不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对雏鸡致病性比较研究

为研究不同禽源贝氏隐孢子虫对雏鸡的致病性差异,人工感染3日龄雏鸡鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源贝氏隐孢子虫.结果发现,各感染组雏鸡潜隐期均为4d,显露期为11～18 d,均未发生死亡,但其增重均受影响.鸡源C.baileyi(林州株)、C.baileyi(郑州株)和鸭源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡临床症状较为明显,发病率较高,分别为71.4％、85.7％和77.1％,剖检可见气管有较多粘液分泌物,法氏囊粘膜充血肿胀,平均增重较不感染对照组分别减少34.5、53.1和19.7 g；鹌鹑源C.bailey(武陟株)和白文鸟源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡仅部分表现轻微临床症状,发病率分别为31.4％和28.6％,平均增重较不感染对照组分别减少39.7和43.1g.结果表明不同禽源C.bailey对雏鸡均有不同程度的致病性,以鸡源和鸭源C.baileyi致病性较强.     

2株贝氏隐孢子虫鸡源分离株对雏鸡的致病性比较

为了解不同地区鸡源贝氏隐孢子虫的致病特点,对收集到的郑州、林州两地区鸡源贝氏隐孢子虫卵囊经雏鸡传代扩增纯化后,分别以1×106个卵囊量接种3日龄罗曼公雏鸡,从其排卵囊情况、临床症状和病理学变化比较了2个分离株的致病情况。结果表明:2个隐孢子虫分离株均主要引起雏鸡呼吸道症状和法氏囊炎病变;接种雏鸡均于感染后第4天开始排卵囊,林州株和郑州株排卵囊持续期分别为23 d和13 d;排卵囊高峰期均为感染后第8~12天。雏鸡感染2个地区鸡源贝氏隐孢子虫分离株后,排卵囊量及排卵囊规律存在差异。     

鸭源贝氏隐孢子虫对鸡的致病性

设计3个不同剂量的鸭源隐孢子虫试验感染2日龄雏鸡,通过临床症状、增重、排卵囊规律和法氏囊指数及寄生器官组织扫描电镜观察,证实贝氏隐孢子虫160万个卵囊感染即可引起明显的呼吸道症状,发病鸡增重显著降低,法氏囊严重萎缩。贝氏隐孢子虫致病程度和排卵囊规律与感染剂量相关,主要病变表现呼吸道病变和法氏囊炎症。     

贝氏隐孢子虫不同感染剂量对樱桃谷鸭的致病性

为了确定贝氏隐孢子虫对鸭的致病性,本试验分为2×105、4×105、8×105、16×105、32×105、64×105个卵囊剂量组,实验感染2日龄樱桃谷品种雏鸭。从感染鸭的排卵囊情况、临床症状、组织病理学变化、病理形态学变化比较了不同剂量组的致病情况。结果表明,贝氏隐孢子虫主要引起呼吸困难症状,气管炎和法氏囊炎病变。其致病性与剂量有明显的相关性。贝氏隐孢子虫有较强致病性,而且病程较长,但其致死率较低。     

贝氏隐孢子虫对丝毛乌骨鸡的致病性试验

２ 日龄丝毛乌骨鸡经口接种贝氏隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｂａｉｌｅｙｉ）卵囊２×１０６ 个／只,潜隐期４ｄ,排卵囊开放期１８ｄ,排卵囊高峰期为感染后（ Ｐ Ｉ Ｄ）７～１４ｄ。呼吸道症状出现于 Ｐ Ｉ Ｄ１０,死亡率为１３３％ （２／１５）。扫描电镜观察发现气管纤毛脱落,寄生有各阶段发育虫体及杆形细菌和渗出的红细胞;法氏囊也寄生有大量虫体,粘膜上皮细胞肥大,微绒毛脱落, Ｐ Ｉ Ｄ２０ 在法氏囊粘膜表面见有许多虫体逸出后留下的带虫空泡。试验证明丝毛乌骨鸡为贝氏隐孢子虫的新宿主。使用扫描电镜系统观察了贝氏隐孢子虫感染引起的组织形态学病理变化。     

猪源隐孢子虫对仔猪致病性研究

为确定我国猪源隐孢子虫的危害性，采用光镜、扫描电镜和透射电镜等技术研究了猪源隐孢子虫sucp株对5日龄仔猪的致病性。结果：感染仔猪出现水样腹泻和脱水，粪便中混有肠黏膜碎片，潜伏期为3～5d，排卵囊持续期33-43d，虫体寄生于盲肠、结肠和直肠，并且盲肠和结肠杯状细胞增生，有炎性细胞浸润，结肠和直肠黏膜微绒毛萎缩、倒伏和脱落。结果表明sucp株对新生仔猪有一定致病性。     

鹌鹑源火鸡隐孢子虫生物学特性研究

利用鹌鹑源火鸡隐孢子虫（Cryptosporidium meleagridis）分别感染雏鸡、雏鸭、雏鸵鸟和小白鼠研究其致病性.结果能成功感染雏鸡、雏鸭和小白鼠,但不能感染雏鸵鸟.2个感染组雏鸡主要在感染后第3天引起雏鸡强烈的腹泻症状,但非免疫抑制组比免疫抑制组症状稍轻,此外,免疫抑制组的鸡出现了多个排卵囊高峰;感染相同剂量的2个试验组雏鸭的排卵囊显露期均较雏鸡短,非免疫抑制组雏鸭的排卵囊规律呈一过性,2组雏鸭均未出现明显的临床症状;免疫抑制组小白鼠出现多个排卵囊高峰,显露期持续24 d,正常组小白鼠的排卵囊规律呈一过性.根据肠黏膜涂片,抗酸染色观察发现主要虫体寄生于雏鸭的回肠;通过病理组织学切片和电镜观察发现虫体主要寄生于雏鸡的回肠和小白鼠的十二指肠,但均主要引起肠绒毛的大量脱落,黏膜上皮细胞肿胀,炎性细胞浸润.试验证明鸭为鹌鹑源C.meleagridis的新宿主,但敏感性较低;鹌鹑源C.meleagridis不感染非洲雏鸵鸟.发现鹌鹑源C.meleagridis在鹌鹑、鸡和鸭体内寄生部位与小鼠体内寄生部位有明显差异.     

雏鸡贝氏隐孢子虫人工感染试验

作者对69只2日龄雏鸡进行了隐孢子虫的人工感染试验。试验分3组,每只口服贝氏隐孢子虫钝种卵囊分别为1.73×10~7、8.5×10~6和1.94×10~6个。于接种后第3天粪便中首次出现卵囊,第9—17天为排卵囊高峰期,排卵囊可长达35天。人工感染隐孢子虫后雏鸡的严重发病与死亡多见于接种后第14—21天。临床上出现严重的呼吸道症状。主要表现为:呼吸严重困难、气喘、伸颈、张口呼吸和打喷嚏。病鸡精神沉郁,眼半闭,翅下垂,站立不稳或独卧一侧,严重者则饮、食欲废绝,并于发病后2—3日内死亡,共死亡35只,死亡率为50.8%。病理剖检可见喉头与气管水肿,渗出物增多。有时气管内可见到块状的纤维素性渗出物,严重者在气管内形成一灰白色的凝固物。肺充血发炎、表面湿润,泡沫状渗出物增多。肺腹侧多有灰白色硬斑,气囊混浊,渗出物增多。肾灰白色肿胀。刮取气管及法氏囊粘膜作成涂片,经染色后可见到大量各发育期的隐孢子虫虫体。病理组织学观察可在喉头、气管、肺脏、直肠、泄殖腔及法氏囊粘膜表面找到大量的球形虫体。用透射电镜及扫描电镜观察发现鸡隐孢子虫均寄生在粘膜上皮细胞的表面,并不进入上皮细胞内部。在虫体寄生部位的粘膜绒毛层受害严重,大量上皮细胞脱落和破损,呼吸道有明显的炎性病变。     

贝氏隐孢子虫在丝毛乌骨鸡体内发育的扫描电镜观察

使用扫描电镜观察了贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi) 在丝毛乌骨鸡体内内生发育虫体的三维形态。大量球形虫体嵌于微绒毛丛中。滋养体呈球形,直径1.54～1.76 μm 。裂殖体呈桔瓣形或旋涡形排列,直径2.4～3.0 μm ,内含8 个香蕉形裂殖子,大小为4 μm ×0.65 μm 。成熟大配子体直径为3.5 μm 。带虫空泡内、外侧基部均可观察到梳状结构,根据带虫空泡的结构将其分为2 类,其中一类为裂殖子或小配子的带虫空泡,另一类为卵囊的带虫空泡。     

Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR（Real—timeqPCR）方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBRGreenreal—timeqPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好（R2=0．998）,卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real—timeqPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。     

不同宿主源禽腺病毒分离株对雏鸡的致病性比较

鸭腺病毒1型病毒可作为优良的重组疫苗载体。为了筛选低毒力的鸭腺病毒1型病毒毒株,分别用病毒QU株和HS株对20日龄SPF鸡进行攻毒,4d后检测其血清生化指标的变化情况并与对照组进行比较,同时取其肝脏进行病理组织学观察。发现QU组的各项生化指标均没有明显变化,肝组织形态与对照组相同;HS组的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、胆碱脂酶和血淀粉酶显著降低,总蛋白、白蛋白和球蛋白极显著降低,并且肝细胞大量坏死。结果表明,HS株病毒主要引起鸡肝脏和胰腺的损伤,具有较强的致病性;QU株病毒对雏鸡的生理状况几乎没有影响,毒力很弱,适合作为重组疫苗载体。     

PCR-RFLP鉴定隐孢子虫种类研究

为快速、准确鉴别人畜隐孢子虫种类，建立了巢式PCR扩增隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域，扩增片段测序结果表明：安徽牛源分离株(Cryptosporidium muris)781bp；北京鸡源分离株(C.baileyi)776bp；北京牛源分离株(C.muris)781bp；河南牛源分离株(C.muris)725bp；长春牛源分离株(C.muris)776bp；宁夏鸡源分离株(C.baileyi)725bp.该片段位于18SrRNA全序列271～1103bp之间。使用Ssp I限制性内切酶消化发现C.muris产生418～420bp和305～363bp两个片段，C.baileyi产生544～545bp和185～231bp两个片段。所检测的6个分离株可以显著区分为C.muris和C.baileyi两个种，所建立的PCR-RFLP可以有效鉴别隐孢子虫种类。