应用抗多肽抗体鉴别新城疫病毒强弱毒株

在克隆我国流行的新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株Ｆ４８Ｅ８株、四平株及弱毒株长春株、Ｖ４株和ＨＮ和Ｆ基因并进行测序的基础上,针对我国流行的ＮＤＶ强毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）的Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将其与小牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制备成全抗原,免疫小鼠制备出抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＮＤＶ强毒株呈强阳性反应,而与鸡痘病毒、鸡传染性法氏囊病病学、ＮＤ 弱毒株长春株和Ｖ４株呈阴     

NDV小片段多肽F14a的融合表达和应用研究

将对应ＮＤＶ强毒株Ｆ基因裂解位点附近编码１４个多肽的双链寡核苷酸片段克隆到融合表达载体ｐＧＥＭＥＸ－１,构建重组质粒ＤＧＥＭＦ１４ａ并转化大肠杆菌ＤＥ３。将ＧＥＭＦ１４ａ／ＤＥ３的融合表达产物免疫兔,制备抗多肽抗体。该抗体与ＤＮＶ强毒株Ｆ４８Ｅ９呈ＥＬＩＳＡ强阳性反应,Ｐ／Ｎ〉３．５￣７．０,百与弱毒ＮＤＶ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ系呈阴性反应,Ｐ／Ｎ〈２．０,证明制备的Ｆ１４ａ抗多肽抗体是特异的,中用于强     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因光敏生物素探针的制备及初步应用

将重组质粒ｐＵＣＬａＦｃ和ｐＵＣＦ４６Ｆｃ用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ酶切,回收新城疫病毒融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因,将此Ｆｃ片段用光敏生物素标记,制备出Ｆｃ探针。该探针能够与新城疫病毒（ＮＤＶ）的强毒株Ｆ４６Ｅ９、中毒株Ｍ株和弱毒株ＬａＳｏｔａＥ４株杂交,而不与对照的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒杂交,说明探针是特异的。用ｐＵＣＬａＦｃ的Ｆｃ探针检测了各５份ＮＤＶ强中弱毒株的尿囊液,均为阳性。但强毒株和弱毒株的Ｆｃ探针都能与所用的强、中、弱毒株杂交,说明该Ｆｃ探针尚不能区分强、弱毒株。     

新城疫病毒在不同的细胞上增殖特性的研究

研究新城疫病毒（Ｎｅｗｓｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）可,弱毒株在不同的传代细胞的生物学特性。Ｆ４８Ｅ８强毒株在ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ中都能增殖并产生细胞病变,而Ｖ４生弱毒株不能在ＢＨＫ和Ｖｅｒｏ中增殖,当ＭＥＭ含１０ｕｇ／ｍＬ胰蛋白酶时,ＮＤＶ弱毒株在Ｖｅｒｏ中能较好地复制,将Ｖ４株在Ｖｅｒｏ中传代培养后,Ｖｅｒｏ中传代的Ｖ４毒株的ＨＡ较低,但毒力增强,ＢＨＫ中传代的Ｖ４毒     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

新城疫弱毒疫苗蛋内接种对鸡的免疫效果

新城疫Ｂ１（ＮＤＶ－Ｂ１）对刚出鸡无致病性，但却可致死１８日龄的鸡胚。经甲基硫酸乙酯（ＥＭＳ）处理的ＮＤＶ－Ｂ１，却可显著降低对１８日龄鸡胚的致病性。经这种弱毒（ＮＤＶ－Ｂ１－ＥＭＳ）接种的蛋，其１日龄雏鸡的肺和脾都可分离出病毒，出壳的雏鸡产生抗体；到４周龄时能抵抗ＮＤＶ ＧＢ－１Ｔｅｘａｓ强毒的攻击。母源抗体的存在并不影响其保护能力。以这种弱毒接种４周龄雏鸡也可诱发保护性免疫。经推算母源抗体阳性     

应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

应用生物素标记的NDV－cDNA探针检测感染尿囊液中NDV－RNA的初步研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＮＤＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体──Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后,即成ＮＤＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＮＤＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ,而不与ＩＢＤｖ－ｄｓＲＮＡ、ＡＩＢｖ－ｓｓＲＮＡ、ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ－ｄｓＤＮＡ,ＦＰＶ－ｄｓＲＮＡ及ＡＩＬＶ－ｄｓＤＮＡ发生交叉杂交反应。试验结果表明：尽管该探钎含有编码Ｆｏ蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把ＮＤＶ的强、弱毒株区分开。这说明ＮＤＶ强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对ＮＤＶ来说具有特异性,这就为ＮＤＶ的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。     

新城疫病毒F48E9株病毒糖蛋白的功能分析

对抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＨＮ和Ｆ糖蛋白的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的生物学活性，应用ＥＬＩＳＡ、ＨＩ、ＨＬＩ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等进行了分析，结果证明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ蛋白除有ＨＡ和ＮＡ功能区外，还有一个促进（启动）融合的功能区。此外，还筛选到４株ＮＤＶ强毒株特异性ＭｃＡｂ，为ＮＤＶ强弱毒株的鉴别打下了基础     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

鸽新城疫病毒野毒PB9601株的致病性研究

用不同方法测试了从新城疫患鸽分离到的新城疫病毒（ＮＤＶ）野毒ＰＢ９６０１株的致病性。结果,该毒株对１日龄ＳＰＦ雏鸡的脑内接种致病指数为２．００,对６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数为０．００;该毒株对６周龄左右鸽有很强的致病性,有的血清中已有一定量的抗鸽ＮＤＶ抗体;经ＳＰＦ鸡胚传１３代的尿囊液病毒对鸽的半数致死量约为１２个ＴＣＩＤ５０。由此认为,ＰＢ９６０１株ＮＤＶ是对鸡致病性很弱但对鸽呈高度致病性的毒株,可作为国内鸽ＮＤＶ强毒的参考株。     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免？…

用表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ（Ｉ型疫苗株ＣＶ１９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组鸡痘病毒（ｒＦ－ＰＶ－ｇＢ／Ｒ）和鸡痘病毒（ＦＰＶ）疫苗株２８２Ｅ４免疫１日龄不同品种的鸡,来评价２种病毒株的安全性及免疫母源抗体的商品是我毒性,而对无毒源抗体的ＳＰＦ鸡的毒性则不同。斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交产,ｆＦＰＶ－ｇＢ／Ｒ中无氨苄青霉素的抗性基因。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

法氏囊病毒感染对肉鸡内分泌机能的影响

用鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）弱毒疫苗免疫和强毒感染艾维菌鸡，采用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定血浆甲状腺素（Ｔ３，Ｔ４）、促肾上腺皮质素（ＡＣＴＨ）和皮质酮（Ｆ）来研究ＩＢＤＶ感染对肉鸡内分泌机能的影响。结果表明：ＩＢＤＶ弱毒疫苗免疫使肉鸡产生高效价抗体，血浆ＡＣＴＨ含量升高；ＩＢＤＭ强毒感染导致肉鸡血浆Ｔ２、Ｆ急剧升高，法氏囊肿大，血清中也出现ＩＢＤＶ抗体，但效价显著低下；而ＩＢＤＶ强毒感染曾     

新城疫病毒F48E9株病毒结构蛋白的分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、激光扫描技术、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和糖蛋白染色方法对新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ９株的结构蛋白进行了分析，结果表明，它具有ＮＤＶ的典型结构特征，与ＬａＳｏｔａ毒株相比无显著差异     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中,ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点,在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＤｏｔＢｌｏｔＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验,分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株,进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察,进一步表明,我们培育的优良鸭肝炎弱毒株Ａ６６确系Ｉ型ＤＨＶ。     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的…

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ