新疆雪莲组织培养体系的优化

以新疆雪莲无菌苗的根、茎、叶为外植体,对各种不同激素配比条件下新疆雪莲的再生体系进行了探讨,结果表明:培养基MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 2.0 mg/L对愈伤组织诱导效果较好;而再生芽的诱导培养基为MS+6-BA 0.4 mg/L + NAA 0.05 mg/L+水解乳蛋白500 mg/L;生根培养基为1/4MS + NAA 0.3 mg/L.     

天山雪莲遗传转化体系建立

采用根癌农杆菌介导法进行GFP基因的遗传转化,建立了农杆菌介导天山雪莲遗传转化体系。以天山雪莲胚性愈伤组织为受体;40 mg/L的卡那霉素为胚性愈伤组织筛选质量浓度;胚性愈伤组织预培养2 d后用含100μmol/L AS和500 mg/L脯氨酸的感染工程菌液侵染25 min,能够取得比较理想的转化效果。对8株卡那霉素抗性植株进行PCR及GFP荧光蛋白检测,共获得6株阳性植株。结果表明GFP基因已整合到天山雪莲的基因组中并得到表达。     

新疆天山雪莲组培快繁技术的建立

[目的]探讨新疆天山雪莲组培快繁技术。[方法]以新疆雪莲切除根部的无菌苗,或无菌苗的真叶,或者直接采集野生的新疆雪莲幼嫩部位作外植体,进行愈伤组织诱导培养及丛生芽分化、丛生芽增殖继代培养、生根培养和组培苗移栽试验。[结果]新疆天山雪莲外植体在MS+NAA 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和MS+6-BA 1.0+NAA 0.1 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L培养基上可诱导产生大量的丛生芽;在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 2.0 mg/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L培养基上交替培养,丛生芽继代快速增殖率达1.0∶3.5;组培苗在MS+NAA 0.2 mg/L培养基上诱导生根,生根率达83%;生根的雪莲组培苗经炼苗和移栽后成活,生长健壮。[结论]该研究建立的快繁技术为雪莲野生资源保护和产业化发展开拓了一条有效途径。     

新疆雪莲的氨基酸组成

新疆雪莲，生长在高山雪线以下2000－3000m之间的寒东风化带中，是著名的地方药材，全草入药，具有多种治病功效，且富含氨基酸，必需氨基酸齐全。     

新疆雪莲的组织培养

以新鲜幼嫩的雪莲植株不同部位作外植体,接种于含有不同激素水平的MS培养基上,经15天愈伤组织即形成,其中以小头状花为外植体愈伤组织诱导率达85％以上,且愈伤组织生长快。将愈伤组织转移到附加KT,BA,ZT的培养基上,2—3周后芽开始分化;转移到附加适量NAA,IAA,IBA的培养基上,芽的分化亦好。试管苗转移到含IAA的1/2MS培养基上可分化出根;带根的试管苗经锻炼后移栽到花盆内并保湿,成活率可达50％左右。有不少试管苗可在叶片基部甚至愈伤组织上长出许多花柱,少数试管苗可直接长出小头状花序。以上诱导和培养均需一定的低温条件或经低温处理。     

新疆雪莲组培苗的染色体观察

[目的]为雪莲的组织培养奠定细胞学基础。[方法]以新疆雪莲无菌苗的根部、下胚轴、真叶及种胚为外植体进行组织培养,观察愈伤组织和不定芽阶段的染色体变异。[结果]4种外植体形成的愈伤组织细胞中有二倍体、少量四倍体、六倍体、非整倍体及其他倍性细胞。以种胚为外植体的愈伤组织中染色体数目异常的频率最高,但愈伤组织不出芽或出芽量极少,且芽形态不正常。以根部、下胚轴和真叶为外植体的愈伤组织出芽比例高,茎尖、根尖细胞染色体大多数为二倍体,少数为嵌合体,嵌合体苗中四倍体细胞比例很小。愈伤组织中存在异常的有丝分裂现象,不定芽中难以发现。[结论]雪莲组织培养中的染色体变异是由激素引起的,非整倍性的愈伤组织细胞分化能力低。     

番茄ZF遗传转化再生体系的研究

番茄 ZF无菌苗出芽后 5～ 7d,子叶切成 0 .5 cm× 0 .5 cm小块 ,下胚轴切成 1cm的小段作为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,玉米素 1.0 mg/ L,6 -苄基腺嘌呤 1.0 m g/ L 分别与吲哚乙酸 0 .0 5 ,0 .2 ,0 .5和 1.0 mg/ L配成 7个激素组合 ,经诱芽比较 ,确定 MS+BA1.0 m g/ L+IAA0 .2 mg/ L 为最佳生芽培养基 ,MS添加吲哚乙酸0 .0 ,0 .0 5 ,0 .1和 0 .2 mg/ L 进行生根比较 ,确定 MS+IAA0 .0 5 mg/ L 为最佳生根培养基。卡那霉素 (Kan)临界浓度确定为 2 5 mg/ L。转化培养过程为 :外植体于生芽培养基 2 6℃ ,2 6 0 0 lx光下预培养 2 4 h。农杆菌 L BA4 4 0 4过夜培养 ,用 MS培养液稀释 10～ 2 0倍 ,侵染外植体 5 m in,2 8℃黑暗共培养 4 8h。然后在 MS+BA1.0 mg/ L+IAA0 .2 m g/ L+Kan2 5 mg/ L+Cef2 0 0 mg/ L 筛选培养基上诱芽 ,每 14 d转接 1次。芽长至 2 cm时 ,切下转至 MS+IAA0 .0 5 mg/ L+Kan2 5 m g/ L+Cef10 0 m g/ L 培养基上生根。     

石榴组织培养及遗传转化技术研究进展

石榴为多年生木本植物,且遗传背景较为复杂。随着生物技术的发展与运用,组织培养与基因遗传转化技术结合的方法将成为石榴育种的新途径。从石榴组织培养和遗传转化两方面分别综述外植体的选择、愈伤组织的诱导和分化,以及遗传转化的主要方法、所用基因类型和抗生素种类、转化植株的鉴定方法等,并对石榴遗传转化研究前景进行展望。     

生菜遗传转化过程中克服玻璃苗的研究

为了克服生菜遗传转化过程中玻璃化现象,对生菜选择培养基中不同浓度的琼脂、蔗糖、细胞激动素（ＢＡ、ＫＴ）、ＡｇＮＯ３及抗生素浓度进行了研究。结果表明：下班苗的数量随琼脂、蔗糖浓度的增加而减少;高浓度的细胞激动素和抗生素会增加下班苗的数量;加入一定量的ＡｇＮＯ３可抑制下班苗的产生,其最佳浓度为２．０ｍｇ／Ｌ。     

石斛属植物组织培养及遗传转化研究进展

石斛作为一种集药用和观赏于一体的珍稀植物,近年来其组培快繁和基因工程研究取得了比较大的进展.综述了石斛属植物组织培养外植体、培养基、增殖与分化、遗传转化方法、靶材料、选择标记基因和报告基因等方面的研究进展,为石斛的开发和利用提供科学依据.     

雪莲PEBP基因原核表达载体的构建及表达

根据雪莲PEBP基因序列设计特异性引物,利用实验室构建的Teasy-PEBP质粒为模板,扩增PEBP基因,与表达载体pET-30a(+)连接转化BL21(DE3), PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,测序分析.经IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果表明:PEBP得到大量表达,表达量占菌体总蛋白的26.8;,融合蛋白的相对分子量大约是28KD,与理论值相符,为进一步研究该蛋白的理化性质奠定了基础.     

激素和外植体类型对新疆雪莲愈伤组织诱导的影响

以新疆雪莲叶片、叶柄和根为试验材料,研究了MS基本培养基附加不同质量浓度的植物激素对新疆雪莲愈伤组织诱导的影响。结果表明:单因素诱导中,NAA的诱导效果显著优于其它激素;以NAA为诱导激素,叶片与根,叶柄与根之间的诱导率存在极显著性差异,诱导效果:根>叶柄>叶片,最高诱导率分别为100%、98%、44%;NAA与6-BA激素组合对3种外植体愈伤组织的诱导中,叶片与叶柄诱导率之间存在极显著性差异,叶片、叶柄与根的诱导率之间存在显著性差异,诱导效果:叶片>叶柄>根,最高诱导率分别为98%、64%、23%。     

新疆雪莲多倍体的诱导初探

用秋水仙素和2%二甲基亚砜共同处理新疆雪莲种子、胚根和茎段,以诱导多倍体雪莲.结果表明,茎段经过100 mg·L-1秋水仙素处理3 d诱导效果最佳,同时,离体培养其嵌合体苗茎段及叶片,诱导不定芽生成,获得了四倍体细胞比例达到90%以上的植株.     

植物激素和活性炭对新疆雪莲组培苗生根的影响

研究了不同植物激素和活性炭对新疆雪莲组培苗生根的影响,测定了根长、根粗、根数和生根率4个生根指标,结果表明:添加生长素IAA、IBA和NAA均可以不同程度地促进生根,但0.2mg/L的IAA效果最佳,根长最长达5.5mm,根粗最小0.96mm,根数最多达9.75条,生根率达100%;添加活性炭可以提高生根质量,最适添加量为1mg/mL。此时,根长最长达25.51mm,根粗最小为0.6mm,根数最多达13条,生根效果最佳。     

悬铃木遗传转化过程中选择压力的确定

以二球悬铃木(Platanus acerifolia)的下胚轴和离体叶片为材料,研究了植物遗传转化过程中常用的2种选择剂卡那霉素(Kan)和除草剂(PPT)对其不定芽分化的抑制作用,同时试验了2种选择剂对试管苗生根的影响。结果表明,Kan和PPT对悬铃木下胚轴和离体叶片的不定芽分化及试管苗生根均表现出较强的抑制作用,其中12.5-20.0 mg/L Kan或2.0 mg/L PPT能完全抑制叶片外植体正常的不定芽分化,50 mg/L Kan或1.0 mg/L PPT可完全抑制下胚轴的不定芽分化;Kan和PPT抑制试管苗生根的选择浓度分别为50 mg/L和4.0 mg/L。试验确定了以悬铃木的下胚轴和叶片为转化受体时不同筛选阶段Kan和PPT的选择压力,为其基因工程改良奠定了基础。     

新疆雪莲全长cDNA文库构建及表达序列标签(ESTs)特性分析

以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTM cDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA , 用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链.通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA .将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上, 并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库.经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL).随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上.将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据.其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性.这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息.