药用植物麦冬土壤中拮抗放线菌的分离和筛选

采用平板稀释分离法从麦冬植被土壤中分离得到放线菌52株,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌为指示细菌,采用平板涂抹法筛选出17株有拮抗作用的放线菌,其中抑菌效果较好的放线菌是F13、F25、F50号菌株,其抑菌圈直径在15～20 mm之间,占分离得到放线菌总数的5.77％,F13号菌株的抑菌作用最强,抑菌圈直径达20 mm;采用平板对峙法进一步测定了F13、F25和F50菌株对棉花黄萎菌、番茄早疫菌和玉米串珠镰刀菌的菌丝生长抑制率,F13对黄萎菌的抑菌效果较强,抑菌率为56.7％,F25对串珠镰刀菌的抑菌效果较强,抑菌率为41.2％.     

棉花黄萎病菌拮抗酵母菌筛选及鉴定

为获得对棉花黄萎病菌有拮抗效果的酵母菌株,以230株酵母菌为研究对象,通过平板对峙法和琼脂块法进行筛选,并利用形态特征、生理生化特性和26S r DNA序列分析对其进行鉴定。结果表明,筛选出的6株拮抗酵母菌(ZHB39、19-10、F3、S4B2-13、T1、MLY1)随着黄萎病菌孢子浓度的降低,其抑菌活性增加,当黄萎病菌孢子浓度为104cfu/mL时,拮抗酵母菌的抑菌圈直径最大,分别为12.50、13.83、16.33、25.17、21.83、11.17 mm,均具有较好的抑菌能力。6株拮抗酵母菌株分别被鉴定为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、Kazachstania sp.、美极梅奇酵母、威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、Barnettozyma californica。     

柑橘溃疡病拮抗放线菌筛选及其抑菌机理研究

[目的]明确保存的放线菌资源对柑橘溃疡病菌的抑制作用和抑菌机理.[方法]通过平板对峙培养法筛选对柑橘溃疡病菌Xanthomonasaxonopodis pv.citri）有抑制作用的放线菌菌株,并采用电导率法、考马斯亮蓝法和斐林试剂法测定拮抗菌株发酵滤液对溃疡病菌的影响.[结果]筛选出3个对柑橘溃疡病菌有拮抗作用的放线菌菌株,抑菌圈直径达42.0～60.0 mm,且该3株放线菌发酵液能提高溃疡病菌菌液电导率,增加还原糖和蛋白质含量.[结论]3株拮抗菌能破坏柑橘溃疡病菌细胞膜完整性,增加细胞膜通透性,引起细胞质外渗.     

人参锈腐病及疫病生防放线菌筛选

为获得对人参锈腐病、疫病具有拮抗活性的土壤放线菌,利用平板稀释培养法从黑龙江省人参基地和西北地区分离获得578株放线菌,用琼脂块法初筛,用生长速率法、悬滴法对抑菌效果较好的菌株进行抑菌活性复筛。结果获得5株对病原菌具有显著拮抗性的生防放线菌,其中Act11、Act12菌株的拮抗效果尤为显著,Act12最大抑菌圈直径达20.15 mm,其发酵液对病原菌菌丝的抑制率最大为83.4%,对人参锈腐病孢子萌发抑制率最高为99.8%。     

棉花黄萎病菌拮抗细菌的分离、筛选及鉴定

采用稀释平板法从健康棉花根部土壤中分离得到细菌菌株1520株.通过室内平板多次筛选获得25株对棉花黄萎病菌具有强拮抗抗作用的细菌菌株.25个拮抗细菌温室盆栽防治黄萎病的试验结果表明:2株拮抗细菌在防治棉花黄萎病中表现较好的防病效果,其中868菌株的防治效果为67.3%.根据2个菌株的培养特征和生理生化特性,初步鉴定868菌株为Pseudomonas fluorescens,112菌株为Bacillus megatherium.     

拮抗放线菌LJ50和MJ52的分离与初步鉴定

采用常规方法从3种蔬菜地土壤中筛选出2株对棉花黄萎病菌具有拮抗作用的放线菌LJ50和MJ52,通过传统的形态特征和部分生理生化测定,这2株拮抗放线菌属链霉菌属的白孢类群．离体条件下这2株拈抗放线菌的发酵液对棉花黄萎病菌、苹果轮纹病菌、黄瓜炭疽病菌、棉花立枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌等8种病原真菌均具有抑制作用。     

3株棉花黄萎病菌拮抗菌株生防、促生效果研究

为测试对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有拮抗作用的3株菌(kx-4、kf-43-1、kf-5-1)对棉籽发芽的影响及在盆栽和大田试验中拮抗、促棉花生长的作用。利用发酵液法对3株拮抗菌抑菌活性、促芽效果进行测定;通过切根蘸菌法、灌根接种法分别测定了拮抗菌对棉花黄萎病的盆栽、大田防病和促生效果。结果表明,3株拮抗菌无菌发酵滤液,对棉花黄萎病菌菌丝的抑制率为65.49%～87.41%,与对照比棉籽发芽率提高2.86%～14.29%;3株拮抗菌在盆栽、大田试验中防效均显著高于对照,对棉株均有不同程度的促生作用。其中拮抗菌株kf-43-1株防效最好,盆栽防效最高可达80.27%;在大田接拮抗菌20 d后防效为53.95%;kx-4株促生效果最好,发酵液灌根处理的棉株株高、下胚轴直径、始节高、铃数、有效铃数、衣分的测量数值均显著高于对照及其余2株拮抗菌发酵液灌根处理的棉株。     

拮抗杨梅溃疡病菌的放线菌筛选与鉴定

采集不同植被的土壤样本,分离得到放线菌173株。以杨梅溃疡病菌YM5为靶标菌,通过抑菌圈法对分离菌株进行拮抗性测定,获得有拮抗作用的放线菌61株。其中YZF3菌株对YM5的抑制作用最强,抑菌圈直径达32.87mm。YZF3菌株革兰氏染色反应呈阳性,生长温度为10~40℃。16SrRNA基因序列经校对、拼接后与GeneBank数据库中相关种属的序列进行BLAST比较,YZF3菌株为黄三素链霉菌(Streptomyces flavotricini)。     

黄瓜枯萎病菌的拮抗放线菌筛选

采用对峙培养法和抑菌圈法进行黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选,结果表明:菌株PM-1对供试的14种病原菌均具有抑制作用,其中对番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌、小麦纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌以及棉花黄萎病菌的抑制作用尤为明显,抑菌带超过20mm.菌株PM-1无菌发酵液5倍、10倍稀释液对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制效率达88%以上,拮抗菌株PM-1产生的拮抗物质导致靶标菌菌丝细胞畸形,出现囊泡、肿胀,崩溃消融,从而抑制其生长.     

一株放线菌对辣椒青枯菌的拮抗作用及其鉴定

为获得拮抗辣椒青枯菌的生防放线菌,从烟草青枯病和辣椒青枯病重病地块健康植株的根围土壤中分离筛选放线菌。结果表明,采用平板对峙培养法筛选得到一株编号为M3-3①的拮抗菌,其拮抗作用表现为:对峙培养24、48、72h后,平均抑菌圈直径分别为42.73、38.80、32.60mm。经16SrDNA序列分析和形态学特征(菌落整体形态、菌丝、孢子和孢子链等特征)观察,将该菌鉴定为淡紫灰(薰衣草)链霉菌(Streptomyces lavendulae)。     

魔芋软腐病拮抗放线菌的筛选及其抑菌活性研究

[目的]从土壤中分离筛选魔芋软腐病拮抗放线菌,测定其发酵抑菌活性,并对其活性成分进行初步分离。[方法]采用平板对峙培养法筛选出魔芋软腐病拮抗放线菌。对活性较强的拮抗菌株SJK18作不同碳源、氮源、温度及pH值等培养条件的单因素试验,并分别测定其发酵液的抑菌活性。分别用乙醇和乙酸乙酯萃取拮抗菌的发酵液,并测定抑菌活性。[结果]共分离得到112株放线菌,其中11株具有抑菌能力。在以玉米粉为碳源、KNO3为氮源、温度为30℃及pH值为6.0的单因素试验条件下,SJK18发酵液的抑菌活性最强,且活性的pH值适应范围在5.5～10.0。乙醇提取物的抑菌圈直径为17.0mm。乙酸乙酯萃取浓缩液无抑菌活性,而其萃余液抑菌圈直径为20.0mm。[结论]筛选获得1株对魔芋软腐病原菌有较强拮抗作用的放线菌。     

放线菌DX23对马铃薯炭疽病菌的拮抗作用及其鉴定

为获得马铃薯炭疽病菌的生防放线菌,从马铃薯种植地健康植株的根围土壤中分离筛选放线菌.结果表明,采用平板对峙法筛选得到1株编号为DX23的拮抗菌,其拮抗作用表现为:培养72h后,平均抑菌圈直径为25.7mm.根据形态学特征、生理生化特性和16SrDNA序列对比分析,将该菌株初步鉴定为链霉菌属的栗褐色类群Streptomyces badius.     

西藏色季拉山土壤拮抗放线菌的筛选

利用稀释平板倾注法从西藏色季拉山22份土壤样品中共分离到各种放线菌菌株120株。以水稻稻瘟病菌、立枯丝核菌、棉花枯萎菌、烟草赤星病菌为指示菌,采用对峙培养法共获得对植物病原真菌抑菌圈直径>15 mm的菌株7株。将这7株放线菌菌株进行液体发酵试验,并采用生长速率法测定各个菌株发酵液的抑菌活性。结果表明,菌株2152无论是活体还是其发酵液对4种供试病原菌均表现强烈的抑菌效果,发酵滤液稀释10倍后对水稻稻瘟病菌的抑制率达78.6%。     

棉花黄萎病拮抗细菌7-30菌株的筛选与鉴定

[目的]筛选大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌,并对其进行生理生化鉴定。[方法]以棉花黄萎病痛原菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliag）V-190为测试菌,筛选对其具有拮抗作用的芽孢细菌。通过初筛及复筛,得到1株具有较强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,并对该菌株进行了形态特征观察和生理生化鉴定。[结果]通过初筛从各地的土样中分离到84株拮抗细菌菌株,再对其中拮抗能力较好的18株进行了复筛,得到抑菌圈达18．9mm的强抑菌活性的拮抗细菌7-30菌株,结合其形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断其为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。[结论]获得了大丽轮枝菌的拮抗芽孢细菌7-30菌株。     

抑制茶饼病菌放线菌及细菌的筛选与鉴定

为筛选出用于生产上防治茶饼病的生防菌,克服化学农药防治造成的农药残留问题,采用平板稀释和喷雾法,从茶树根际土壤中筛选抑制茶饼病菌的拮抗放线菌和细菌,结合形态学特征与ITS序列测定的方法对拮抗菌进行鉴定。结果表明:从采集土样中共分离到59株放线菌和19株细菌,从中各筛选出1株对茶饼病菌具有拮抗作用的放线菌(C6)和细菌(B-9),平均抑菌圈直径分别为27.00mm和32.00mm;经鉴定,C6为酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies),B-9为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

烟草根围土壤对主要烟草病害的拮抗放线菌株筛选及其鉴定

从采自我国烟草主要产区的38份土壤样品中分离获得放线菌296株.采用平板对峙培养法从中筛选出对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)和黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)有拮抗活性的菌株227株,其中对青枯病菌拮抗活性较高的YYD3-17、YYD3-19、YYD3-29、YYD3-32和HLL4-9菌株抑菌圈直径达45 mm以上;对黑胫病菌拮抗活性较高的BXⅡ3-1、BXⅡ5-4、BXⅡ5-5、BXI21-1和YYD1-4菌株抑菌圈直径达25 mm以上.依据前人的研究成果,对这10株放线菌进行初步坚定,结果显示它们均属于链霉菌属(Strepto myces spp.).其中YYD3-17、YYD3-19、YYD3-29和YYD3-32属于灰红紫类群;BXⅡ3-1、BXI21-1同属于吸水类群;而BXⅡ5-4、BXⅡ5-5、YYD1-4和HLL4-9分属白色亚群、白孢亚群、金色亚群和绿色亚群.BXⅡ5-4和BXⅡ5-5分别被坚定为白色链霉菌种(S.albus)和阿布拉链霉菌种(S.aburviensis).     

棉花黄萎病拮抗芽孢杆菌S12的筛选鉴定及拮抗机制的分析

[目的]近年来,新疆棉田由于长期连作导致棉花黄萎病呈逐年加重的趋势,筛选适合新疆特殊地理环境的高效拮抗菌株对防治棉花黄萎病尤为重要.[方法]采用平板对峙和琼脂平板扩散法从生长健康的棉花根际土壤中筛选拮抗细菌,利用常规PCR方法扩增拮抗细菌16S rRNA基因序列,应用BLAST进行同源性搜索,通过构建系统发育树并结合生理生化检测对拮抗细菌进行鉴定.用底物水解法检测其产生水解酶的能力,PCR方法检测其产生抗菌肽的潜力.[结果]枯草芽孢杆菌S12对大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)的抑菌率为56％,抑菌圈直径为20 mm,其发酵液对病原菌孢子萌发抑制率为95.93％,表现出较好的抑菌能力;菌株S12能合成蛋白酶,含有srfAA、spaS、bacA抗菌肽合成基因,具有一定的生防潜力.[结论]获得了可抑制大丽轮枝菌的芽孢杆菌菌株S12,并分析了其拮抗机制,为新疆棉花黄萎病的生物防治提供菌株资源和理论指导.     

铁棍山药内生菌的分离及对白菜软腐菌拮抗菌的筛选

用涂布平板法从铁棍山药(Dioscoreaopposita Thunb. CV. Tiegun)中分离得到32株内生菌菌株。用抑菌圈法测定其对白菜软腐菌(Erwiniacarotovora var. carotovora)的拮抗作用,共得到11株对该病原菌有拮抗作用的菌株,占菌株总数的34.4%。其中抑菌圈直径大于或等于10mm的菌株有4株,分别是B-2、B-5、B-6和F-8,占菌株总数的12.5%,抑菌圈直径最大的可达15mm。对具有拮抗作用的菌株进行革兰氏染色和芽孢染色,结果表明:这11株菌株全为细菌,均无芽孢;革兰氏染色阳性(G+)的有4株,革兰氏染色阴性(G-)的有7株;有3株菌株为球菌,其余为杆菌。     

芽孢杆菌HT-7对棉花黄萎病菌的拮抗 作用及拮抗因子初探

为获取安全、高效、可持续性的棉花黄萎病生防资源,并探究其主要的拮抗因子,从而有效开展棉花黄萎病的绿色防控,从黄萎病抗性棉(海7124)根系土壤中分离得到1株对棉花黄萎病具有良好防治效果的菌株Bacillus sp.HT-7,采用平板对峙法和盆栽试验探究拮抗菌株的抗病能力,并以硫酸铵盐析及基因克隆的方法探究拮抗因子,进行抗菌验证。对峙试验结果表明,菌株HT-7对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌的抑菌率达56%;盆栽试验结果表明,菌株HT-7可以显著提高陆地棉对黄萎病的抗性。与对照组(未采用菌株HT-7进行土壤处理)相比,采用菌株HT-7进行土壤处理的棉花伤根接种大丽轮枝菌后对黄萎病的防治效果高达82.58%。进一步研究发现,HT-7发酵液可以显著抑制大丽轮枝菌孢子萌发,经鉴定可知,菌株HT-7的主要拮抗因子是蛋白质类物质β-1,3-1,4-葡聚糖酶。从该菌株中克隆得到β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因,并将其在E.coli BL21中进行高效表达,纯化的重组酶活性为23.5 U/mL,重组酶能明显抑制大丽轮枝菌的生长,抑菌率达25%。综上,成功分离出1株拮抗芽孢杆菌HT-7,并确定β-1,3-1,4-葡聚糖酶是HT-7拮抗菌的一个重要毒力因子。     

烟草青枯菌土壤拮抗真菌的筛选及鉴定

为有效地利用生物防治技术防治烟草青枯病,提升烟草及烟草制品的产量和质量,解决使用化学防治造成的有害物质残留超标问题,通过采用平板对峙培养法、分子生物学与形态学相结合的生物防菌鉴定法等,对从健康的烟草根际土壤中分离获得的烟草青枯菌土壤拮抗真菌进行筛选和鉴定研究。结果表明:从烟草根际土壤中分离获得的56株真菌中有3株具有拮抗作用,经鉴定分别为淡色生赤壳菌(Bionec-tria ochroleuca)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)和嗜松青霉(Penicillium pinophilum),其拮抗效果从高到低依次为淡色生赤壳菌(平均抑菌圈直径达31.23mm)>棘孢木霉(11.28mm)>嗜松青(10.54mm)。