锰苯甲酸卟啉对猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉（MnTBAP）对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组：新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组（在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP）,对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组：新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）进行检测。结果表明：与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

C57BL/6J等近交系小鼠精子冷冻研究进展

小鼠精子冷冻方法虽成功建立多年,但C57BL/6J等近交系小鼠的精子在冻融后的成活率和受精率远远低于封闭群和杂交小鼠的精子。C57BL/6J等近交系小鼠的精子冷冻方法已成为当前大量增加转基因小鼠保种的一个瓶颈,同时成为国内、外近来研究的热点。本文系统介绍了近年国外为改进C57BL/6J等近交系小鼠精子冷冻保存所的做努力和探索。研究包括:各种冷冻保存方法;新培养基的改良;各种冷冻试剂组合;冷冻对小鼠精子质膜伤害机理的研究及其保护方法;以及提高冻融后精子获能和提高授精能力等领域。     

海藻糖和维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响

试验比较了在冷冻稀释液中添加不同浓度海藻糖(0.025,0.05,0.1 mol/L)以及添加10 mg/L维生素C对猪精液冷冻保存效果的影响.结果:(1)添加0.025 mol/L海藻糖组的精子冻后活率与复苏率分别跟对照组相比无显著差异(P>0.05),但添加浓度为0.05,0.1 mol/L的海藻糖组的精子活率和复苏率显著低于对照组(P<0.05).(2)在猪精液冷冻保存稀释液中,添加维生素C组的精子冻后活率和复苏率极显著高于对照组(P<0.01).表明在猪精液冷冻液中,添加0.025,0.05,0.1 mol/L 3种不同浓度的海藻糖对猪精液没有起到保护作用,其中后两者对之有降低的作用;而添加10 mg/L维生素C可取得较好的冷冻保存效果.     

还原型谷胱甘肽(GSH)在小鼠体外受精中的作用初探

为研究还原型谷胱甘肽(GSH)在小鼠体外受精中的作用,试验选用C57BL/6J小鼠(雄鼠12周龄,雌鼠4周龄)、ICR受体鼠(8-10周龄)。GSH添加浓度分别为终浓度0、1 mmol/L、2 mmol/L,每组超排雌鼠5只,转基因小鼠净化试验每个品系超排雌鼠10只。结果显示,在受精液(HTF)中添加GSH 1 mmol/L时,小鼠体外受精效果最好,受精率达70.8%,胚胎形状正常,未受精单细胞与异形胚较少,胚胎移植平均妊娠率达93.5%。     

红景天多糖对藏猪精液冻后品质及精子基因组DNA甲基化的影响

在藏猪精液的冷冻液中添加不同质量浓度的红景天多糖(0,2,4,6,8,10mg/L),制成高密度细管冻精,以冷冻解冻后精子活率、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为精液品质的评价指标,筛选最适红景天多糖添加质量浓度;用甲基化荧光定量法检测3组(鲜精组、未添加组、最适添加组)精子基因组DNA甲基化的水平。结果显示:添加红景天多糖质量浓度为6mg/L组的精子活率显著高于其他组(P<0.05),该组精子畸形率、精子顶体完整率、精子质膜完整率也显著好于未添加组(P<0.05);这3组精子基因组的DNA甲基化水平(0.610 5±0.080 0,0.945 7±0.043 7,0.680 2±0.051 0)中,最适添加组虽显著高于鲜精组(P<0.05),但却显著低于未添加组(P<0.05)。结果表明:在藏猪精液冷冻液中添加质量浓度6mg/L的红景天多糖不仅可以明显改善藏猪精液冻后品质,而且可以明显减少冷冻对藏猪精子基因组DNA甲基化水平的影响,这将为提高藏猪精液冷冻保存效果的进一步研究提供参考。     

白藜芦醇对山羊冷冻精液质量的影响

本实验旨在研究白藜芦醇对山羊冻精质量的改善效果。用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用添加不同浓度(0、0.1、1、10、20μmol/L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,其中不添加白藜芦醇组为对照组。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻,最后在液氮中保存1周。37℃水浴解冻后测定精子活力、顶体完整性、膜完整性和磷脂酰丝氨酸分布等指标。结果表明:与对照组相比,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子直线运动百分率和质膜完整性均提高(P<0.05);10μmol/L白藜芦醇抑制了冷冻解冻后精子ROS的产生(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇冷冻组精子解冻后直线运动百分率低于其他各处理组(P<0.05);白藜芦醇不能缓解冷冻解冻过程对精子总活力、顶体完整性和磷脂酰丝氨酸分布的不利影响。总之,冷冻稀释液中添加10μmol/L白藜芦醇可以改善山羊冻精质量,这可能与白藜芦醇的抗氧化特性有关;但过高浓度的白藜芦醇加重精子的冷冻损伤程度。白藜芦醇是否能提高山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

精液稀释液中添加维生素C和E对陆川猪精液冷冻效果的影响

为了研究维生素C和E作为精液冷冻保护剂对陆川猪细管冷冻精液品质和精浆中抗氧化物酶活性影响的影响,在精液稀释液中分别添加0、300、600以及900μg/m L的维生素C或E,对陆川猪稀释精液进行冷冻-解冻处理后,检测精液冻后的精子活力、运动速率、线粒体活性、顶体和质膜完整性、存活时间等常规参数,采用试剂盒测定精浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱胺肽过氧化物酶(GSHPx)的活性。结果表明:精液稀释液中添加300μg/m L的维生素C可显著提高冻后精子的体外存活时间以及CAT酶活性(P0.05);同浓度的维生素E仅可提高精子的存活时间(P0.05);添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高解冻精子的活力、线粒体活性、质膜和顶体完整性、存活时间以及抗氧化物酶活性(P0.05),同时明显降低精子畸形率(P0.05);当维生素C或E添加量为900μg/m L时,虽可提高线粒体活性、质膜和顶体完整性、CAT酶活等部分指标参数(P0.05),但精子活力与对照组相比没有差异(P0.05)。提示:冷冻稀释液中添加600μg/m L的维生素C或E可以显著提高陆川猪精液冷冻保存效果。     

R848处理小鼠精子对胚胎性别比率的影响

本实验旨在研究一种省时、快速、高效的性别控制技术,在小鼠获能培养基中添加R848(TLR7/8的配体)以获得性别比例偏斜较高的雌、雄后代。通过添加不同浓度(0、0.3、1、3μmol/L)R848孵育小鼠精液60 min后分离获取上、下层精液,并进行受精能力的评价、运动参数检测以及所获胚胎的性别鉴定。结果显示:R848各浓度组受精率均极显著低于对照组,同时1、3μmol/LR848组精子的受精率低于0.3μmol/LR848组(P0.01);0.3μmol/L组和1μmol/L组上层雄性胚胎占比较对照组均升高(P0.01),0.3μmol/L组和3μmol/L下层雌性胚胎占比较对照组均增加(P0.05);随着R848浓度升高,各处理组上、下层精子活力及运动参数等均不同程度降低。本实验条件下,以添加0.3μmol/L R848孵育的小鼠X/Y精子分离效果最佳且获得的雌雄胚胎比例偏斜更高、更稳定。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。     

鸡精液的冷冻速度对精子受精力的影响

从以精子耐冻性为指标而选择的公鸡和普通公鸡中采精,按1℃/分和6℃/分的速率将精液冷冻至-70℃然后投液氮保存。解冻后这两种公鸡精子的受精力不同。经过选择的公鸡,其精液以1℃/分的速率降至-70℃,解冻后受精率最高。而以6℃/分的速率冷冻时,两种公鸡精液的受精率没有差异。这一结果表明,可以用精子的耐冻性为指标进行公鸡的选择,而且在冷冻这种公鸡的精液时,冷冻速     

小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精研究

为了探索一种高效的小鼠精子冷冻方法,试验利用棉籽糖和脱脂奶粉作为冷冻保护剂进行精子冷冻保存,然后再通过精子复苏、体外受精试验,比较冷冻保存复苏后的精子与新鲜精液中精子在受精卵率、2-细胞率、囊胚率方面的差异。结果表明:本方法冻存的精子受精率为70.3%,2-细胞率为58.3%,囊胚率为41.7%,与新鲜精液相比差异不显著(P0.05)。说明本方法适用于小鼠精子冻存。     

辅酶Q10对杜洛克猪精子冷冻保存效果的影响

本研究旨在探讨添加辅酶Q₁₀对杜洛克公猪精液冷冻保存过程中精液品质的影响,试验分为6个组,分别为空白对照组(基础冷冻液)、阴性对照组(基础冷冻液+0.1%氯仿)和试验组(分别在基础冷冻液中添加50、150、250、350μg/mL的辅酶Q₁₀),检测冷冻-解冻后精子运动参数、质膜完整率(MI)、顶体完整率(AI)、线粒体膜电位(MA)、DNA完整率、ROS水平、MDA和ATP含量以及SOD、CAT、GSH-Px活性,并且对精子冷冻-解冻后的超微结构进行观察以及测定各凋亡因子的表达量。结果表明:添加150μg/mL辅酶Q₁₀试验组运动参数、SOD、CAT、GSH-Px活性、ATP、ROS含量、MI、AI、DFI以及线粒体膜电位较空白对照组提高(P<0.01),而MDA含量降低(P<0.05);Bcl-2基因在添加50μg/mL和150μg/mL辅酶Q₁₀组中的表达量高于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase3基因的表达量较空白对照组均降低(P<0.05);扫描电镜观...     

不同染色与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子的分离及应用效果研究

为探究不同Hoechst 33342的染色浓度与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果的影响，本实验采集6只关中奶山羊精液，使用浓度分别为10、11、12、13μL/m L的Hoechst 33342(5 mg/m L)染色液对精液样本进行染色，以流式细胞仪分离X精子和Y精子，应用3种不同冷冻程序冷冻精液，应用体外受精与胚胎发育技术评估关中奶山羊X、Y精液的分离准确性。结果表明：12μL/m L Hoechst 33342染色条件下，奶山羊X、Y精子分离效率达到91.02%，高于10μL/m L和13μL/m L(P<0.01)，最高分选速度为4 134个/s(P<0.05)；公羊个体的精液品质越好，其精子的分离速度越快，但对分离准确率的差异不显著；使用冷冻程序2进行关中奶山羊的X、Y精子冷冻的效果较好（P<0.05）；体外受精48 h后，使用Y精子进行受精的卵细胞的卵裂率高于使用X精子（P<0.05），在胚胎培养第9天，使用Y精子进行受精的卵细胞的囊胚发育率高于使用X精子（P<0.05）。总之，当Hoechst 33342浓度为12μL/m L...     

钌红对玻璃化冷冻牛卵母细胞线粒体Ca~(2+)的调控研究

玻璃化冷冻会严重损伤哺乳动物卵母细胞的线粒体功能,进而极大地限制了其解冻后的发育能力。为此,本试验设置3个钌红(RR)处理组,即牛卵母细胞用含0.5、1、2μmol/L RR的玻璃化冷冻液进行冷冻,解冻后放入含0.5、1、2μmol/L RR的体外成熟液中继续培养0.5h,同时,新鲜卵母细胞一部分不进行冷冻,一部分用不含RR的冷冻液进行玻璃化冷冻,分别作为新鲜对照组和玻璃化冷冻对照组,然后共检测5组牛卵母细胞线粒体Ca~(2+)水平、ATP含量及孤雌激活后胚胎的发育能力,进而研究RR对玻璃化冷冻牛卵母细胞线粒体Ca~(2+)水平的调控作用。结果显示:(1)玻璃化冷冻显著提高了牛卵母细胞中线粒体Ca~(2+)水平(P0.05),而2μmol/L RR处理组线粒体Ca~(2+)水平显著低于冷冻对照组(P0.05),但与新鲜组相比无显著差异(P0.05);(2)玻璃化冷冻显著降低了牛卵母细胞中ATP含量(P0.05),2μmol/L RR处理组卵母细胞中ATP含量显著高于冷冻对照组及0.5、1μmol/L RR处理组(P0.05);(3)玻璃化冷冻对照组卵裂率、囊胚率显著低于新鲜对照组(P0.05),1μmol/L处理组卵裂率、囊胚率与新鲜对照组相比无显著差异(P0.05)。综上所述,RR处理能显著抑制解冻后牛卵母细胞线粒体Ca~(2+)流入,保护线粒体功能,提高其发育能力。本试验结果为正向调控玻璃化冷冻卵母细胞线粒体Ca~(2+)水平,进而提高其发育能力,促进玻璃化冷冻卵母细胞的广泛应用提供了参考依据。     

亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响

本试验研究了亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响。以常规Tris卵黄冷冻稀释液中分别添加2.5μL、5μL、7.5μL、10μL稀释后的亚硒酸钠维生素E(注射液)为试验组,以常规Tris卵黄冷冻稀释液为对照组,对解冻后的精液品质进行测定。结果显示添加5μL、7.5μL、10μL亚硒酸钠维生素E能够显著降低冷冻精液的精子畸形率,且10μL组顶体脱落的精子数量显著降低,精子顶体完整率上升。小剂量(<10μL)组改善了精子存活时间,使精子在体外37℃的存活时间延长至8.5h。     

白藜芦醇和淫羊藿苷对绒山羊精液冷冻品质的影响

为了解不同浓度白藜芦醇和淫羊藿苷对绒山羊精液冷冻品质的影响，本实验采集6只2岁左右、体况良好的晋岚绒山羊精液，混合后分别加到50+0μmol/mL、50+90μmol/mL、50+50μmol/mL、90+50μmol/mL、0+50μmol/mL白藜芦醇和淫羊藿苷中进行冷冻，解冻后利用CASA分析仪、流式细胞仪和酶标仪分别评估不同冷冻配方对精子活力、细胞结构完整性、抗氧化酶含量以及脂质过氧化物含量的影响。结果表明：0+50、50+90、90+50、50+0组解冻后精子活力、顶体完整率和质膜完整率高于50+50(P<0.05)，但前3组之间差异不显著，其中50+90组效果最好；精子解冻后各组间DNA完整性差异不显著；50+90组超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活力显著高于50+50组、90+50组和0+50组，而与50+0组差异不显著；50+90组的MDA含量显著低于50+50，与其他组差异不显著。以上结果表明，在冷冻-解冻过程中，50μmol/mL白藜芦醇+90μmol/mL淫羊藿可以有效提高精子解冻后活...     

稀释液中添加维生素E对宠物犬精液冷冻效果的影响

在宠物犬冷冻精液稀释液中添加质量浓度为0,200,400,600μg/mL的维生素E,以观察对精液冷冻效果的影响。结果表明:冷冻精液稀释液中添加维生素E 400μg/mL时,解冻后精子活力显著高于对照组(P0.05);畸形率极显著低于对照组(P0.01),各浓度维生素E组精子解冻后体外存活时间均极显著高于对照组(P0.01),解冻后精子顶体完整率和冻后精子运动速率(VAP、VSL、VCLL)较对照组都有所提高,但差异不显著(P0.05)。综合各项指标后表明以质量浓度为400μg/mL维生素E组的效果最好。     

海藻糖对民猪精液冷冻保存的影响

为研究海藻糖在民猪精液冷冻中的作用,获得最佳民猪精液冷冻液成分,本试验在BTS、Modena和Zorlesco 3种稀释液基础上添加0.15 mol/L海藻糖,及在Zorlesco稀释液中分别添加0 mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L和0.2 mol/L的海藻糖,研究海藻糖在不同稀释液中及其不同浓度对冷冻的民猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位的影响。结果表明,在Zorlesco稀释液中添加0.15 mol/L海藻糖可明显提高民猪冷冻精子的质量,使精子活率、质膜完整性、顶体完整率和线粒体活性分别达到(44.0±2.4)%、(58.2±2.4)%、(53.2±2.1)%和(51.3±2.3)%,为各组最佳(P<0.05)。将0.15 mol/L海藻糖分别添加在BTS、Modena和Zorlesco3种稀释液中发现,其中在Zorlesco稀释液添加海藻糖效果优于其他两组(P<0.05)。但海藻糖对冷冻前精子的保护作用不明显(P>0.05)。因此,在Zorlesco稀释液中添加1.5 mol/L的海藻糖能够明显提高民猪精子冷冻后质量,是民猪冷冻保存的适宜保护液。