尼帕病毒研究进展

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)是新近发现的引发脑部炎症或呼吸道疾病等重症的新型人畜共患病病毒,该病毒最初于1999年马来西亚尼帕镇的1名脑炎患者脑脊液中分离获得,至今已经历了数次大的流行,造成严重的经济损失和人员伤亡.该病毒可由动物传播给人,也可直接人与人传播,并且能够在猪等动物身上引起严重疾病,狐蝠科的果蝠是该病毒的天然宿主.NiV感染人后的病死率极高,并且目前还没有有效的疫苗和治疗措施,生物危害性极大,被列为生物安全4级病原(BSL4).笔者从NiV的分类及分型、基因和蛋白质组、流行和分布、疫苗研制、临床和病理变化以及实验室诊断技术等方面对NiV做简单的概述.     

尼帕病毒检测技术研究进展

尼帕病毒（Nipah virus, NiV）是一种人畜共患的高致病性病毒，人感染NiV后，死亡率接近40%；猪作为中间宿主，感染NiV后具有高发病率和高死亡率特点。近年来，NiV疫情在我国相邻的多个东南亚国家频繁出现，预示该病传入我国风险日益增高。本研究阐述了近年来NiV在血清学诊断和分子学诊断技术方面的研究进展，包括临床常用的传统技术，以及重组蛋白ELISA、Luminex、二代测序等新兴诊断方法，为临床样本中NiV的鉴定和监测方法更新换代提供参考，对监测NiV从国外的传入情况、防控猪群NiV疫情发生以及守护公共卫生安全具有重大意义。     

基于RAA-CRISPR/Cas12a快速检测尼帕病毒方法的建立

本研究建立了一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)以及CRISPR/Cas12a系统快速检测尼帕病毒(NiV)的方法。针对NiV N和F基因分别设计RAA引物和crRNA,构建反应体系,通过前期对引物、crRNA、反应温度以及反应时间等条件筛选优化建立起高效灵敏的检测方法,并评估了该方法的敏感性、特异性和重复性。结果显示:建立的方法在37℃恒温条件下,1h即可完成检测,最低检测限能够达到10²拷贝/μL,敏感性较高;特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等常见猪病毒均无交叉反应;稳定性较好,对低、中、高浓度病毒质粒均能成功检出且一致性较好。结果表明,本试验建立的NiV快速检测方法操作简单、特异性强、灵敏度高、稳定性好,不需要复杂设备,在蓝光下通过肉眼即可观察结果,可为实现NiV早期快速检测提供有力的技术支持。     

一种鉴别尼帕病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感和特异地鉴别尼帕病毒(NiV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的检测方法,本试验以NiV M基因和HP-PRRSV nsp2基因为靶序列,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用.结果显示,用该方法检测NiV M基因和HP-PRRSV nsp2基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA和HP-PRRSV-nsp2-RNA),线性范围分别为4.6×10¹~4.6×10⁷和4.1×10¹~4.1×10⁸拷贝/μL;最低检出限分别为46和4.1拷贝;该方法组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示出良好的可重复性;该方法仅对NiV和HP-PRRSV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪流感病毒(SIV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)发生交叉反应.用该方法对236份猪实际样品进行NiV和HP-PRRSV核酸检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性.本研究建立的方法为猪实际样本中NiV和HP-PRRSV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段.     

尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立

根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。     

尼帕病毒病及其病原的研究进展

概述了尼帕病毒病在国外的流行状况、尼帕病毒（Nipah virus，NiV）的变异及我国的研究现状，着重阐述了近年来在其基础病毒学、诊断技术及防治方面的研究进展，主要包括病毒蛋白的功能及其相互作用、受体的发现、动物模型、荧光PCR及ELISA诊断技术、抑制NiV感染及治疗等方面的研究成果，为该病的深入研究提供了参考。     

猪感染尼帕病毒的流行特点及防控

尼帕病毒病是一种新发人兽共患传染病,1998年在马来西亚首次出现。引起该病的病原为尼帕病毒（Nipah virus,NiV）,其在猪群中具有高度传染性,人感染后死亡率达40%～75%。NiV主要通过猪只间的直接接触传播,也可通过设备、车辆、衣服、靴子以及犬、猫等机械携带传播;猪是NiV传播的放大器,主要通过呼吸道飞沫或被感染组织将病毒传播给人。果蝠是NiV的天然宿主,因此养猪场选址要远离果树种植区。目前还没有批准的人用或兽用尼帕病毒病疫苗或药物,但多种疫苗候选株在动物模型中显示出良好的保护效果,包括病毒活载体疫苗株、病毒糖蛋白亚单位疫苗株、颗粒样病毒疫苗株等;成功防控NiV感染的关键是做到早发现,在NiV传入高风险地区,对猪群持续进行血清学监测,并对猪场进行严格生物安全管理。本文结合已暴发的猪群尼帕病毒病疫情及人间疫情,探讨猪感染NiV的流行特点,并通过分析暴发原因提出防控措施,以期为猪群中防止该病发生及突发疫情时的应急处置提供参考。     

尼帕病毒研究进展

尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)是近年来新发现的副粘病毒属的亨尼帕病毒,是一种引起人和猪的急性、高度致死性传染性疾病。主要侵害中枢神经系统和呼吸系统,引起急性发热、头痛和不同程度的意识障碍。本文就NiV的流行病学、临床症状、病理变化、病原学、分子生物特性、诊断、治疗等方面进行简单综述。     

5种外来动物疫病并联荧光定量PCR检测方法的研究

根据GenBank中发表的相关病毒的基因序列,通过分析比较小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、西尼罗河热病毒(WNV)、亨德拉病毒(HeV)和尼帕病毒(NiV)的保守区域(PPRV的N基因、ASFV的P72基因、HeV和NiV的H基因,以及WNV的PrM基因),各设计筛选出一套特异性引物和Taqman探针,建立了5种外来动物疫病并联荧光定量RT-PCR检测方法。利用该方法,对103份样本进行了临床检测,结果除阳性对照外,其他均为阴性。检测结果验证了本研究建立的Taqman模式并联荧光定量PCR检测方法具有鉴别诊断的特点,可以作为临床检测这5种病原体的参考方法。     

尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以表达NiV G和F蛋白的真核重组表达质粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF分别免疫BALB/c小鼠,采用常规技术制备杂交瘤细胞;以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR-NiVF)分别感染BHK细胞,通过间接免疫荧光(IFA)筛...     

尼帕病毒蛋白功能研究进展

尼帕病毒病是由副黏病毒科中的尼帕病毒引起的人兽共患病,主要侵害中枢神经系统和呼吸系统,引起急性发热、头痛和不同程度的意识障碍。狐蝠科的果蝠是该病毒的天然宿主。该病自1999年从马来西亚首次发现以来,已造成严重的经济损失和人员伤亡。本文综述了近年来NiV蛋白的研究进展,特别对N蛋白、P蛋白、F蛋白和G蛋白蛋白的结构与功能、病毒入侵的细胞受体及与其结合的病毒囊膜蛋白等问题进行深入分析,从而为进一步的研究提供参考。     

尼帕病毒研究进展

尼帕病毒病（Nipah Virus Disease,NVD）是最近发现的一种新的人畜共患传染病。尼帕病毒（Nipahvirus,NiV）作为其致病病原,对猪和人均有很强的致病力,从而给养猪业带来巨大经济损失,以及给人类带来巨大恐慌。因此了解其病毒特性、基因组结构、致病机理、诊断方法等至关重要。本文针对这几个方面对尼帕病毒作了概述,以便更好地了解该病毒,为其深入研究提供一些参考。     

一种高致死性人畜共患病——尼帕病

1尼帕病的基本情况尼帕（Nipah）病是上世纪末在马来西亚及南亚国家发现和流行的人兽共患的传染病,对人的致死率高达40%～50%。根据OIE记述,检测马来西亚历史样品的结果表明,1996年以来尼帕病毒（Nipahvirus,NiV）就已感染当地猪只,但由于无明显症状并未被察觉,直至1998～1999年暴发了人的急性脑炎才引起高度注意。     

尼帕病毒的研究进展

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)是近年来在东南亚地区多发的一种较新且具有极高传染性的病毒,该病毒不但感染生猪,严重危害养猪业的发展,还威胁人类健康,是一种目前已知的较为烈性的人畜共患传染病.该病毒1999年在马来西亚被发现正式命名后,至今已经出现了数次大流行,造成了较为严重的后果.该病毒在猪群体中传播速度较快...     

抗尼帕病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗尼帕病毒(NiV)的单克隆抗体(Mib),本研究以原核表达并纯化的NiV核蛋白(N蛋白)为免疫原,按常规方法免疫小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经两次有限稀释法克隆,最终获得两株稳定分泌抗N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为A6和C5.Western blot分析表明....     

5种外来病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350-550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。     

非洲猪瘟病毒及诊断技术研究进展

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情。目前,非洲猪瘟抗原检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、PCR技术、荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。抗体检测技术主要是酶联免疫吸附试验、胶体金试纸条法等。根据非洲猪瘟疫情在我国的发生情况,中国动物疫病预防控制中心组织了非洲猪瘟现场快速检测评审,对各种检测方法进行了技术把关,为非洲猪瘟病毒的检测和防控提供了技术保证。     

尼帕病毒和亨得拉病毒核蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）和亨得拉病毒（Hendravirus，HeV）是近年来出现的2种新的高致病性副粘病毒，在我国尚未发现。为防范2种病毒在我国的出现，本研究开展了前瞻性工作，成功研制了针对2种病毒核蛋白（N）的单克隆抗体，可用于病毒监测与诊断。首先利用大肠杆菌表达的2种病毒N蛋白免疫BALB／c小鼠，细胞融合后应用间接免疫荧光的方法对杂交瘤细胞克隆进行筛选，获得了5株N蛋白特异单抗。单抗腹水的抗体效价均超过2×10^5，培养上清抗体效价1：64～1：256。Western—blot和间接免疫荧光试验证明，5株单抗均特异针对N蛋白，其中1株（H4D11）只与HeVN蛋白反应，而不与NiVN蛋白反应，表明它具有鉴别2种病毒的能力。所研制的单抗对建立2种病毒的检测技术，用于动物监测，以防范2种新发传染病在我国流行具有重要意义。     

非洲猪瘟病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷申病毒、猪脑心肌炎病毒等,结果只有ASFV能够扩增出552 bp的目的片段。敏感性试验表明纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1 000倍以上,最低核酸拷贝数检出量可以达到10个拷贝。采用该方法对黑龙江、吉林和河南3个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测,检测结果显示均为阴性,在以上3个地区均未发现ASFV感染情况。     

猪博卡病毒的研究进展

猪博卡病毒是最近发现的一种属于细小病毒科博卡病毒属的单链DNA病毒。它具有三个开放阅读框,能够编码NS1,NP1,VP1和VP2四种蛋白。常与其它致病菌混合感染猪只。可以通过PCR,实时荧光定量PCR,环介导等温扩增技术和其它分子病毒学技术进行检测。目前在粪便、血清、肾脏、淋巴结和其它组织器官检测到该病毒。由于猪博卡病毒是新发现的一种病毒,所以还有很多问题未得到解决,本文将对近几年该病毒的研究进展进行阐述。