健康与子宫内膜炎奶牛阴道菌群结构的比较研究

利用16SrDNA结合PCR-DGGE技术分析比较了产后45d健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛阴道内细菌群落多样性及其差异,并通过切胶、克隆测序等步骤分析了奶牛阴道细菌种类。研究结果表明,患病奶牛DGGE图谱的条带数量、多样性指数均显著高于健康奶牛;健康奶牛阴道优势菌主要有清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei subsp.)、魏斯杆菌(Weissella koreensis sp.)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),而患病组奶牛阴道内此3种优势菌含量显著降低或缺失,且也无其他明显优势菌存在;从健康和患病奶牛阴道内均分离出脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、溃疡拟杆菌(Bacteroides helcogenes)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae)、普氏菌(Prevotella dentalis)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens str.)和肠球菌(Enterococcus hirae)等常见病原微生物,在患病奶牛阴道内分离出大肠杆菌(Escherichia coli str.K-12 substr.)、梭杆菌(Fusobacterium nucleatum subsp.)等特定致病菌。研究结果提示,子宫内膜炎奶牛阴道内菌群结构比健康奶牛更为复杂,且无优势菌,阴道菌群结构失衡可能是奶牛发生子宫内膜炎的原因。     

奶牛子宫内膜炎的治疗

1子宫内膜炎的治疗1.1隐性子宫内膜炎的治疗1.1.1症状母牛发情正常,但配种不易受妊。发情时流出的黏液较正常牛稀薄,粘性弱,发情黏液最多,混浊或含有絮状物。冲洗子宫的回流液经静止后,有蛋白絮状物沉淀。阴道无异常;直肠检查时子     

奶牛子宫内膜炎方剂疗效比较

子宫内膜炎是奶牛多发的产科疾病之一,对奶牛的繁殖影响很大。本病的治疗药物很多,但是不同类型的子宫内膜炎应首选哪种药物方剂疗效最佳说法不一。笔者选用临床上最常用的8种方剂对奶牛子宫内膜炎进行治疗比较试验,结果报告如下:     

子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9 mRNA表达与奶牛子宫内膜炎关系的研究

为探讨基质金属蛋白酶(MMPs)-2、MMP-9在奶牛子宫内膜炎中的作用机制,选用产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA检测PGF2a、孕酮浓度;免疫组化检测子宫内膜Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达;SYBR Green I荧光定量PCR检测子宫内膜MMP-2和MMP-9mRNA表达。结果表明:试验组PGF2a浓度极显著低于对照组(P<0.01),孕酮含量显著高于对照组(P<0.05),PGF2a与孕酮浓度呈显著负相关(r=0.893);试验组子宫内膜中Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);MMP-2和MMP-9mRNA水平则显著低于对照组(P<0.01)。结果提示:产后子宫内膜炎病牛子宫内膜MMP-2、MMP-9低表达,导致Ⅰ型和Ⅳ型胶原降解受阻,使细胞外基质为子宫内膜细胞提供的刺激信号不足,子宫分泌PGF2a量少,黄体消退障碍,血清孕酮含量高;说明子宫内膜MMP-2、MMP-9mRNA表达对产后子宫内膜炎的发生和发展起促进作用。     

奶牛子宫内膜炎的治疗

奶牛不孕不仅影响奶牛繁殖率和产奶量 ,也直接影响奶牛业发展。奶牛不孕的病因很多 ,其中以子宫内膜炎最为多见。1　子宫内膜炎的病因1 1　难产　奶牛在生产时由于胎儿体形过大或胎位不正而出现难产 ,在助产过程中容易对子宫内膜造成伤害 ,继而产后患子宫内膜炎。1 2　胎衣不下　由于母牛妊娠期运动不足或者羊水过多、胎儿过大 ,也有临床时热应激反应造成胎衣不下。如果剥离时间过晚 (超过 12ｈ)造成胎衣腐败或者进行手术剥离胎衣时动作过大、过猛伤及子宫而引起子宫内膜炎。1 3　助产感染　助产时后躯或助产器械没有充分消毒致使子宫感染引…     

治疗奶牛子宫内膜炎经验介绍

奶牛的子宫膜炎是影响奶牛业发展的一个严重问题,也是当前兽医临床中常见的疾病之一。根据病程的长短,可分为急性和慢性两种。由于子宫分泌物和粘膜受损伤的程度不同,又可分为急性脓性卡他性炎、假膜性炎、坏死性炎、慢性卡他性炎、慢性隐性炎、子宫积水、子宫积脓等多     

奶牛子宫内膜炎的防治

奶牛子宫内膜炎是奶牛常发生的一种疾病,严重影响奶牛生产。现把北安地区多年来成功的防治经验介绍给广大养奶牛场户,以加快我国奶牛业的发展。根据疾病的经过,可将此病分为急性和慢性两种,一般以慢性为多见。如按炎症的性质,可分为卡他性、粘液脓性及脓性子宫内膜炎...     

患子宫内膜炎母驴与健康母驴的阴道菌群差异分析

为探究患子宫内膜炎母驴阴道病原,本试验从规模化养殖场采集5份患子宫内膜炎母驴病料作为患病组,以6份健康母驴样本作为健康组,采用16S rDNA扩增子测序技术对2个组阴道分泌物样本中的菌群进行比较分析。结果显示,患病组母驴阴道菌群的多样性和丰富度均高于健康组;与健康组相比,患病组母驴阴道变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著增加,而梭杆菌门(Fusobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和未分类菌门(Unidentified bacteria)显著降低(P<0.05);在属的分类水平上,患病组母驴阴道中链球菌属(Streptococcus)丰度显著高于健康组母驴(P<0.05),链球菌属可能是母驴子宫内膜炎的主要致病菌;在主成分分析上,患病组样本间的微生物群落差异较大,而健康组样品间的微生物组成相似;功能预测上,患病组阴道内微生物的免疫系统(Immune system)和传染性疾病(Infectious diseases)2个功能的相对丰度显著高于健康组,说明阴道内含有大量相关功能的微生物发挥着作用。本试验为母驴子宫内膜炎的后续预防和治疗...     

奶牛子宫内膜炎发病规律的研究

搜集苏州市牛奶公司一牧场１９９６年１月到１９９７年１２月间分娩奶牛子宫内膜炎的资料。结果显示（１）奶牛子宫内膜炎的发生与季节关系较大,６－９月与其它各月间差异极显著;（２）奶牛子宫内膜炎的发生与胎次有关,２－３胎牛与其它各胎次间差异极显著;（３０胎衣不下的奶牛发生子宫内膜炎同胎衣自行脱落牛之间差异极显著;（４）产双膜的奶牛与产单胎奶牛间子宫内膜炎发生率有显著差异;（５）流产牛与正常分娩牛子宫内膜炎     

用实时荧光定量PCR技术检测奶牛瘤胃纤维降解菌相对定量方法的研究

为了选择适合反刍动物瘤胃纤维降解菌的实时定量PCR相对定量方法,选用三头安装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛,针对奶牛瘤胃主要纤维降解菌,使用三种实时荧光定量PCR相对定量方法进行比较研究。结果表明：在相同条件下,对于同一个菌株基因的相对定量结果来说,SCF法和Pfaffl,M.W.法检测奶牛瘤胃主要纤维降解菌有很好的相关性（R=0.96～0.99,P〈0.05）;三种方法比较结果显示,SCF法省略了制作标准曲线等一系列试验操作过程,具有准确率高、快速和定量效果较好等特点。     

奶牛产后急性子宫内膜炎病原的分离与鉴定

通过研究奶牛产后急性子宫内膜炎致病微生物组成,揭示该病主要病原并为临床治疗提供依据。以产后6～10 d急性化脓性卡他性子宫内膜炎患牛80头为研究对象,对子宫内容物进行细菌和真菌的分离鉴定。共分离到195株细菌及真菌,其中35.4%具有溶血性,50.8%对试验动物有致病性;大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分离率较高,为83.75%和62.5%,其次是奇异变形杆菌(36.25%)、白色念珠菌(20%)和肺炎克雷伯氏菌(17.5%)。该病的90%为混合感染,细菌混合感染(70%)主要由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌组成;真菌与细菌混合感染占20%,均有白色念珠菌存在;细菌单一感染占10%。结果表明,奶牛产后急性子宫内膜炎主要致病菌是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌,20%受试牛存在着以白色念珠菌为主的真菌感染。     

实时荧光定量PCR对瘤胃纤维分解菌定量方法的构建

试验构建了白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌及产琥珀酸丝状杆菌等3种瘤胃纤维分解菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线,以用于纤维分解菌的定量测定。提取瘤胃微生物总DNA,以各菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pMD18-T Vector连接并转化到大肠杆菌。用氨苄青霉素培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果表明:所构建的3条标准曲线具有很高的相关性(R2>0.999),并获得了高扩增效率产物(白色瘤胃球菌为101%、黄色瘤胃球菌为98.0%、产琥珀酸丝状杆菌为97.7%),说明成功构建了瘤胃纤维分解菌实时绝对定量PCR的标准品和标准曲线,为定量研究瘤胃纤维分解菌奠定基础。     

Evaluation of vaginal discharge with the Metricheck device and the relationship to reproductive performance in postpartum dairy cows

Vaginal mucus during estrus was examined with the Metricheck device and the relationship to the reproduction of high‐yielding dairy cows was studied. The study was conducted in 99 dairy herds located in Western Germany and 1348 Holstein‐Friesian heifers and cows showing spontaneous estrus were examined. Independent of the Metricheck result, the animals were inspected by professional insemination technicians and those suitable for insemination (n = 989) were bred by artificial insemination (AI). Reproductive performance was characterized by non‐return rate at 90 days (NRR90). The discharge of the animals predominantly had a clear appearance (70%) and a stringy consistency (80%). Animals with clear vaginal discharge had higher NRR90 (56%; n = 697) than animals with abnormal (turbid, mucopurulent, purulent, sanguineous) vaginal secretion (48%, n = 292; P < 0.05). NRR90 was lower in animals with short calving to AI interval (< 70 days; 39%) than with medium (70–130 days; 54%) or long (> 130 days; 62%) intervals (P < 0.05). NRR90 decreased by 12% from the lowest (< 15 kg) to the highest (> 45 kg) milk yield class. In conclusion, the use of the Metricheck device integrated into the insemination procedure is recommended to identify dairy cows suffering severely from uterine disease.     

实时荧光定量PCR检测布鲁菌方法的建立

旨在建立实时荧光定量PCR检测布鲁菌的方法。经选取高度保守的具布鲁菌属特异性的BSP31基因设计了一对引物及探针,并采用矩阵法优化反应体系,筛选出引物、探针、dNTP和Mg2+最优浓度配比,同时进行了特异性和灵敏性试验,建立了实时荧光定量PCR检测布鲁菌的方法。该方法可用于对布鲁菌病普查监测及进出境动物及其产品的检验检疫。     

.基于TaqMan探针的牛布氏杆菌实时荧光定量PCR的特异性鉴定

根据牛布氏杆菌BM28保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定牛布氏杆菌的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105~5.0×101拷贝范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝每微升。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在牛布氏杆菌的检测与鉴定中具有良好的应用前景。     

胸膜肺炎放线杆菌的实时荧光PCR检测

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的危害养猪业的五大疾病之一。至目前为止App共报道有2个生物型15个血清型。所有型都可能致病，但有显著差异。使用血清学方法监测猪传染性胸膜肺炎有其局限。一些猪细菌分离培养阳性，但血清反应仍为阴性，对这些猪群只能使用病原分离进行确诊。亚临床感染及处于潜伏期的动物，     

实时定量PCR试验设计原则及应用

笔者对实时定量PCR试验设计原则及其在医学、分子生物学、食品检测的应用上进行了概述.     

反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用

为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了 TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测.结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰...