体细胞克隆山羊"元元"肺的形态学观察

动物体细胞克隆是指由一个体细胞产生一个和亲代遗传基因一致、形态非常相像的动物。体细胞克隆已相继在牛、小鼠、山羊、猪、野牛、马、猫、大鼠等动物上取得成功。2000年6月中旬,西北农林科技大学生物工程研究所利用成年山羊耳部皮肤成纤维细胞作为核供体,获得两只体细胞克隆山羊——“元元”和“阳阳”。“元元”因呼吸衰竭仅存活36．05h。为了了解“元元”肺的发育情况,作者对“元元”的肺进行了肉眼、光镜和透射电镜观察。     

动物胚胎干细胞在动物科学中的应用

自Ｅｖａｎｓ等从延迟着床胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (ＥＳ)以来 ,包括小鼠在内的各种动物ＥＳ细胞的分离受到国内外科学家的关注[1] 。ＥＳ细胞在克隆动物 ,生产转基因动物 ,创建人类遗传疾病动物模型 ,研究细胞分化 ,细胞与细胞的相互关系以及用人类ＥＳ细胞定向分化制造用于器官移植的组织器官等领域具有广阔的应用前景。本文对动物ＥＳ细胞克隆及其遗传操作技术在动物遗传育种、胚胎学及发育生物学领域的应用前景作一评述和展望。1　生产克隆动物1 1　利用ＥＳ细胞生产克隆动物的优势　近年来的研究表明 ,动物早期胚胎细胞、动物胚胎…     

迄今最有力证据表明大型克隆动物衰老过程正常

正4只8岁的克隆羊是多莉的克隆体。据英国《自然—通讯》杂志7月26日发表的一项医学研究显示,通过体细胞核移植技术创造出的克隆羊衰老过程是正常的。该研究分析了13只成年克隆羊,其中4只的遗传数据与世界上第一个克隆动物——克隆羊多莉一样,这是首次开展的有关克隆对大型动物健康影响的长期研究。自体细胞核移植技术出现以来,一直存在对克隆动物健康状况的担忧。20年前,英国科学家伊恩·维尔穆特用一个成年羊的体细胞成功克隆     

欧盟认为动物克隆存在健康和动物福利风险

欧盟食品安全局（EFSA）发表的一份最后报告指出,动物克隆已经引起了食品安全、动物健康与动物福利以及环境影响的严重问题。克隆动物及其后裔有非常高的健康与动物福利风险,并且克隆动物的寿命比较短。根据数字表明,40％的克隆牛和猪在6个月内死亡。EFSA报告说：“大部分克隆动物的健康与动物福利问题的发生,牛主要在幼年期,猪主要在围产期,已经发现这些问题可以产生不良的影响,而且往往是严重的并且是致命的。”欧盟下属的咨询机构“欧洲科学技术伦理小组”（EGE）日前向欧盟委员会发出了长达55页的意见书,表示截至目前仍“没有任何令人信服的证据证实克隆动物食品的安全性”。     

抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究

人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。     

各种各样的克隆蚕

(1)克隆蚕近年,有关生命工程学已深受世界关注,甚至连克隆人这样的语言也已经听到.所谓克隆是指起源于同一个体,具有完全相同的基因型个体组成的群体.用细菌等创造克隆株是完全没有问题,而高等动物,英国的卡登,1962年将一只青蛙的细胞的核移植于预先摘除细胞核的受精卵内,首次成功地创造出遗传均一的个体群,随后在小鼠、羊、牛等动物中也已成功.该新技术引起了纷纷议论.     

支原体和肺支原体双通道荧光定量PCR法检测鼠支原体感染试验

采用TaqMan探针法支原体通用型和肺支原体特异型双通道荧光定量PCR法,对清洁级SD大鼠150只I、CR小鼠120只,C57小鼠100只,普通级SD大鼠104只I、CR小鼠97只,C57小鼠76只,检测支原体和肺支原体感染情况。清洁级SD大鼠中检测到1只支原体阳性;清洁级ICR小鼠和C57小鼠中支原体和肺支原体未见阳性;普通级SD大鼠中检测到2只支原体阳性,1只肺支原体阳性;普通级ICR小鼠中检测到1只支原体阳性,2只肺支原体阳性;普通级C57小鼠检测到1只支原体阳性。表明清洁级实验动物大鼠中仍然存在支原体感染;普通级实验动物大鼠和小鼠支原体感染明显高于清洁级动物。     

禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗在小鼠体内免疫效果试验

应用PCR技术扩增获得禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体,再亚克隆到真核表达质粒载体pCDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcA,体外转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光试验检测其转录表达情况。动物免疫分为3组:pCDNA3.1(+)组、PBS对照组和pcA组,每组16只BALB/c小鼠,pCDNA3.1(+)组和pcA组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周。间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况。强毒攻击,计算小鼠存活数目及保护率。结果显示,间接免疫荧光试验和RT-PCR检测结果均表明pcA可在体外培养的Vero细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,pcA组免疫小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)组和PBS组相比差异极为显著(P<0.01)。经提取的禽多杀性巴氏杆菌总外膜蛋白(Omps)刺激后,pcA组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P<0.05)。脾细胞产生的IFN-...     

单克隆抗体的生产技术及其生化特性

动物机体在免疫反应中形成的抗体,是识别几个不同部位抗原分子的多细胞抗体(Polyclonal Antibodr),即使用相同抗原进行免疫,在不同的动物个体中,得到具有相同特性的免疫血清也是极为困难的。为了获得只识别一种抗原决定簇的单一抗体,Kohler等(1975年)将免疫的小鼠脾脏细胞和小鼠的骨髓瘤细胞进行融合来合成抗体。也就是说,为了合成某些特定的特异性抗体,将脾脏细胞与癌变细胞融合开始独立增殖,分离的克隆能持续地合成特异性抗体。     

不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞分离及培养的影响

胚胎干细胞（Embryonic stem cell,ES细胞）是从早期哺乳类动物胚胎或原始生殖细胞分离的具有全能性的细胞系。在体外分化抑制培养条件下,具有保持未分化的状态及无限增殖的能力。自Evans和Kaufman首次建立小鼠ES细胞系以来,各种动物ES细胞分离与克隆成为国际生物科学领域的热点课题之一。ES细胞可广泛应用于嵌合体的制备和克隆动物的生产。利用ES细胞遗传操作,可生产转基因动物,进行细胞基因结构与功能的关系以及细胞分化机制的研究。本研究采用不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞进行分离及培养,供相关研究者参考。     

影响小鼠非手术胚胎移植技术的因素

小鼠胚胎移植是胚胎工程领域的一项重要技术,是制作嵌合体动物、转基因动物和克隆动物的必需环节。小鼠胚胎移植分为手术法和非手术法移植。相对于手术法移植,非手术法简单快捷,对试验动物伤害小,无需担心术后感染等问题,但是较低的移植成功率限制了该技术的推广和应用。文章从假孕鼠、麻醉剂、移植器械、移植技术、激素等方面综合阐述影响小鼠非手术胚胎移植效率的因素,并提出一套行之有效的改良方法,可大大提高移植效率,促进该技术的广泛应用。     

科技

吉林省首批体细胞克隆羊诞生 日前，吉林省首批两只体细胞克隆绵羊在省农科院畜牧分院诞生。这项最新高端动物生物技术成果．填补了我省该研究领域的空白．对于加速家畜改良速度、加强对野生滟危动物的挽救和保护有着重要意义。     

人PrP多克隆抗体的制备及鉴定

制备PrP(prion protein)多克隆抗体,验证原核表达的人PrP的抗原性,为PrP空间构象的转变机制等深层次的研究以及人PrP单克隆抗体的制备提供重要的试验材料.以融合的人成熟PrP蛋白(mature prion protein,mPrP)为抗原,以pET30a(+)空载体的E.coli BL21 (DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原,免疫小鼠.ELISA和Western blot分别检测多克隆抗体的效价和特异性.结果5只动物中3只均产生了较高效价的抗血清,确定人 PrP多克隆抗体效价为1∶4 096,能与人mPrP特异性结合.证明获得的人mPrP具有良好的免疫原性.     

弗氏不完全佐剂可增加腹水及其单抗的产量

生产单抗的方法是小鼠腹腔注射分泌抗体的杂交瘤细胞,以腹水瘤的形式于其腹腔内增殖而得到含单抗的腹水。本文就预处理剂(降植烷或弗氏不完全佐剂)的选择和小鼠性别对改进单抗生产和减少动物费用作了比较。从134只弗氏不完全佐剂(FIA)预处理的小鼠收获的腹水量为697ml,从116只降植烷预处理的小鼠收获的腹水量为343ml,前者显著高于后者(p<0.02),且FIA预处理的小鼠仅10天(90％的动物需7天)可釆完腹水,而降植烷则需17天。两组腹水中IgG平均浓度(以EIA法测定)几乎没有差异(4.9mg/ml:4.6mg/ml),其量的差异(相当于每只鼠的产量)分别为FIA是25.5mg/只,降植烷是13.5mg/只。FIA预处理的小鼠每只腹水的平均产量也明显增多(P<0.02),未去势雄性小鼠和雌性小鼠间单抗产量无显著差异(22.1mg/只:23.1mg/只)。用FIA预处理的小鼠,单抗产量可提高到20mg/只以上,因而减少了所需小鼠数量,降低了生产单抗的费用。     

一次保证转基因小鼠运输福利的经验分享

实验动物运输福利是保障动物福利的重要一环。为顺利完成数量大、分组多且有围产期、哺乳期的转基因小鼠运输,创新性地采取独立通风笼具整体搬迁方式,将317笼(1 521只)品系为C57BL/6的SPF条件性敲除小鼠,在2 h内运输到代养单位饲养。通过制定运输计划、规范装卸与装载密度、控制运输环境、减少颠簸与运输时间、给予动物适应期等一系列运输措施,减少动物应激。据数据统计,运输的1 521只小鼠均未死亡,发生应激反应小鼠132只,占比8.68%。该运输实例既保障了实验小鼠的运输福利,又保证了科研数据的取得和试验结果的可信性。     

转基因动物应用及现存问题探讨

利用转基因技术(transgenic technology)使外源基因与动物本身的基因整合在一起,并随细胞的分裂而增殖,最终得以表达,这样培养出的动物即称为转基因动物(transgeni canimal)。如果外来基因能稳定地遗传给后代,就会形成转基因动物系。转基因动物的研究始于20世纪80年代,Gordon等采用原核显微注射法向小鼠胚胎注射纯化了的DNA(猴肾病毒-疱疹病毒胸腺激酶基因SV4启动子克隆到PBR322),从而得到第一例转基因小鼠,     

国内外实验小鼠8种病毒检出情况分析

良好的实验动物质量是保证实验结果准确性的前提保障。感染疫病的实验动物,会对实验结果造成干扰,严重的可导致动物大量死亡,影响实验进度。有的疫病甚至可以感染实验人员。本研究对从美国、德国、日本进口的170批次不同品系的实验小鼠共计340只,来自于国内各科研单位119批次不同品系的实验小鼠共计232只,进行淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、汉坦病毒、鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠细小病毒、小鼠微小病毒和小鼠脑脊髓炎病毒检测。结果表明,进口小鼠8项疫病均无检出,而国内小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒和仙台病毒检出率较高,小鼠微小病毒和小鼠细小病毒也有检出,检出率分别为54.6%、26.9%、9.2%、0.8%和0.8%。     

动物体细胞克隆机理的几个关键问题

克隆即clone的音译,来源于希腊文,表示用离体的细枝或小树枝增殖。动物克隆即动物的无性繁殖,就是将供体细胞核移人去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育成个体,使得核供体的基因得到完全复制,也称为动物体细胞克隆。1997年2月,英国罗斯林研究所的Wilmut等人利用绵羊乳腺细胞进行核移植试验,获得了世界上第一头体细胞克隆绵羊-多利(Dolly),这一成果开创了哺乳动物核移植的新的里程碑。1998年,美国夏威夷大学等率先在小鼠上进行了成年体细胞的克隆。1998年,(Science)杂志报道了美国科学家用培养的携带外源基因的胎牛成纤维细胞作为供核获得4头转基因克隆牛。     

小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1:1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。     

动物胚胎干细胞遗传操作研究进展

自Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ从延迟着床胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,简称ＥＳ细胞)以来 ,包括小鼠在内的各种动物ＥＳ细胞的分离受到国内外科学家的关注。动物ＥＳ细胞在克隆动物、生产转基因动物、创建人类遗传疾病动物模型、研究细胞分化、细胞与细胞的相互关系以及用人类ＥＳ细胞定向分化制造用于人器官移植的组织器官等领域具有较为广阔的应用前景。动物ＥＳ细胞的应用前景是建立在利用分子生物学方法对胚胎干细胞进行遗传操作的基础上。本文对动物ＥＳ细胞遗传操作技术的方法及其在动物遗传育种…