胞壁质酶的性质研究

[目的]以提取的胞壁质酶为材料,研究胞壁质酶的性质。[方法]通过测定胞壁质酶在595nm处光吸收值的增量,测定该酶活力和蛋白质浓度。通过测定米氏常数Km,研究酶促反应的速度及影响速度的因素。在不同pH值缓冲液中测定胞壁质酶活力,同时测定该酶的最适pH值。酶促反应的速度在酶的最适温度时达到最大。利用SDS-PAGE电泳法,测定胞壁质酶的分子量及纯度。[结果]胞壁质酶在219.00g/L光吸收下降最快,活力最高。Km为0.57。脲对胞壁质酶为抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制。胞壁质酶在pH值为8.0时酶活力最高,属于弱碱性,在40℃时酶活力最高,其Kd为13。[结论]该研究可为今后采用生物工程技术对胞壁质酶进行克隆、提取以及制取提供参考。     

蚕蛹溶菌酶和过氧化物酶活力的研究

[目的]为蚕蛹开发中利用溶菌酶和过氧化物酶提供参考。[方法]以鲜茧为原料,探索了蚕蛹溶菌酶和过氧化物酶2种酶活力的测定方法,并分析了激活对溶菌酶和过氧化物酶活力的影响。[结果]当溶壁微球菌溶液与蚕蛹提取液的比率为2.45:0.15时,测得的溶菌酶活力误差较小;当过氧化氢与蚕蛹提取液的比率为1.0:0.5时,测得的过氧化物酶活力最高,且误差小。对2种酶激活处理前后的活力比较研究发现,在45℃条件下处理30min,常温下放置24h后,蚕蛹溶菌酶活力提高了83.39倍,而过氧化物酶活力变化不大。对高温杀蛹后2种酶的活力测定发现,高温处理后溶菌酶无活力,而过氧化物酶在高温处理的一定时间内仍有活力。[结论]为从蚕蛹中开发利用这2种酶提供了科学数据。     

绿豆核酸酶的提取及活力测定

[目的]优化绿豆核酸酶的提取条件并测定其活力。[方法]利用单因素和正交试验,考察提取时间、料液比、p H、芽长几个因素对从绿豆芽中提取核酸酶的影响,优选出各影响因素的最佳水平,并进行活力测定。[结果]提取时间20 h,料液比1∶12(g∶m L),p H 3.0,芽长是绿豆长的4倍时,绿豆核酸酶酶活最高为478.86 U/m L。影响绿豆核酸酶提取的因素主次顺序依次为提取时间、p H、料液比、芽长。采用饱和度为80%的硫酸铵盐析沉淀后,酶活达1 569.6 U/m L,较提纯前提高了2.28倍。[结论]该研究可为核酸酶的开发利用提供参考。     

超声波提取贵州九阡李中类胡萝卜素

[目的]探索超声波辅助提取新鲜贵州九阡李中类胡萝卜素的最佳工艺。[方法]采用超声波有机溶剂法提取贵州九阡李中类胡萝卜素,在单因素试验优化九阡李中类胡萝卜素提取条件的基础上,采用正交试验确定九阡李中类胡萝卜素的最佳提取条件,用紫外分光光度法测定类胡萝卜素含量,并计算提取率。[结果]九阡李中类胡萝卜素的最佳提取条件为：以石油醚-丙酮（2∶1,V∶V）作为提取剂,超声波提取20 min,料液比（M∶V,g/ml）为1∶10。在该条件下,九阡李中类胡萝卜素的提取率为174.0μg/g。[结论]该研究为其他新鲜果品（尤其是李子）的研究奠定了基础。     

荧光定量PCR检测猪肝中猪链球菌2型的基因组DNA提取方法的比较

[目的]在人工布菌猪肝中评估溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法提取猪链球菌2型基因组DNA在荧光定量检测中的应用效果,为猪链球菌2型的荧光定量检测选择合理的基因组DNA提取方法提供试验依据。[方法]采用溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法分别提取人工布菌猪肝样本中猪链球菌2型基因组DNA,通过荧光定量PCR技术检测猪链球菌2型的相对含量。[结果]利用荧光定量方法能够检测到猪链球菌2型。该方法可以最低检测到12 CFU/g的猪链球菌,特异性良好,标准曲线方程为y=-3.185 9x+39.901 0。在人工布菌猪肝样本中,溶菌酶-苯酚法在q PCR实验中检测猪链球菌2型较灵敏。[结论]溶菌酶-苯酚法在猪肝样品中提取基因组DNA效果较好;试剂盒法在细菌纯培养物中提取基因组DNA具有安全、高效等优点。     

微波法提取益母草中总生物碱含量的研究

[目的]探讨微波法提取益母草中总生物碱的效果并确定其最佳工作参数。[方法]以常规的回流提取法作为对照,利用微波加热技术对益母草中总生物碱进行微波提取,研究料液比、微波提取时间、微波提取功率等因素对提取效果的影响,确定最佳的提取条件。[结果]微波时间为8min,微波功率为616w时,基本可以提取完全。微波提取的料液比约为1：15,从安全性能角度考虑,选择3g样品加入50ml提取荆的比例进行微波提取效果比较理想。[结论]该方法作为一种新的中药有效成分提取方法,具有良好的重复性和较好的精密度和准确度,有着广泛的发展前景。     

忍冬不同器官中绿原酸的提取及含量测定

[目的]提取忍冬不同器官中的绿原酸并进行含量测定。[方法]采用酸乙醇回流法对＂巨花一号＂忍冬的藤、叶、花和花蕾中绿原酸进行提取,并采用高效液相色谱法对绿原酸进行检测和含量测定。[结果]忍冬不同器官中绿原酸的含量不同,其中花和花蕾中绿原酸的含量较高,藤和叶中含量较少;其排序为：花（3.798 mg/g）〉花蕾（3.795 mg/g）〉藤（2.558 mg/g）〉叶（2.185 mg/g）。[结论]从忍冬药材资源开发利用的角度而言,藤和叶也可以作为绿原酸提取和综合利用的材料。     

毛霉型豆豉中总DNA提取的比较研究

[目的]对毛霉型豆豉中总DNA的提取方法进行比较。[方法]选用常用的3种DNA提取方法(溶菌酶法、蛋白酶K-CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法和改良溶菌酶法)提取发酵豆豉中的总DNA,并测定总DNA的纯度,比较3种方法的优劣。[结果]通过琼脂糖凝胶电泳对提取效果进行观察比较发现,蛋白酶K-CTAB法提取豆豉中微生物的宏基因组DNA的纯度最好,质量最高。[结论]蛋白酶K-CTAB法更适合豆豉这类发酵食品宏基因组DNA粗提取,可以作为豆豉宏基因组学研究的基础。     

萝卜中具溶菌酶活性组分的分子结构分析

[目的]分析萝卜具有溶菌酶活性组分CBPs的分子结构,以期为其作用机制和在萝卜中的生理功能提供资料。[方法]利用亲和层析法及CM-纤维素离子交换柱层析分离纯化CBPs,测定其氨基酸组成、糖基和溶菌酶活性中心残基。[结果]从萝卜中得到了2个具溶菌酶活性且无糖基的组分:CBP1和CBP2,它们间氨基酸组成差异不大;Asp/Glu和His专一性化学修饰剂单独作用后,CBP1和CBP2相对溶菌酶活力均大幅度降低,预先加入竞争性抑制剂则下降的幅度减小。[结论]萝卜中有2个具溶菌酶活性的非糖蛋白组分,其溶菌酶活性中心氨基酸残基均可能含有Asp/Glu和His。     

溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究

[目的]研究制备溶菌酶的最佳工艺条件及其在山核桃乳中的应用。[方法]以鸡蛋清为原料,通过阳离子交换树脂法提取溶菌酶,采用正交试验确定制备溶菌酶的最适工艺条件,并将溶菌酶与甘氨酸和NaCl复配后作为防腐剂应用于脱脂山核桃乳饮料中。[结果]通过正交试验确定的最佳工艺条件为:蛋清树脂比5:1、pH值7.0、搅拌吸附4h,用1.0mol/LNaCl洗脱,洗脱液经超滤、浓缩后冷冻干燥得到溶菌酶成品。该试验最终酶收率为89.78%,酶活力为14817U/mg。将0.05%溶菌酶与0.30%甘氨酸和0.40%NaCl进行复配用于生产脱脂山核桃乳,其抑菌效果较显著,降低了山核桃乳的杀菌强度,延长了产品货架期。[结论]该工艺操作方便,适合溶菌酶的工业化生产;溶菌酶用于生产脱脂山核桃乳效果好。     

HPLC测定不同方法提取白花丹叶中白花丹醌的含量

[目的]优选白花丹鲜叶中白花丹醌的最佳提取方法。[方法]分别采用超声提取法、索氏提取法和水蒸气蒸馏提取法提取白花丹鲜叶中的白花丹醌,然后采用HPLC测定其含量,比较分析测定结果,优选出最佳提取方法。[结果]测得超声提取法、索氏提取法和水蒸气蒸馏提取法提取白花丹醌的含量依次为0.036 3%、0.051 1%和0.017 5%;采用索氏提取法提取的白花丹醌含量最高。[结论]优选出白花丹鲜叶中白花丹醌的最佳提取方法为索氏提取法。     

海岸植物许树和单叶蔓荆提取total RNA的简便方法

[目的]介绍海岸植物叶片组织total RNA提取的一种简单、便捷方法。[方法]取800~1 000 mg许树和单叶蔓荆的鲜叶,加液氮研磨后制成提取液,提取液加试剂4℃下离心,冰浴后室温下离心,依次添加试剂后室温下离心,即得total RNA样品。[结果]分光光度计测试提取的total RNA的A260/A230大于2.10,A260/A280在1.93左右;RNA溶液中RNA浓度约为4.0μg/μl。该方法用了较少试剂种类;每根柱只需洗4次便可获得较好质量的total RNA;一次研磨800~1000 mg材料可提取约700μg total RNA;电泳检查表明提取的totalRNA符合分子生物学研究要求,可直接用于各种分子生物学试验。[结论]该方法是一种以较少试剂、较小费用、短时间内提取较高质量与产量的海岸植物叶片组织total RNA的简单、便捷方法。     

HPLC紫外法同时检测生鲜乳中环丙沙星和恩诺沙星残留

[目的]建立能同时检测环丙沙星和恩诺沙星残留的HPLC紫外检测法。[方法]采用10%三氯乙酸为提取液,直接从生鲜乳中提取环丙沙星和恩诺沙星,并进行HPLC检测。[结果]环丙沙星和恩诺沙星的最低检测限为5μg/L,在10~200μg/L浓度范围内呈良好的线性关系(r0.99),平均回收率为84%~112%,变异系数均小于5%。[结论]该方法不仅除蛋白和脂肪效果好,而且回收率较为理想,可以很好满足确证方法的要求,且重现性好。     

蚕沙中叶绿素铜钠盐和果胶的提取工艺

[目的]研究从蚕沙中提取叶绿素铜钠盐和果胶的方法,以综合利用蚕沙资源,变废为宝。[方法]以蚕沙为原料,采用有机溶剂提取法提取叶绿素铜钠盐,用活性炭对果胶脱色。[结果]蚕沙中叶绿素铜钠盐的最佳提取条件为:预处理好的蚕沙50 g采用95%乙醇作为提取剂,500 ml 8%NaOH溶液于70℃水浴中浸提5 h;提取果胶的最佳条件为:在恒温水浴60℃的情况下脱色120 min,沉析时的pH为3.5,沉析温度为50℃,HCl用量为1.5～2.0 ml。[结论]得到的叶绿素铜钠盐和果胶的主要技术指标符合国家标准。     

高粱总DNA不同提取方法的比较

[目的]探索高粱总DNA的快速、高效提取方法,为将其导入水稻提供大量、高质量的DNA。[方法]以高粱幼叶为材料,分别采用SDS法、CTAB法、尿素法和NaOH法提取高粱总DNA,并对不同方法提取DNA的纯度、浓度和产量进行检测。[结果]尿素法提取DNA纯度和质量最好,SDS法和CTAB法次之,NaOH法最差。采用尿素法、SDS法、CTAB法和NaOH法分别可从1g高粱样品中提取到约292.00、21.75、152.25和243.75μg的DNA。4种方法提取的高粱总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果表明NaOH法不能有效提取高粱总DNA,其他3种方法在提取高粱总DNA时能较好地保证其完整性。高粱总DNA分子量约为50KB。[结论]尿素法提取DNA的纯度最好、产率最高,是一种理想的高粱总DNA提取方法。     

十二烷基伯胺乙酸盐盐析法在柑桔皮果胶提取中的应用

[目的]筛选出最佳的果胶提取工艺。[方法]以十二烷基伯胺的乙酸盐溶液作为果胶的沉降剂,提取柑桔皮果胶。[结果]在pH3.5,温度50℃的稀果胶萃取液中加入十二烷基伯胺乙酸盐溶液,可与带负电荷果胶形成不溶于水的果胶十二胺盐复合物,完全沉降析出,再经过酸解和乙醇洗涤步骤,得到灰分低于1%的果胶,产率高达16.8%。[结论]十二烷基伯胺乙酸盐盐析法提取工艺可以用于高效率制备优质果胶,为利用废弃物开发生物大分子多糖-果胶开辟了新的途径。     

天牛基因组DNA提取方法和标本保存方式的比较研究

[目的]为天牛的分子系统学研究奠定基础。[方法]采用不同提取方法(饱和NaCl法、CTAB法、SDS-蛋白酶K消化法)从不同保存条件下天牛标本中提取基因组DNA,进行RAPD扩增,比较不同保存条件和不同DNA提取方法对DNA提取质量的影响,探索天牛标本的最佳保存方式和最佳DNA提取方法。[结果]不同方法提取的DNA质量有明显差异。CTAB法和SDS-蛋白酶K消化法提取的DNA质量较好,条带清晰完整,无降解和RNA污染。但饱和NaCl法的提取效果较差。天牛标本的最佳保存条件为在-80℃条件下无水乙醇浸泡。CTAB法提取的天牛基因组DNA能扩增出稳定清晰的多态性片段。[结论]CTAB法提取的天牛DNA质量最好,可直接用于PCR扩增。     

海洋放线菌H23-16活性代谢物的提取及其稳定性研究

[目的]为海洋放线菌中抗菌活性物质的提取提供参考。[方法]对海洋放线菌H23-16进行发酵培养,用有机溶剂提取发酵液中的活性物质,并用纸片法测定提取物的抗白色念珠菌活性。[结果]H23-16发酵提取物的抗白色念珠菌活性较强(抑菌圈直径可达21mm);所提活性物质对温度和紫外线较稳定,而对酸碱不稳定。[结论]该研究为新型抗生素的提取分离提供了新途径。