淡紫拟青霉几丁质酶提取工艺的优化研究

[目的]为优化淡紫拟青霉几丁质酶的提取工艺.[方法]以硫酸铵溶液为提取剂,先通过单因素试验,确定硫酸铵浓度、透析温度、透析时间和透析液酸碱度的最佳水平,然后通过正交试验确定最住浸提条件.[结果]淡紫拟青霉几丁质酶的最佳提取工艺为：硫酸铵浓度60％、透析温度30 ℃、透析时间2d,透析液pH 6,在该条件下几丁质酶酶活可达0.0534 U.[结论]该结果可以为几丁质酶的进一步开发和工业化生产提供一定科学依据.     

淡紫拟青霉产几丁质酶发酵条件的优化

[目的]优化淡紫拟青霉产几丁质酶的发酵条件。[方法]通过单图素试验和正交试验研究了淡紫拟青霉菌产几丁质酶的最适发酵条件。[结果]淡紫拟青霉菌在装液量80ml／250ml、接种量12％、初始pH6．0,培养潺度28℃及180r/min的条件下培养4d,发酵液中的几丁质酶活性达到最高,为O．115U／ml.[结论]为几丁质酶的进一步研究开发提供了理论依据。     

淡紫拟青霉FZ-0289产几丁质酶的条件优化

通过单因素和多因素正交试验对淡紫拟青霉FZ0289产几丁质酶的条件进行了研究.单因素试验表明:100目几丁质粉末对菌体产几丁质酶的诱导性最强;添加蛋白胨能使产酶高峰提前,产酶量增加.多因素正交试验表明,在添加2g·L-1100目几丁质粉末、2g·L-1蛋白胨、1g·L-1KH2PO4、0.5g·L-1MgSO4、0.2g·L-1CaCl2和0.2g·L-1NaCl的培养基中接入经马铃薯蔗糖培养基(PSA)活化10d的菌碟(接菌孢子量为6×109个·L-1,500mL摇瓶中培养体积为150mL),在28℃、150r·min-1的条件下培养3d,发酵液中几丁质酶活达到0.11U·mL-1.     

淡紫拟青霉几丁质酶及其在植物寄生线虫生防中的研究

淡紫拟青霉几丁质酶是一种对植物线虫有生防活性的酶。综合报导了国内外学对这类酶的主要性质、研究背景、生防作用等的研究结果。根据该酶的特点和作用,提出淡紫拟青霉几丁质酶为线虫防治、线虫病原真菌研究及资源调查、基因工程应用、植物病害防治等领域开辟了广阔的应用前景。     

淡紫拟青霉几丁质酶的形成条件

采用摇瓶试验，研究了淡紫拟青霉几丁质酶的形成条件，在马铃薯煎汁，玉米粉，黄豆粉３种天然基质中。以马铃薯剪汁的产酶效果最好，蔗糖，果糖，山梨糖和可溶性淀粉等碳源的添加能增加酶的产量，在氮源方面。酶母膏，蛋白胨，尿素，精氨酸等能促进酶的形成。     

淡紫拟青霉角蛋白酶特性初步研究

【目的】对淡紫拟青霉PL-HN-16角蛋白酶的酶学特性进行初步研究。【方法】以鸡毛(黄色和黑色)、鹅毛、猪毛角蛋白为发酵底物,并作为培养基中的惟一氮源,观测发酵液的变化及培养液中的角蛋白酶活性,同时以鹅毛为发酵底物,对淡紫拟青霉角蛋白酶粗酶的最适作用温度和pH进行了初步研究。【结果】PL-HN-16对鸡毛、鹅毛、猪毛均能降解,PL-HN-16角蛋白粗酶最适作用温度为40℃、最适pH为8.0。【结论】在最佳作用温度与pH条件下,PL-HN-16角蛋白酶活性为41U/mL,PL-HN-16对不同发酵底物的降解活性不尽相同。     

淡紫拟青霉多糖提取工艺研究

[目的]研究淡紫拟青霉多糖的提取工艺,为进一步开发提供参考依据。[方法]首先通过液体发酵获得淡紫拟青霉菌丝,然后以水为提取剂,在不同的提取条件下提取多糖,并测定其含量。[结果]淡紫拟青霉多糖的最佳提取工艺为：浸提温度70℃、浸提料液比1：30、浸提3次,2h/次。[结论]该提取工艺操作简便、浸提时间短、提取效率高。     

淡紫拟青霉研究进展与展望

综述了近年来国内外对淡紫拟青霉的分类、生防机制、分子生物学及次生代谢物等方面的研究概况,并对淡紫拟青霉菌的发展前景进行了展望。     

淡紫拟青霉种内RAPD多态性分析

对来自中国不同地理来源的20株淡紫拟青霉,及拟青霉属其它菌株4株进行RAPD分析,从RAPD扩增结果可知淡紫拟青霉种内具有丰富的遗传多样型。RAPD扩增指纹图谱有效地分辨不同菌株的基因型。聚类分析结果表明,菌株间差异与地理来源无关,与防治效果正相关;种内的遗传差异要大于种间的差异,说明种内可能含有隐含种;未鉴定菌株为淡紫拟青霉。     

淡紫拟青霉对烟草根结线虫病的防治效果

利用盆栽试验研究淡紫拟青霉菌剂,杀线虫剂和日晒消毒土壤对烟草根结线虫病的防治效果及其对烟草植株生长的影响。结果表明,淡紫拟青霉能有效地抑制烟草根结线虫的发生并促进植株生长,施用菌剂的植株病情指数比对照下降３４％,根部和地上部植株鲜重,叶长和株高均有明显增加。     

淡紫拟青霉防治植物线虫研究进展

淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）是防治植物线虫较有潜力的生物防治菌剂之一,对植物线虫卵具有较强的寄生能力。就其生物学特性、防治机理、环境安全性等方面进行了阐述。     

淡紫拟青霉E7菌株抗逆性研究

对淡紫拟青霉E7菌株的耐热性、耐酸碱性、耐盐性及耐化学药物特性进行测定。结果显示,在PSA培养基上,E7菌落生长和产孢的适宜温度为5～40℃,最适温度为29℃;E7菌株在pH4—13范围内的培养基上均可以生长;在40℃和50％条件下E7菌株的LT50分别为78．8和40．8min;E7菌株有较强的耐盐碱能力,对氯霉素有较强的耐受性;E7菌株对杀菌剂多菌灵、百菌清、苯醚甲环唑、除草剂百草枯以及消毒防腐剂福尔马林较敏感,其EC50分别为21、13、6、16、120μg／mL,对杀线虫剂阿维菌素和辛硫磷、杀菌剂三唑酮不敏感,其EC50分别为175、338、337μg／mL。表明淡紫拟青霉E7菌株有较强的抗逆性,对一些化学农药的兼容性也较好。     

淡紫拟青霉种内异核现象的初步研究

研究了淡紫拟青霉的不同田间分离菌株单孢子后代的异核现象。结果表明,来源于福建、江苏、安徽的4个菌株(19,20,459,641)的单孢子培养后代,在PPDA+1%活性炭的培养基上进行配接试验,仅在19和459 2个菌株间能形成异核体,其频率为12.25%;在配接试验中,2个亲和菌落交界处长出致密的菌丝簇组成的实线,可推测为异核体。从来自菌丝簇线的每个单菌丝尖端培养物中分离出30个以上的单孢子,将其分别移接到PDA平板上,将来源于单孢子的菌落与2个亲本菌落进行比较,有3个菌丝尖端培养物(459-8×19-2,459-7×19-10,459-6×19-1)重现了两亲本类型或出现了新的菌落类型,异核现象得到证实。     

用食品废弃物培养淡紫拟青霉的研究

 用剩饭和西瓜皮、菠萝皮、香蕉皮等多种果皮制成的培养基, 淡紫拟青霉都能在其上生长,它们的生物学特征与标准培养基(PDA)上长出的生物学特征比较相差无几, 其中以西瓜皮最佳, 表明利用果皮做原料生产淡紫拟青霉菌剂具有巨大潜力.用淘米水代替玉米粉、麦皮进行振荡培养, 制成的菌剂孢子密度达到每g样品10⁸-10⁹数量级,完全符合菌剂质量标准,甚至超过用常规培养料制成的菌剂.用淘米水振荡培养、剩面条固体发酵的菌剂,以011g,012g,014g和018g分别拌入灭菌土,各接种306粒根结线虫卵, 各移入2株番茄苗, 经50d后翻盆解剖根系, 施018g菌剂的虫瘿、雌虫和卵块均明显减少, 证明用食品废料制造的淡紫拟青霉菌剂确是一种优良的生物杀线虫剂.     

淡紫拟青霉对根结线虫的防治作用

结果表明:淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus菌株FZ0289对根结线虫卵的侵染率达98.2%;FZ0289麦粒菌剂和麸皮菌剂对黄瓜根结线虫病的防治效果分别为77.7%和73.3%,增产19.7%.     

蝉拟青霉几丁质酶基因片段的克隆及其序列分析

通过对蝉拟青霉进行诱导产几丁质酶,采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定其酶活性,发现：有2株不同采集地点的菌株酶活力较强。根据Genebank中多种真菌几丁质酶氨基酸序列的保守区设计引物,以蝉拟青霉基因组DNA为模版,通过PCR扩增获得2个菌株的特异性DNA片段：其中,GZAAS10．0604为563bp,含有3个内含子;GZAAS10．0601为398bp,无内含子。其对应的氨基酸序列均具有几丁质酶18家族的2个高度保守的活性区域：几丁质结合区域SXGG和酶作用活性位点DXXDXDXE。     

淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶和蛋白酶活性及致病力的变化

【目的】明确食线虫真菌淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶和蛋白酶活性和致病力的改变。【方法】测定淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶和蛋白酶活性,及对南方根结线虫的致病力,分析它们与致病力的相关性。【结果】结果表明:14个淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶活力和蛋白酶活力由于T-DNA的插入均受到了不同程度的影响。对南方根结线虫卵的寄生率与原始菌株也存在分化,筛选获得了1株致病力增强的突变体BN-11和11株致病力明显下降的菌株;通过分析,这14个淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶和蛋白质酶的活性与寄生率之间不呈正相关性。【结论】获得了淡紫拟青霉T-DNA插入突变体几丁质酶和蛋白质酶的活性与致病力变化的证据,有助于淡紫拟青霉致病机制分析及致病相关基因的克隆。     

淡紫拟青霉产类植物生长素的研究

【目的】研究淡紫拟青霉PL-HN-16对植物生长的促进作用,以期能发现一种新的类植物生长素。【方法】以菜心种子为试验材料,用乙醚萃取PL-HN-16发酵液,对发酵液和萃取液分别进行生物活性测定;同时用硫酸铵分级沉淀发酵液中的蛋白,SDS-PAGE法分析有活性的蛋白组分。【结果】淡紫拟青霉发酵液32倍稀释处理对菜心种子生长有显著促进作用;经乙醚萃取后的发酵液依然有活性,乙醚萃取液则对菜心种子生长有显著抑制作用;45%和60%硫酸铵饱和度沉淀的蛋白对菜心种子的生长具有明显的促进作用。经SDS-PAGE分析,目的蛋白分子质量在28~45 ku,推测对植物生长具有主要活性作用的蛋白分子质量约为36 ku。【结论】淡紫拟青霉产生的类植物生长素为一种水溶性蛋白质,其分子质量约为36 ku。     

淡紫拟青霉代谢产物生物测定和生理活性物质分析

淡紫拟青霉对根结线虫和大豆胞囊线虫的卵具有较强的寄生能力,其代谢产物对多种作物有生理活性。试验用淡紫拟青霉培养液处理大豆,水稻,小麦种子及番茄幼苗,测定其调控作用。同时采用柱层析等方法,提取培养液中有效成分。