绵羊肺炎支原体GH3-3株在改良KM2培养基中的增殖情况

绵羊肺炎支原体GH3-3 MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株.为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线.结果表明,传代稳定的MoGH3-3株在改良KM2培养基中培养12 h开始进入对数生长期,培养7...     

绵羊肺炎支原体最适培养基的筛选

为筛选一种适宜绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)生长的培养基,利用活菌计数方法对MoGH3-3株在改良KM2培养基、TSB-1培养基、改良Thiaucourt氏培养基和10%马血清改良KM2培养基中不同培养阶段的生长滴度即颜色变化单位(ccu)进行了测定。结果表明,在培养24,48,72和96 h,MoGH3-3株在TSB-1培养基中的平均生长滴度高于其他3种培养基。在培养的72 h和96 h,在TSB-1培养基中平均最大生长滴度达到了109 ccu/mL,在改良KM2培养基和改良Thiaucourt氏培养基中只有108 ccu/mL,而在10%马血清改良KM2培养基中仅为106 ccu/mL。这为绵羊肺炎支原体培养特性研究和疫苗生产工艺研究提供了参考数据。     

3种支原体培养基对猪肺炎支原体CJ株培养效果的比较分析

通过猪肺炎支原体CJ株接种3种猪肺炎支原体培养基后的生长活性研究发现,与其他2种培养基相比,接种改良Friis培养基培养2~3 d含菌量可达到1.0×109~10CCU/m L,具有生长迅速、含菌量高的特点,可用于猪肺炎支原体CJ株的培养。     

不同因素对猪肺炎支原体颜色变化单位测定的影响

为摸清猪肺炎支原体的颜色变化单位(CCU)测定是否受试验相关因素的影响,通过不同培养体系、不同种类的容器、不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,观察培养基的变色情况,最终通过测定各组猪肺炎支原体的CCU来分析不同因素对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示,利用不同培养体系、不同容器及不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,其结果差异均不显著(P>0.05)。该研究可为今后支原体的CCU测定提供参考。     

不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响

本试验将猪肺炎支原体在不同容积的玻璃瓶中进行培养,对各自生长过程中不同时间点的颜色变化单位(CCU)和pH进行测定,分析不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示:与小瓶培养的猪肺炎支原体相比,万瓶的生长速度慢、CCU低、收获菌种的pH范围较广。本试验为猪肺炎支原体大规模培养和疫苗生产提供了参考。     

不同厂家猪血清配制的培养基培养猪肺炎支原体的比较研究

根据培养物的生长速度和含菌量方面筛选适合猪肺炎支原体CJ株生长的猪血清。配制改良Friis培养基时分别添加6种不同生产厂家的猪血清,由6种不同厂家猪血清配制的改良Friis培养基培养猪肺炎支原体CJ株。从生长时间可知,由厂家1的猪血清配制的改良Friis培养基更适宜猪肺炎支原体CJ株的生长。从测定的含菌量测定结果可知,由厂家1的猪血清配制的改良Friis培养基培养猪肺炎支原体CJ株的含菌量较高。结果表明,由厂家1的猪血清配制的改良Friis培养基培养猪肺炎支原体CJ株的生长时间短且含菌量高。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术研究

肺炎支原体的培养和保存条件非常苛刻,是疫苗规模化生产的工艺难题。本文针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术进行研究。通过培养试验筛选四种培养基配方表明该疫苗株在低血清改良培养基中生长良好;优化发酵培养工艺,使其在发酵罐培养60～70 h的峰值可达到1010CCU/mL;设计筛选该疫苗耐热保护剂和冻干工艺,37℃下保存10 d的耐老化试验结果显示,下降滴度小于100.5CCU/mL。本研究为提供高效、安全和稳定的猪肺炎支原体疫苗产品奠定基础。     

猪血清对猪肺炎支原体培养影响的研究

正一、材料(一)菌株1.猪肺炎支原体P-5722-3株,由美国硕腾动物保健公司提供,哈药集团生物疫苗有限公司保藏。2.猪肺炎支原体P-5722-3株CCU阳性标准品(CCU检测),由美国硕腾动物保健公司提供,哈药集团生物疫苗有限公司保藏。(二)完全培养基1.培养基组分A:根据猪肺炎支原体P-5722-3株培养基配方要求,制备组分A。2.培养基组分B:猪血清3.猪肺炎支原体P-5722-3株完全培养基由培养基组分A与培养基组分B共同制备,培养基组分A由哈药     

一株猪肺炎支原体HN0613株的分离鉴定

采集疑似猪支原体肺炎病理变化的肺脏,经Friis液体、固体培养基培养、纯化,PCR、测序分析、生化鉴定、生长抑制、代谢抑制和致病性试验证实分离获得一株猪肺炎支原体菌株,命名为HN0613.该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养达108 CCU/mL;菌株有较强的毒力,可作为疫苗候选株进一步研究.该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎灭活疫苗奠定了基础.     

山羊支原体山羊肺炎亚种培养基的筛选及生长曲线测定

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的生长滴度。结果表明,添加2g/L丙酮酸钠和150mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基最适宜山羊支原体山羊肺炎亚种的生长,生长滴度可达109 CCU/mL,在培养6h后开始进入对数生长期,培养60h后进入稳定期,培养72h时后进入衰亡期。此试验结果为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究提供了参考数据。     

一株猪肺炎支原体的分离鉴定

从全国部分猪场采集到疑似猪支原体肺炎肺组织病料12份,提取DNA进行猪肺炎支原体PCR和多重PCR检测,将病料研磨后分离猪肺炎支原体,最终分离到1株疑似猪肺炎支原体;通过测序分析、形态观察、生化试验、血清学试验证实其为猪肺炎支原体。该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养活菌滴度达109CCU/m L;菌株有一定的致病性,免疫原性好,可作为疫苗备用菌株,该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎疫苗奠定了基础。     

山羊支原体山羊肺炎亚种在2种培养基上的生长特性比较

为筛选出山羊传染性胸膜肺炎疫苗制备中抗原产量高且成本低的培养基,本试验将山羊支原体山羊肺炎亚种M1801株和M1601株接种于含20％马血清的改良Thiaucourt's肉汤(MTB)和新研制的含5％马血清的培养基(HF3),在120 h内监测其pH值、颜色变化单位(color change units,CCU)和菌体...     

猪支原体肺炎的诊治

正猪支原体肺炎又称猪气喘病、猪地方性肺炎,是由猪肺炎霉形体(支原体)引起的慢性呼吸道传染病。1流行特点和症状猪支原体是一类无细胞壁的多形态微生物,有球状、环状、点状、杆状和两极状。本菌兼性厌氧,能在无细胞的人工培养基上生长,我国通常采用江苏2号培养基,由于生长条件严格,故一般检验单位不作培养。患肺炎支原体肺炎的患猪表现为呼之困难,肺部前叶有典型性的铅灰色病灶,剧烈的干咳,呼吸粗重,胸部剧烈起     

支原体检验用培养基的研究

水质和血清对比试验结果表明：以水质电导率低于0．5μs／cm、猪血清总蛋白不低于49g／L、胆固醇不高于1．66mmol／L为标准制备的改良Frey培养基和支原体培养基活菌滴度均达10^9CCU／mL。对滑液支原体GX11-T株及猪鼻支原体BTS-7株1—5代对数生长期培养物检测,均达10^9CCU／mL。改良Frey培养基与支原体培养基经反复冻融8次;或改良Frey培养基经37℃保存24h;支原体培养基37℃保存8h均不影响灵敏度。改良Frey培养基在鸡胚成纤维细胞及鸡胚尿囊液中最小检测量分别为4CCU／mL和2CCU／mL;支原体培养基在BHK：,细胞中最小检测量为8CCU／mL。改良Frey培养基和支原体培养基4℃有效期为1个月,-20℃为12个月。     

蛋白质免疫印迹快速测定猪肺炎支原体抗原含量

为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法,试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱,测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量,并与Western blot(WB)测定的CCU进行比较.结果 显示:曝光5s,107 CCU/mL含量以上的猪肺炎支原体抗原在46 kDa处有条带,且条带粗细、明...     

猪肺炎支原体DJ-166株的分离鉴定

从山西某猪场采集疑似猪支原体肺炎肺组织病料,接种CH培养基培养,克隆纯化获得一株菌株。该菌株经PCR、培养特性、生化特性和血清学特性试验鉴定为猪肺炎支原体,命名为DJ-166株。该分离菌株在人工合成培养基上传8代稳定后,活菌计数达到108CCU/m L;菌液培养物气管注射猪后,致病性较弱;免疫原性试验证明该分离菌株具有良好的免疫原性,此结论为猪支原体肺炎疫苗的研究提供了必要条件。     

猪肺炎支原体YN200901株的分离鉴定

采集疑似猪肺炎支原体病理变化的肺脏,接种到改良牛心培养基、猪胃消化液培养基进行培养,经瑞特染色、镜检,菌落狄氏染色、PCR鉴定及序列比对、生化试验鉴定,抗猪肺炎支原体血清生长抑制试验,分离获得一株猪肺炎支原体云南地方流行菌株,命名为YN200901。试验结果为云南本地株猪肺炎支原体的后续研究提供了物质基础。     

猪支原体肺炎的流行特点及防治

<正>猪支原体肺炎也叫猪气喘病、地方流行性肺炎。是由猪肺炎支原体引起的猪的一种接触性、慢性呼吸道病。本病的特征为咳嗽、气喘和呼吸困难。肺有融合性支气管肺炎病变。一、病原及流行特点猪肺炎支原体为该病病原,猪肺炎支原体的初代培养物生长缓慢,经3~30 d,培养物才产生轻微的浑浊,培养基变酸,颜色发生变化。猪支原体菌株不同,毒力也存在差异。     

猪肺炎支原体DJ-166株高密度发酵工艺优化

猪肺炎支原体培养存在对营养需求严苛、培养难度大、菌液培养滴度不高等问题.本试验开展了一系列改进猪肺炎支原体高密度发酵培养工艺的研究,采用添加15％猪血清的优化CH液体培养基(初始pH为7.8),按5％接种量接种,在发酵罐中培养、pH降到6.7～6.8时收获菌液,菌液培养滴度可达1×1010 CCU/mL.本试验结果对猪...     

牛支原体扩大培养效果测定及生长曲线的观察

为了监测培养过程中牛支原体的生长情况,利用含氯化三苯基四氮唑(TTC)牛支原体培养基,采用倾注培养法对牛支原体扩大培养效果进行了菌落形成单位(CFU)计数,通过颜色变化单位(CCU)法进行浓度检测,并测定了OD630值及pH值的变化,据此绘制生长曲线。结果表明:待测牛支原体培养物在梯度稀释后采用倾注培养可方便计数,且计数菌落显色特征明显;CCU法检测待测菌株在96小时时的生长效价为5.0×108CCU/m L;牛支原体纯培养物在不同时段其OD630值变化范围为0.024~0.213,呈现二段式分布,即快速上升阶段和平稳阶段,平稳阶段后有下降趋势;pH值变化范围为6.8~7.9,随时间累积而下降,且在培养48 h内下降速度较快,48~84 h下降缓慢,84 h后基本无变化。