黏膜免疫和半胱胺对十二指肠生长抑素mRNA表达的影响

应用鸡新城疫弱毒苗单一口服和分别灌喂两种剂量半胱胺后再口服鸡新城疫弱毒苗,进行消化道黏膜免疫肉鸡,通过RT-PCR方法检测十二指肠中SS基因表达。结果表明,首免第4周后各个试验组SSmRNA的表达无显著差异。首免第5周后两种剂量半胱胺结合新城疫免疫组SSmRNA的表达比对照组显著增加(P<0.05),单一新城疫免疫组SSmRNA的表达虽然比对照组增加,但并不显著。提示黏膜免疫后淋巴细胞产生的细胞因子可刺激十二指肠SSmRNA的表达,半胱胺可增加十二指肠SSmRNA的表达。肠黏膜免疫可影响动物体内收稿日期:2002-06-17课题来源:国家自然科技基金(30070564)作者简介:杨　倩(1962-),女,南京农业大学动物医学院副教授,博士,主要从事动物免疫神经内分泌研究工作。神经内分泌系统中SSmRNA的表达。     

罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体ELISA检测方法的建立及对疫苗免疫效果的评估

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌ScpB蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,并通过比较测定无乳链球菌疫苗免疫后血清抗体水平变化与攻毒后相对免疫保护率的关系来评估该方法的有效性。结果表明:该方法仅能够特异性的检测罗非鱼的血清抗体,而与其它鱼类的血清抗体无交叉反应,特异性良好,其敏感性为1∶800,批内、批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性,并且抗体水平的变化与相对免疫保护率(RPS)变化具有平行相关性,变化趋势基本一致。本研究首次建立了检测罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,该方法可以作为评估无乳链球菌疫苗免疫效果的有效手段,也为罗非鱼无乳链球菌病的检测提供技术支撑。     

不同剂量三黄连散对罗非鱼感染无乳链球菌防治效果的试验研究

试验旨在从临床症状、疗效评价、死亡率和保护率等方面探索三黄连散对罗非鱼感染无乳链球菌预防效果的量效关系并据此进行剂量筛选。将210尾罗非鱼随机分为7组（即1.67 g/kg剂量组、3.30 g/kg剂量组、6.60 g/kg剂量组、13.20 g/kg剂量组、26.40 g/kg剂量组、无乳链球菌感染对照组和空白对照组）,每组30尾鱼。各剂量试验组饲喂含不同剂量三黄连散的饲料,无乳链球菌感染对照组和空白对照组投喂基础饲料,并于第8天,各剂量试验组和感染组腹腔注射浓度为5.40×107CFU/mL的无乳链球菌菌液,空白对照组腹腔注射灭菌生理盐水。结果表明：攻毒后12 h,感染对照组和剂量组都出现了明显的临床症状并伴随急性死亡。感染对照组的临床症状始终保持较高分值,不同剂量药物组评分均低于感染对照组,13.20 g/kg剂量组和26.40 g/kg剂量组评分呈现出平稳且下降的趋势。无乳链球菌感染对照组的罗非鱼死亡率为73.33%,1.67 g/kg剂量组、3.30 g/kg剂量组和6.60 g/kg剂量组死亡率与感染对照组比较差异不显著（P>0.05）;而13.20 g/kg和26....     

黄芪多糖对吉富罗非鱼生长和免疫功能的影响北大核心

试验旨在研究黄芪多糖(APS)对吉富罗非鱼生长性能和免疫功能的影响。选取外观正常、体质健壮、平均体重(19.32±0.23) g的吉富罗非鱼450尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼。对照组鱼投喂基础饵料,试验组在基础饵料中添加0.05%(0.05%组)、0.10%(0.10%组)、0.15%(0.15%组)和0.20%(0.20%组) APS。试验期28 d。结果显示,与对照组相比,0.10%组、0.15%组吉富罗非鱼的增重率显著提高(P<0.05),饵料系数显著降低(P<0.05)。试验第7 d,试验组吉富罗非鱼血清中的溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(ALP)活性均显著高于对照组(P<0.05)。使用无乳链球菌攻毒10 d后,0.20%组罗非鱼的免疫护率最高(61.25%),0.15%组次之(56.41%)。研究表明,从生长性能、免疫指标和经济角度综合考虑,吉富罗非鱼生产中建议添加0.15%的APS。     

半胱胺对尼罗罗非鱼肠道黏膜结构的影响

选用40尾体质量为(75.0±5.0)g的尼罗罗非鱼为试验对象,随机分为4组,对照组饲喂基础饲料。在基础饲料中分别添加不同水平的饲料添加剂爱渔灵(含半胱胺盐酸盐30%)300、600和900mg/kg作为试验组饲料,饲养30d。采用HE和AB-PAS染色法检测罗非鱼肠道绒毛形态变化及杯状细胞数量变化,观察半胱胺对罗非鱼肠道黏膜结构的影响。结果表明,各试验组罗非鱼的肠黏膜结构完整,层次清晰,肠绒毛排列整齐,杯状细胞结构清晰。试验组的前和中肠道绒毛长度比对照组长,中和后肠道的杯状细胞数量比对照组多,说明在饲料中添加适量的半胱胺可改善罗非鱼的肠道黏膜结构。     

鸡用天然缓释免疫增强剂的研究：天然缓释免疫增强剂对IBD等4？…

对７日龄艾维茵雏鸡投服天然缓释免疫增强剂１丸,１０日龄时分别用ＩＢＤ、ＮＤ、ＩＢ弱毒疫苗及ＮＤ油乳剂灭活苗免疫;免疫后７、１５、２５、３５一５５ｄ定期检测抗体效价;弱毒苗免疫后３５ｄ、灭活苗免疫后５５ｄ分别用强毒攻击。结果各试验组抗体效价显著高于对照组,试验组攻毒保护率提高１６．７￣３３．３个百分点。表明该缓释免疫增强剂能显著增强雏鸡的免疫应答,提高疫苗的免疫效力。     

鱼腥草散预防罗非鱼链球菌病临床效果的初步研究

为探究鱼腥草散对罗非鱼链球菌病的预防作用。本试验选取罗非鱼540尾,随机分为6组,每组90尾。其中第1组为空白对照组,投喂基础饲料,第2组、第3组、第4组、第5组和第6组为试验组,分别在日粮中添加5 g/kg、10 g/kg、20 g/kg、30 g/kg、40 g/kg鱼腥草散进行投喂,连续喂养35天后,进行生长指标、血液生理生化指标、免疫指标和抗氧化指标的测定;第36天进行攻毒试验,从第1组中随机挑选60尾罗非鱼分为空白对照组30尾和感染对照组30尾,分别从第2组、第3组、第4组、第5组和第6组随机挑取30尾罗非鱼做为药物1组、药物2组、药物3组、药物4组和药物5组,除空白对照组腹腔注射0.2 mL生理盐水外,感染对照组和5个药物组罗非鱼腹腔注射菌液0.2 mL浓度为1.51×10⁸CFU/mL的无乳链球菌菌液,连续观察7天。结果：与空白对照组相比,饲料中添加鱼腥草散能够显著(P<0.05)提高罗非鱼增重率、特定生长率、肝脏指数及血清中酸性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性;与感染对照组相比,药物5组的攻毒保护率最高。本研究结果发现...     

SIP亚单位疫苗对无乳链球菌诱导小鼠乳腺炎的保护力评价

无乳链球菌是导致奶牛乳腺炎的重要病原菌,本研究评价了SIP(surface immunogenic protein)亚单位疫苗对小鼠无乳链球菌乳腺炎的免疫保护效果。制备无乳链球菌SIP亚单位疫苗和灭活疫苗,对小鼠进行免疫,并设PBS阴性对照。免疫前后采血测定IgG及IgG亚类的抗体滴度。免疫小鼠分娩后第4天,进行无乳链球菌乳腺攻毒试验。24h后扑杀攻毒鼠,进行乳腺内CFU的测定,制作并观察乳腺组织病理切片。结果显示,SIP亚单位疫苗免疫组IgG及IgG亚类抗体滴度显著高于灭活疫苗组(P0.01)。免疫哺乳小鼠乳腺攻毒后,SIP亚单位疫苗免疫组小鼠乳腺CFU显著低于灭活疫苗组及对照组(P0.001)。乳腺病理切片显示SIP亚单位疫苗组乳腺组织结构较对照组完整,且中性粒细胞浸润程度最小。本研究表明,无乳链球菌SIP亚单位疫苗有望作为奶牛无乳链球菌乳腺炎的候选亚单位疫苗。     

植物乳杆菌对尼罗罗非鱼的肠道黏膜免疫调节及生长性能的影响

探讨植物乳杆菌对尼罗罗非鱼的肠道黏膜免疫、生长性能及抗病力的影响及作用机制。将植物乳杆菌饲喂尼罗罗非鱼后通过测定平均增重、增重率、特定生长率和饵料系数评价生长性能,通过PAS染色反应检测肠道杯状细胞的分泌黏多糖性能,通过荧光定量PCR的方法检测肠道细胞因子IL-1β、NFκB、TNF-α和IL-10的表达量,并用嗜水气单胞菌NJ-1攻毒后计算尼罗罗非鱼的累计死亡率。结果表明,植物乳杆菌组的平均增重、增重率和特定生长率显著高于对照组(P0.05);低浓度嗜水气单胞菌NJ-1攻毒后肠道分泌的中性黏多糖明显减少,而在植物乳杆菌组使杯状细胞分泌的中性黏多糖显著增多;在低浓度攻毒后第1 d,饲喂L.plantarum 08.923组的细胞因子IL-1β的表达量比对照组显著提高(P0.001),但是随着攻毒后时间的延长,植物乳杆菌组的表达量逐渐与对照组接近,而对于TNF-α和IL-10的表达,在攻毒后的第1 d,饲喂L.plantarum 08.923比对照组都显著升高(P0.01),在攻毒后第1 d到第2 d,两组细胞因子NFκB的表达量均显著升高,且两组间差异不明显,但在攻毒后的第3 d,对照组NFκB的表达量急剧回落,而植物乳杆菌组仍保持较高水平,两组间差异显著(P0.01);嗜水气单胞菌腹腔注射攻毒实验中,添加植物乳杆菌后尼罗罗非鱼的累积死亡率显著降低。研究表明,植物乳杆菌08.923对尼罗罗非鱼有显著的黏膜免疫调节能力,在一定程度上能抑制炎症反应,增强机体的免疫应答,因而能显著提高生长性能及抗病力。植物乳杆菌08.923可作为预防水产动物疾病和促进生长的理想选择,本研究结果也为阐明益生菌先天性免疫调节作用机理提供证据。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对细胞因子分泌的影响

为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致病性灭活疫苗,试验B组35日龄二免用经典弱毒疫苗,试验C组35日龄注射生理盐水,对照组均注射生理盐水。分别于首免后1,2,3周和二免后1,2,3,4,5,6周前腔静脉采血分离血清,采用细胞因子ELISA方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12细胞免疫水平。结果显示,仔猪14日龄首次免疫弱毒疫苗后能迅速分泌细胞因子,首免3周以内,试验组IFN-γ分泌量均高于对照组,差异极显著(P0.01);试验组TNF-α分泌量高于对照组,差异极显著(P0.01),且试验A组试验B组试验C组,其差异不显著(P0.05);试验组IL-2分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-10分泌量高于对照组,试验C组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-12分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05)。35日龄二免弱毒疫苗或灭活疫苗3周后,除IFN-γ外,试验A组的TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12分泌水平均高于试验B组和试验C组。结果表明,14日龄首免PRRSV弱毒疫苗和35日龄二免PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独2次免疫PRRSV弱毒疫苗或1次免疫PRRSV弱毒疫苗。     

微囊化大肠杆菌口服灭活疫苗对大鼠免疫效果的研究

不同血清型的致病性大肠杆菌是引起幼畜腹泻的主要病因之一。笔者拟对采用微囊包被技术制备的羊大肠杆菌灭活口服疫苗对大鼠的免疫效果进行评价。将制备的羊大肠杆菌蜂胶佐剂灭活苗作为芯材,天然高分子材料海藻酸钠为壁材,采用喷雾干燥法制备微囊化口服疫苗。微囊化口服疫苗的含菌量为7.52×1011菌·g-1。100只成年健康大鼠随机分为对照组、注射组和微囊包被口服疫苗组(再分为基础剂量、10倍基础剂量和20倍基础剂量三组),免疫后采用微量凝集试验和本室建立的间接ELISA方法检测免疫血清抗体效价并对细胞和黏膜免疫进行检测。微量凝集试验检测结果显示,免疫后7d各试验组即可产生抗体,免疫后28d时抗体效价达到高峰,随后开始下降。间接ELISA方法检测结果显示,免疫后14d各试验组特异抗体转阳,并持续到28d。口服组的抗体效价均显著高于对照组(P0.05),而与注射组无差异(P0.05),且各口服剂量组之间差异不显著(P0.05)。免疫后35d口服试验组特异抗体转为阴性,而注射组可维持到35d;T淋巴细胞转化结果显示,免疫7d后,三个口服剂量组的SI值均显著高于对照组和注射组(P0.05)。免疫后口服各剂量组的肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量均高于同期的对照组和注射组,21d后sIgA含量达到高峰。微囊包被口服疫苗能够产生与注射组同样的体液免疫,同时还可以刺激大鼠机体产生较好的细胞免疫和黏膜免疫。     

四种疫(菌)苗对牦牛联合气雾免疫的研究——1.口蹄疫弱毒IB—RS2猪肾传代细胞疫苗对牦牛气雾免疫试验

自1978年以来,我们采用IB—RS2猪肾传代细胞试制口蹄疫A、O型弱毒疫苗26批,计690,000毫升,并以口蹄疫O型弱毒疫苗为核心,联合口蹄疫A型弱毒苗、牛出败弱毒苗、布氏猪型二号弱毒苗等四种疫(菌)苗(下称四联苗),对牦牛进行了联合气雾免疫试验,后又结合羊败血性链球菌弱毒菌苗、布氏干菌羊型五号弱毒菌苗,以单价、二联、三联对绵羊进行了气雾(或注射)免疫试验。先后在天峻、门源、贵南、海晏、大通等县,免疫牦牛、杂种牛38,282头,绵羊121,625只,初步证明安全。同时分别用本动物进行了各种疫(菌)苗的近期免疫效力、免疫期等项试验,初步证明气雾免疫的效果比较理想,几种苗联合免疫后无明显的相互干扰现象,联合免疫后,不论口蹄疫A     

不同类型高蓝耳疫苗对母猪免疫效价的影响研究

选择210±10日龄后备母猪108头,将其随机分成6组（每组18头）进行对比试验。在210日龄左右,Ⅰ组用4ml高蓝耳灭活苗免疫,Ⅱ组用6ml高蓝耳灭活苗免疫,Ⅲ组用1头份高蓝耳弱毒苗免疫,Ⅳ组用2头份高蓝耳弱毒苗免疫,Ⅴ组用3头份高蓝耳弱毒苗免疫,Ⅵ组为空白对照组,分别在免疫后20、40、60、90、120d以及初产后13天采集血清,检测高蓝耳抗体,研究其抗体消长规律。在试验猪初产后14d,分别给各试验组母猪注射高蓝耳疫苗,方法与首次注射相同,分别在二次免疫后20、40、60、90、120d以及二次产仔后13d采集血清,检测高蓝耳抗体,研究其抗体消长规律。结果表明：免疫高蓝耳疫苗对母猪的产仔数等繁殖性能无影响;母猪免疫高蓝耳疫苗的最佳选择为2头份高蓝耳弱毒苗。     

罗非鱼无乳链球菌疫苗研制及检测IgM抗体ELISA方法的建立

为研究新型罗非鱼链球菌疫苗,并且建立检测罗非鱼无乳链球菌IgM抗体水平的ELISA方法,试验首先纯化了罗非鱼血清中的IgM,制备抗IgM的兔高免血清,优化反应条件,比较不同浓度浸泡型疫苗和注射型疫苗的相对免疫保护率,并利用建立的ELISA方法监测罗非鱼免疫后2周抗体水平以及攻毒后4个月内的免疫鱼血清抗体水平变化。结果表明:高浓度浸泡型疫苗能达到88. 65%的相对保护率; ELISA方法特异性较高,重复试验中变异系数最大值为8. 33%,灵敏度为1∶400。通过对免疫鱼血清抗体的跟踪监测,表明血清抗体在免疫后2周明显上升,且产生的免疫保护力可长达4个月之久。说明建立的ELISA方法可以检测罗非鱼IgM抗体,制备的疫苗通过浸泡的方式免疫,可使罗非鱼获得长达4个月的保护力。     

热应激对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

本试验利用伊莎蛋雏鸡,分别接种新城疫油乳剂灭活苗和Ｎ－７９弱毒苗,油乳剂灭活苗免疫的各试验组抗体滴度稍有下降,与对照组间无明显的差异;Ｎ－７９弱毒苗免疫的各试验组,高温处理２４小时的雏鸡,抗体滴度稍低于对照组,但无明显差异;而高温处理４８小时的各组,抗体滴度均显著低于对照组（ｐ＜０．０５）。     

新必妥对仔猪体液免疫效果的影响

本试验选取21日龄的健康仔猪12头，随机分为3组，分别肌肉注射猪瘟兔化弱毒疫苗1头份（对照组）、猪瘟兔化弱毒疫苗1头份＋猪脾转移因子0．15mL／kg体重（试验1组）和猪瘟兔化弱毒疫苗1头份＋猪脾转移因子0．25mL／kg体重（试验2组），分别于21、60日龄各免疫1次．以研究猪脾转移因子对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影响。结果表明．首免后14～35d试验组的免疫效果均显著优于对照组，二免后5～15d试验2组显著优于对照组。另外，选取35日龄的健康仔猪12头，随机分为3组，分别肌肉注射猪蓝耳病弱毒疫苗1头份（对照组）、猪蓝耳病弱毒疫苗1头份＋猪脾转移因子0．15mL／kg体重（试验1组）和猪蓝耳病弱毒疫苗1头份＋猪脾转移因子0．25mL／kg体重（试验2组），以研究猪脾转移因子对仔猪蓝耳病弱毒疫苗免疫效果的影响。结果表明，免疫后14～35d试验组的免疫效果均显著优于对照组，42～60d试验2组显著优于对照组。表明猪脾转移因子对仔猪体液免疫有一定的增强作用。     

仔猪病毒性腹泻疫苗免疫效果比较

为探讨商品化猪病毒性腹泻三联弱毒疫苗和二联灭活疫苗对仔猪免疫效果的影响,通过前期妊娠母猪跟胎免疫,随机选择胎次相近、无病史新生仔猪80头,随机分成3个试验组和1个对照组。对照组不免疫;试验组仔猪于28日龄首免和65日龄二免三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗,应用ELISA试剂盒进行血清抗体检测。结果表明:试验组抗体阳性率均高于对照组(P0.01),试验组间抗体阳性率第3组高于第1组和第2组(P0.05),腹泻疫苗在母猪妊娠期接种对仔猪表现出一定的保护力,交替免疫三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗效果最佳。本研究为猪病毒性腹泻疫苗免疫提供可行依据。     

植酸酶对奥尼罗非鱼生长、表观消化率与消化酶活性的影响

将600尾奥尼罗非鱼随机分成5组,第1组为对照组,投喂基础日粮,另外4组为试验组,投喂基础日粮中分别添加0、500、1000、1500、2000 U/kg的植酸酶.连续投喂70 d,测定了鱼的体重及消化酶活性.结果表明:与对照组相比,添加1000～1500 U/kg植酸酶均显著提高了鱼体增重率、干物质及磷表观消化率;与对照组相比,添加1000 U/kg植酸酶显著提高了肠道蛋白酶与淀粉酶活性.     

鸡传染性法氏囊疫苗毒对禽脑脊髓炎油乳剂灭活苗免疫效果的影响

21日龄SPF鸡接种法氏囊中等弱毒疫苗A株后,用禽脑脊髓炎油乳剂灭活苗进行免疫,观察法氏囊疫苗毒对禽脑脊髓炎油乳剂灭活苗免疫效果的影响,用ELISA检测禽脑脊髓炎病毒抗体滴度,结果表明试验组血清抗体水平明显下降,其阳性率与对照组比较存在显著差异,说明法氏囊中等弱毒疫苗A株能造成机体免疫抑制,引起禽脑脊髓炎抗体水平下降。     

通威公司成功研制罗非鱼链球菌病口服型疫苗

<正>5月29日,在通威股份有限公司(以下简称通威)海南分公司举办的"海南罗非鱼养殖与疾病防控"会议上,通威药物研究所所长肖丹透露,通威已经研制出针对罗非鱼链球菌病的口服型疫苗,接下来将通过示范点的方式先在部分养殖户中推广。据肖丹介绍,此次研制的口服性疫苗主要针对由无乳链球菌引起的罗非鱼链球菌病,实验室在50LD50(50倍使受试动物半数死亡的毒物剂量)的条件下,对50g以上的罗非鱼进行口服免疫的相对保护