ME 49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性

【目的】通过ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性的研究,了解该虫株速殖子的毒力特点,为深入研究弓形虫弱毒株的致病特征提供研究基础。【方法】以ME 49株弓形虫速殖子为研究对象,用血球计数板将速殖子梯度浓度稀释为10~0,10~0-10~6个/mL,腹腔注射昆明小鼠,死亡小鼠的组织直接涂片检测肺脏及肠系膜淋巴结速殖子或大脑组织中弓形虫包囊数量,肺脏常规石蜡切片进行H.E及IHC染色,统计涂片和MAT方法的结果分析弓形虫的感染情况,并统计小鼠的感染率和生存率。【结果】0-60 DPI,死亡小鼠组织涂片显微镜检查和MAT法检测小鼠血清中弓形虫IgG抗体结果显示,10~0、10~0、10~1及≥10~2速殖子浓度组小鼠的弓形虫感染率分别为0、20%、60%及100%。10~4速殖子浓度组小鼠有3只分别在12、16、19 DPI死亡;10~5速殖子浓度组小鼠有2只在11 DPI死亡,1只在8 DPI死亡;10~6速殖子浓度组小鼠有2只在9 DPI死亡,在7、8、10 DPI各死亡1只,感染弓形虫的小鼠生存率为62.07%(18/29)。对死亡小鼠的肺脏和肠系膜淋巴结直接涂片,显微镜镜检可见弓形虫速殖子;H.E及IHC染色,肺脏可以观察到弓形虫包囊及弓形虫抗原。对10~0、10~0、10~1及10~2处死小鼠的大脑组织研磨镜检,结果显示10~0和10~0感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数均为0;10~1感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数分别为60、100和0;10~2感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数量分别为20、40、40、60和0。60-600 DPI,10~3速殖子浓度组小鼠在184、435和569 DPI各有1只死亡,大脑中未检测到弓形虫包囊;10~5速殖子浓度组小鼠1只在188 DPI死亡,大脑包囊数量为20,其余小鼠存活时间为590 DPI。【结论】本研究探讨了ME 49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性,≥10~2速殖子浓度可引起小鼠100%感染,10~6速殖子浓度可引起小鼠100%死亡,小鼠死亡的时间为7-19 DPI,感染小鼠生存率为62.07%(18/29),大脑包囊成囊率为53.85%(7/13),平均包囊量为0-53个包囊/小鼠大脑,最长存活时间590 DPI。ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性较弱,大脑可见弓形虫包囊,高浓度速殖子可引起小鼠死亡。     

一猪场发生弓形虫病的临床诊治

弓形虫病是人畜共患的一种原虫病。猫是弓形虫病的终末宿主,在其体内进行繁殖,随粪便排出卵囊。人和多种动物是弓形虫的中间宿主,在其体内进行无性繁殖,形成弓形虫速殖子和包囊,随排泄物排出体外。当弓形虫的感染性卵囊或速殖子和包囊一旦侵入中间宿主体内皆可引起弓形虫病或隐性感染。猪对弓形虫的感染率较高。特别是近年来,在一些养猪场及养猪户中爆发此病,死亡率可高达60%。对养猪事业及人体健康造成了严重的威胁。2014年3月21日,某猪场饲养员来微山县畜牧局门诊部说有猪发生死亡,请求兽医前往该场进行临床检查。     

猪弓形虫病的实验室诊断与治疗

[目的]对猪场发生弓形虫的病例进行诊断和治疗,并提出防治措施.[方法]通过猪的临床检查、脏器的剖检变化观察、病料的染色镜检和PCR方法对疑似弓形虫病进行诊断.对病猪采用复方磺胺嘧啶钠治疗,对全群猪口服磺胺脒预防.[结果]通过病猪的临床症状、剖检变化确定为弓形虫病,染色镜检能观察到虫体,通过PCR扩增出病猪脏器中弓形虫的特性条带.[结论]复方磺胺嘧啶钠能控制该猪场弓形虫病的病情.     

猪弓形虫病PCR诊断方法的建立

以具有35个拷贝的重复序列B1基因作为弓形虫种特异的遗传标记,建立诊断弓形虫病特异性的PCR方法.敏感性和特异性试验结果表明:该PCR方法最低能检测到10个弓形虫速殖子DNA,且与寄生于猪体内的6种常见微生物无交叉反应,说明该PCR方法具有高度的敏感性和特异性.动物感染试验检测结果表明,在试验动物出现明显临床症状时,对取材的7个组织样品用该PCR方法检测,有6个组织样品为阳性,其中扩增结果最清晰的的组织为肺和肝组织.     

感染小鼠肠道内猪痢疾密螺旋体的定位研究

用过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP)对感染猪痢疾密螺旋体的小鼠肠道组织切片进行染色观察。发现特异的酶染颗粒主要分布于盲肠,其次是结肠前段和后段。在感染的早期,主要分布于肠腺的深部,以后有逐渐向肠腔面转移的趋势。在小肠和肠细胞内未见有特异性的酶染颗粒。通过与常规的镀银法比较,作者认为PAP法更为灵敏、特异,不失为一种有效的猪痢疾病的研究方法。     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

猪包囊型弓形虫病的抗原定位和病理组织学变化的研究

本文用组织学方法制石蜡切片，ＨＥ染色，显微镜下观察１３０例，死亡的妊娠母猪和流产胎儿、死胎、弱仔、哺乳仔猪，僵猪、育肥猪的心、肝、肾、肺、脑、胃、肠等脏器，弓形虫病包囊在各个器官的定位和其病理组织学变化。     

不同冻存法对肌肉冰冻切片后HE染色和肌球蛋白ATP酶染色效果的影响

使用分步法和一步法冻存巴马香猪背最长肌,冰冻切片后比较苏木精-伊红染色法(HE染色)和肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色法(ATP酶染色)效果。结果表明:分步法冻存的肌肉样品冰晶少,细胞形态完整,HE染色效果好,核质明显;ATP酶染色效果好,可较好地区分Ⅰ型Ⅱ型肌纤维。一步法冻存的肌肉样品冰晶多,细胞形态不完整,HE染色效果差,核质模糊;ATP酶染色效果差,基本染不上色,无法对肌纤维类型进行区分。分步冻存法的建立为通量式制备猪肉的恒冻切片奠定了基础,也为进一步开展相关性状的生理学、遗传学及种猪选育提供了很好的表型测定方法。     

猪弓形虫PCR检测方法研究及初步应用

以微线粒体MIC3基因作为弓形虫特异的遗传标记,建立了猪弓形虫特异PCR检测方法。经过试验摸索出猪弓形虫PCR检测的最佳反应条件,对敏感性和特异性进行研究,该方法能特异性地扩增出弓形虫基因组中相应片段,与微小隐孢子虫,贾第虫、旋毛虫和球虫等相关寄生虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到10个弓形虫速殖子的DNA。该方法的各项指标达到了弓形虫的检测要求。     

梭形住肉孢子虫和巨型住肉孢子虫包囊各部分的免疫特性研究

运用对流免疫电泳(CIE)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对梭形住肉孢子虫和巨型住肉孢子虫的包囊壁、包囊液、缓殖子及全色囊抗原的免疫特性进行了比较研究。结果表明:缓殖子抗原对抗血清的免疫反应最强.     

猪弓形虫病兽医卫生检验的试验研究

屠宰猪弓形虫病多呈隐性或慢性感染,宰前检疫的重点应放在血清学检查上。用ELISA或IHAT试验能有效地检出本病,且前者比后者具有抗体检出早、持续时间长、阳性检出率高的优点。宰后检验应着重检查肺、肝、淋巴结的病变。支气管肺炎、灶性坏死性肝炎、出血性坏死性淋巴结炎、非化脓性脑炎是急性感染期的特征性病变。转为慢性感染的病猪,由于急性病损的修复,而代之以淋巴网状内皮系统细胞的明显增生。其淋巴结的肿大和“髓样变”是比较特征的。病猪肉的无害化处理,采用高温煮沸2.5小时或-25℃冷冻10天,均可取得良好的效果。     

利用环媒恒温基因扩增法检测生猪刚地弓形虫

基于已公布的刚地弓形虫Sag2基因序列设计了1套特异引物,经过条件优化,成功建立了针对刚地弓形虫(简称弓形虫)的环媒恒温基因扩增检测法.根据扩增弓形虫和其他几种病原生物的效果对该方法进行评估.结果表明,该方法只检出致病性弓形虫,特异性良好;检测最低速殖子浓度为4个/μL.对长沙、株洲、湘潭三地生猪血样检测的结果是仔猪、成猪和种母猪弓形虫感染率分别为6.45%、7.69%和15.38%.     

Investigation on the co-infections of Toxoplasma gondii with PRRSV,CSFV or PCV-2 in swine in part of China

The objective of the present investigation was to estimate the prevalence of Toxoplasma gondii infection and co-infection with porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV), classical swine fever virus(CSFV) and porcine circovirus type 2(PCV-2) in pigs in China. A total of 372 tissues or serum samples collected from pigs distributed in 9 provinces/municipalities of China during the period from February 2011 to November 2012 were assayed for T. gondii antigens and antibodies using enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) technique, while the PCR was designed for the detection of the PRRSV, CSFV and PCV-2, respectively. The total positive rate of T. gondii, PRSSV, CSFV and PCV-2 was 9.14%(34/372), 50.00%(186/372), 37.10%(138/372) and 3.23%(12/372), respectively. Among the 34 T. gondii positive samples, 26 samples were simultaneously infected with T. gondii and viruses, while the remaining eight samples were infected with T. gondii alone. In addition, the co-infection rate of T. gondii with PRSSV, T. gondii with PRSSV and CSFV, T. gondii with PRSSV and PCV-2, T. gondii with CSFV and PCV-2, T. gondii with PRSSV, CSFV and PCV-2 was 1.61%(6/372), 4.03%(15/372), 0.27%(1/372), 0.27%(1/372) and 0.81%(3/372), respectively. The results of the present survey revealed that PRRSV and CSFV were the common pathogens co-existing with porcine toxoplasmosis in China, and both of them could increase the chances of T. gondii infection in pig. This is the first report of T. gondii co-infections with viruses in pigs. It is very important to understand the interactions of parasite and virus, and can be used as reference data for the control and prevention of co-infections of T. gondii and viruses in pigs.     

驽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及应用

根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。     

细胞凋亡抑制因子6(Api6)在高脂肺损伤中的作用研究

目的:了解单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响及细胞凋亡抑制因子6(Api6)的表达情况.方法:将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,分别饲以普通饮食和高脂饮食,14周后获得上述2组小鼠的肺部组织切片,进行油红O染色、HE染色和免疫组化实验,观察单纯高脂饮食对小鼠肺组织形态学的影响;提取小鼠肺组织RNA,检测Api6在病变小鼠肺组织中的表达.结果:与普通饮食组小鼠肺组织相比,油红O染色可见高脂饮食组小鼠肺组织有明显的脂质沉积;HE染色和增殖期细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色可见高脂饮食组肺组织肺泡间隔增宽,肺组织炎性细胞浸润,同时增殖期细胞明显增多;Api6在高脂饮食组小鼠肺组织中的表达明显升高.结论:高脂饮食可直接导致小鼠肺组织脂质蓄积和炎性损伤,Api6可能在其发病机制中发挥一定的作用.     

利用组织化学染色和偏振光显微镜检识植物组织中草酸钙结晶的研究

[目的]探讨利用组织化学染色和偏振光显微镜检识植物组织中草酸钙结晶的可行性。[方法]将闪光相思树（Acacia stellaticeps Kodela,Tindale ＆ D．Keith）叶状柄用乙二醇甲基丙烯酸酯包埋后制作半薄切片,分别用甲苯胺蓝和氨基黑10B对切片进行染色,利用偏振光显微镜在透射光和偏振光下对染色的切片进行观察和拍照,并且与在偏振光下观察和拍摄到的未染色切片进行对比。[结果]与单纯使用偏振光观察未染色切片和使用透射光观察甲苯胺蓝或氨基黑10B染色的切片以及使用偏振光观察氨基黑染色10B的切片相比．用偏振光观察甲苯胺蓝染色的切片能更准确地检识草酸钙结晶。[结论]该研究为检识植物组织中草酸钙结晶提供一种新的思路和方法。     

应用细胞培养方法分离猪源弓形虫虫株

为获得猪源弓形虫野生虫株,对细胞培养过程中的培养基种类、血清用量及培养佐剂等条件进行优化,选择最佳分离条件。对临床血清学检测呈阳性猪场的19份血液样品进行弓形虫虫株的培养检测,共获得野生虫株10株。运用PCR方法进行初步鉴定,证实分离虫株为弓形虫野生虫株。结果表明,细胞培养方法是一种分离弓形虫虫株较为理想的方法。     

标记抗体染色法检查布氏杆菌的研究

为了建立一种快速、简便、敏感、特异地检测动物病理材料中布氏杆菌的方法,选用四种标记抗体法,对5种共15个生物型的布氏杆菌,以及大量与流产有关或常常污染病理材料的对照细菌,分别进行了纯菌、感染实验动物及牦牛组织材料的染色检查,并与柯氏染色法及细菌分离培养法进行了比较。结果表明,四种方法对于各种材料中的布氏杆菌(粗糙型犬布氏菌除外)均呈阳性反应,而绝大多数对照菌均呈阴性反应。其中尤以SPA法染色背景更为清晰,非特异性反应更少。这些方法既简便、快速,检出率也较高。对于布氏杆菌病的诊断和疫情监测,是很有价值的。