTK的TK基因中,获得质粒pTCL。用质粒T-VP1做模板,扩增出I型鸭甲肝病毒(以前称为血清I型鸭肝炎病毒)VP1基因,克隆到质粒pTCL表达盒的多克隆位点KpnI与XbaI之间,构建含LacZ及VP1基因的转移载体质粒pT-CL-VP1。将此转移载体与鸭瘟病毒C-KCE毒株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑克隆筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的表达I型鸭甲肝病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒。     

鸭肝炎病毒地方株VP1基因的序列测定及分析

从湖北某发病鸭场分离到一株鸭肝炎病毒DHV/HB98,通过RT-PCR方法扩增该毒株的VPI基因的核苷酸序列.系统发育分析表明,DHV/HB98株的基因组序列与已发表的DHV-1 E53和ZJ的结构基因VP1亲缘关系最近,核苷酸的同源性为98.6％和98.3％,氨基酸序列的同源性为98.3％和98.7％,分析DHV/HB98与发表的变异株90D和04G核苷酸同源性为65.4％和66.7％,氨基酸同源性为69.5％和74.8％.推断该毒株属于DHV-1,与变异株是不同的血清型;DHV/HB98与DHV-1 ZJ具有相近的遗传关系,推断DHV/HB98也为强毒株.     

基因C型鸭甲肝病毒VP1基因的克隆及原核表达

为原核表达基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白,本研究通过设计套式PCR引物,RT-PCR扩增DHAV-C VP1全基因,约为720 bp,将其亚克隆至pET-32a(+)载体中构建重组表达质粒pET-VP1。将其转化E.coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达了约47 ku的重组蛋白。Western blot分析表明,该重组蛋白可以与兔抗DHAV-C阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。     

鸭肝炎病毒的分离与鉴定

1999-2008年从山东、河南、浙江、江苏、广西、山西、江西、广东、福建和辽宁等地有典型鸭病毒性肝炎症状的病死雏鸭中共分离得到22株病毒。用鸭肝炎病毒（DHV）Ⅰ型（DHV-1）抗血清和新型DHV （N-DHV）抗血清对分离的22株病毒进行血清中和试验;对22株病毒的抗原相关VP1基因进行RT-PCR扩增和测序,然后对VP1基因的核苷酸与推导的氨基酸序列进行分析。结果表明,目前我国存在DHV-1和N-DHV两种血清型。其中分离到的12株为DHV-1,10株为N-DHV。依据VP1基因序列同源性进行的血清型分型结果与根据抗原性鉴定进行的血清型分型结果一致。12株DHV-1的氨基酸序列同源性为95%左右,10株N-DHV的氨基酸同源性为98%左右;DHV-1分离株与N-DHV分离株间氨基酸同源性为72%-77%。同血清型病毒株间的VP1基因变异很小,表明DHV的抗原性稳定。     

表达Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒VP1蛋白重组腺病毒的构建

为构建表达Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-I)VP1蛋白的重组腺病毒,本实验采用RT-PCR方法扩增DHV-Ⅰ HP-1株VP1基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,并将其电转化于含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183中,通过同源重组制备含有重组腺病毒的质粒.重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞,获得重组腺病毒(rAd-VP1).间接免疫荧光和western blot鉴定结果显示,DHV-Ⅰ的VP1蛋白在重组腺病毒感染的AD293中获得表达.rAd-VP1的制备为鸭免疫实验效果评价奠定了基础.     

鸭Ⅰ型肝炎病毒VP1基因片段的克隆与表达载体的构建

为研究鸭肝炎病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达情况,根据鸭肝炎病毒核苷酸序列设计1对外引物和1对含有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的内引物。以内外引物进行PCR扩增,将所得PCR产物回收,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET-32a后构建重组表达载体,并转入宿主菌BL21和Rosseta,经酶切、PCR和测序鉴定,证明VP1基因正确插入了表达载体。用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,结果表明,VP1基因片段在大肠杆菌Rosseta和BL21中均难以表达。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达

通过RT-PCR方法克隆出GD株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入E.coli BL21(DE3),构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-VP1,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明,DHV-1的结构蛋白VP1能在E.coliBL21(DE3)中表达,获得可溶性重组蛋白,表达产物的分子质量约为69ku。     

无锡地区鹅球虫种类的调查

采用饱和盐水漂浮法对无锡地区鹅感染球虫的种类及感染率等情况进行了初步调查。结果，从无锡地区17个不同鹅群的粪样中共获得8种球虫，其中艾美属球虫有6种，分别是有害艾美球虫、棕黄艾美球虫、赫氏艾美球虫、鹅艾美球虫、法氏艾美球虫、条纹艾美球虫；等孢属球虫1种，即鹅等孢球虫；泰泽属球虫1种，即稍小泰泽球虫。     

鹅细小病毒延边株VP1基因真核表达质粒构建及其在Vero细胞中的表达

根据GenBank已发表的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列,设计并合成1对含有Xho I和BamH I酶切位点的特异性引物,以提取的GPV基因组DNA为模板,经PCR扩增得到了1 163 bp的目的片段,并将该片段克隆至pMD-18T simple载体中,再将其亚克隆至真核表达载体pVAX1中,构建重组表达质粒pVAX1-VP1。经PCR鉴定、酶切分析和序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。通过脂质体法将pVAX1-VP1转染Vero细胞,经间接荧光抗体检测,在Vero细胞表面可见特异性荧光。经RT-PCR扩增得1 163 bp的目的片段。该研究为GPV核酸疫苗的研制奠定了基础。