牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明：（淋巴细胞+ 刀豆蛋白 +TF）对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于（淋巴细胞+ TF）组和（淋巴细胞+脂多糖+TF）组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组 (P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。     

紫衫醇对小鼠不同组织巨噬细胞功能的影响

为了探讨紫杉醇(Paclitaxel,PA)对小鼠不同组织巨噬细胞增殖和功能的影响。无菌操作制备小鼠腹腔、骨髓和脾脏巨噬细胞,在体外细胞培养体系中分别加入不同浓度40、80、160 ng/mL的PA和脂多糖(LPS)共培养,采用MTT法检测细胞增殖,ELISA和Griess法分别检测细胞分泌TNF-α和NO量,瑞氏-吉姆萨染色法测定腹腔巨噬细胞吞噬能力。结果表明： PA促进腹腔巨噬细胞和LPS诱导的腹腔和骨髓巨噬细胞增殖,但抑制脾脏和骨髓巨噬细胞以及LPS诱导的脾脏巨噬细胞增殖;PA抑制不同组织巨噬细胞分泌TNF-α,但促进腹腔和脾脏巨噬细胞分泌NO;PA提高了腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。PA对小鼠不同组织巨噬细胞的免疫功能均有影响,这为进一步阐明PA的免疫调节机理提供了新的理论依据。     

脂多糖诱导奶牛细胞因子及其他相关物质变化研究进展

目前,奶牛的亚急性瘤胃酸中毒(SARA)的发生率较高,这是因为瘤胃中革兰氏阴性菌(GNB)崩解释放大量脂多糖(LPS)引起的。脂多糖刺激后,会导致一系列的细胞因子级联反应,相应的乳蛋白及其他物质也会发生变化,对奶牛生产产生了很不利的影响。笔者就脂多糖刺激对奶牛细胞因子、乳蛋白及其他物质的变化做一具体综述。     

嗜水气单胞菌脂多糖对乌鳢抗氧化性能及其他生理功能的影响

摘要：以乌鳢为试料,研究灭活嗜水气单胞菌脂多糖（LPS）对其抗氧化性能、免疫功能及消化功能的影响,试验结果表明嗜水气单胞菌LPS能提高乌鳢的抗氧化性能、免疫功能及消化功能,但不同浓度脂多糖的生理作用不同,0.8 mg/ mL组可提高乌鳢的抗氧化性能：在第10天时血液CAT酶活力达0.17U、SOD酶活力为16.56U/mg,均比对照（CK）组的高;0.6 mg/ mL嗜水气单胞菌脂多糖能提高乌鳢血液溶菌酶、胃肠道淀粉酶、蛋白酶的活力：0.6mg/ mL组LPS处理的乌鳢血液溶菌酶活力到第20天时为最高,达到0.0399U,在第10天时,淀粉酶活力为17.21U,蛋白酶活力为0.36U,均高于对照组。     

AtGHR1介导拟南芥对LPS先天免疫反应的分子机制研究

植物先天免疫的分子基础是位于植物细胞膜的受体蛋白对病原菌特有分子模式的特异识别。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的核心组分,可以被动物细胞质膜的TLR4复合物识别。为了探索植物细胞识别LPS的受体,用动物TLR4氨基酸序列比对拟南芥蛋白数据库,发现拟南芥AtGHR1氨基酸序列同TLR4高度类似。利用β-葡萄糖苷酸酶(GUS)报告基因和绿色荧光蛋白标记技术,发现AtGHR1在叶片和根尖中强表达,其编码蛋白位于细胞质膜。在AtGHR1基因缺失突变体atghr1叶子上,含有LPS的病原菌Pst DC3000繁殖的数量显著高于在拟南芥野生植物叶子上的数量,说明atghr1比野生植物更感病。LPS处理诱导H_2O_2和细胞质Ca~(2+)浓度的升高,但是在拟南芥野生植物和突变体atghr1幼苗之间没有显著性区别。在atghr1突变体保卫细胞内,利用NO荧光探针对LPS诱导的NO爆发进行实时检测,发现NO依赖的荧光信号显著低于野生植物。转录组芯片研究发现,在表达水平上受LPS调控的基因中,有部分依赖AtGHR1的存在。这些数据表明,AtGHR1是拟南芥感应LPS必需基因,部分参与拟南芥对LPS的先天免疫反应;在AtGHR1以外,还有其他未知基因参与这一过程。     

La_2O_3-黄酮纳米复合材料的制备及其抗氧化与抑菌性能研究

黄酮类化合物具有较好的抗菌性能,而稀土氧化物具有较强的清除羟基自由基能力。本研究利用硅烷偶联剂(KH560)的偶联接枝作用,将黄酮接枝在纳米La2O3表面,制备La2O3-黄酮复合纳米材料,并进行清除羟基自由基和体外抑菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)试验。结果表明,该复合材料具有较强的清除羟基自由基能力和抑制细菌生长能力。细胞毒性试验结果表明,黄酮的存在使该材料具有较低的细胞毒性和较好的细胞相容性。La2O3-黄酮纳米复合材料有望应用于食品保鲜添加剂和医学等领域。     

家兔子宫内膜细胞炎症模型的建立

摘要：胶原酶消化法分离和培养家兔子宫内膜细胞,大肠杆菌细菌脂多糖（LPS）诱导子宫内膜细胞炎症,以培养细胞的形态学和传统炎症指标作为炎症发生和发展的判断标准。以不同浓度的LPS作用于细胞,收集不同时段培养上清液,ELISA法测定TNF-α、IL-1β的含量。结果表明,100ng/mL LPS是体外培养的子宫内膜细胞诱导炎症的最适浓度。炎症模型组培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量比同期空白组高（P＜0.01）,表明炎症模型建立成功。     

脂多糖与β葡聚糖对迟钝爱德华氏菌亚单位疫苗的免疫促进效果研究

为了研究脂多糖与β葡聚糖的协同免疫促进效果,本论文重组表达了迟钝爱德华氏菌的一个高效亚单位疫苗候选蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）,利用纯化的重组GAPDH（rGAPDH）蛋白单独或混合脂多糖和β葡聚糖免疫牙鲆,免疫后通过检测牙鲆抗体水平、免疫相关基因表达及免疫保护力三方面指标变化对脂多糖和酵母β葡聚糖的免疫促进效果进行研究。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测结果显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆的抗体效价在免疫后第14和30天均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆,在第30天时其效价为211.76;荧光定量PCR检测结果显示,相比PBS对照组,牙鲆在注射免疫后脾脏组织中IL-1β、IL-6、MHC-IIα、IgM、TCRα及C型溶菌酶6种免疫相关基因表达量均出现不同程度的上调,而其中脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在免疫后多个时间点其基因表达水平均显著高于单独免疫rGAPDH蛋白的牙鲆;免疫保护性实验结果同样显示,脂多糖和β葡聚糖与rGAPDH蛋白共免疫组牙鲆在攻毒后累计死亡率显著低于对照组和单独免疫rGAPDH蛋白组,直至第14天累计死亡率为30%,相对免疫保护率为68%。研究表明,脂多糖和β葡聚糖作为疫苗免疫刺激剂使用可显著增强牙鲆的免疫应答水平,提升亚单位疫苗的免疫效果。     

脂多糖对肠黏膜微血管内皮细胞表达TLR2和TLR4的影响

为研究TLR2、TLR4在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致肠黏膜微血管内皮细胞(RIMECs)损伤中的作用,以体外培养的肠黏膜微血管内皮细胞为模型,用浓度为1、5、10μg/mL的LPS刺激RIMECs3、6、9、12、24h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞表面TLR2和TLR4的表达情况;再以浓度为1、5、10μg/mL的LPS刺激RIMECs9h后,半定量RT-PCR法检测细胞TLR2和TLR4的表达情况。结果发现：与对照组比较,不同浓度LPS刺激均能引起RIMECs表面TLR2和TLR4mRNA表达增加。不同浓度LPS刺激不同时间后,RIMECs表面TLR2和TLR4mRNA表达基本均在9h达到峰值,且无时间依赖性。用LPS刺激RIMECs9h,5μg/mL的LPS对细胞表达TLR2mRNA作用最强且无剂量依赖性,10μg/mLLPS对细胞表达TLR4mRNA作用最强且呈剂量依赖性。TLR2和TLR4在LPS损伤RIMECs的过程中起到重要作用。     

娑罗子中脂肪酸成分分析

采用乙醚索氏抽提法提取婆罗子中的脂肪油.经BF3-CH3-OH甲酯化处理,用气相色谱-质谱连用法(GC-MS)测定脂肪酸的组成.婆罗子出油率为30.2%,试验共分出57个峰,首次确定52种脂肪酸成分.其中主要的脂肪酸是亚油酸(41.29%)、棕榈酸(17.81%)、油酸(14.08%)、硬脂酸(3.19%)和15-二十四碳烯酸(2.16%),不饱和脂肪酸总含量高达73.256%.     

栀子苷对小鼠急性肺损伤保护机制的研究

为了探究栀子苷能否对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤发挥保护作用及其潜在的作用机制。雄性Balb/c小鼠,于鼻腔滴注LPS前1 h腹腔注射栀子苷(50 mg/kg)或者地塞米松注射液(5 mg/kg),滴注LPS 24 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6和IL-10的浓度。通过细胞分类计数法分析BALF中细胞总数、巨噬细胞和中性粒细胞的变化。采用蛋白印迹法(Western-blot)分析核转录因子-κB（NF-κB）信号转导通路激活的程度。腹腔注射栀子苷可降低小鼠肺干湿比（W/D值）;改善肺组织病理学结构,减少肺泡出血和炎性细胞浸润且伴有髓过氧化物酶活性下降;抑制促炎性细胞因子TNF-α和IL-6分泌,促进抗炎性细胞因子IL-10生成。栀子苷通过缓减炎症反应保护LPS致小鼠急性肺损伤,其机制可能与阻止NF-κB信号转导通路的激活有关。     

3种方法提取大肠杆菌E.coli脂多糖的比较

寻找大肠杆菌E.coli脂多糖的最佳提取方法。分别用改良热酚法、超声波处理法、煮沸法从大肠杆菌细胞壁中提取脂多糖,经纯化后分别在721分光光度仪上测其吸光值;再用3种方法提取的脂多糖分别免疫草鱼,计数法测受试草鱼血液中白细胞的数量,愈创木酚法测受试鱼不同组织中过氧化氢酶的活力(用OD值表示)。改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,其吸光值分别是1.973、1.003和1.153;改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,免疫草鱼测得受试鱼的白细胞数量分别为159个/μL、160个/μL和135个/μL,测得受试鱼血液中的过氧化氢酶活力分别是0.09、0.083、0.078,测得脾脏中的过氧化氢酶活力分别是0.083、0.078、0.06。改良热酚法提取的大肠杆菌脂多糖浓度高、免疫活性强,是相对比较好的一种提取方法。     

连翘酯苷对内毒素作用下RAW264.7细胞功能的影响

为探讨连翘酯苷(FS)对内毒素(LPS)作用下RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α、吞噬功能的影响。收集处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养细胞,在培养液中分别加入脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养。采用MTT法检测细胞增殖,Griess和ELISA法分别检测RAW 264.7细胞分泌NO和TNF-α量,染色法检测细胞吞噬能力。结果表明：低、中剂量FS可显著促进细胞增殖,而中和高剂量FS可缓解LPS对细胞的刺激作用;与LPS组比较,FS对LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌NO影响不明显,但中、高剂量FS明显促进RAW 264.7细胞分泌;LPS与FS均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。FS对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α以及吞噬功能都有影响,结果提示这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。     

细菌聚羟基脂肪酸酯转基因植物研究进展

本文综述了短链、中链及含短链与中链两类单体的细菌聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates，PHAs)的合成途径及关键酶基因。本研究所获得的短链与中链PHA合成酶基因的特征。以及向拟兰芥、油菜等植物中转化这些基因时，启动子和表达载体的构建，代谢流的控制，转基因烟草生产PHA的优势及其存在的问题。     

大豆种子脂肪酸合成代谢的研究进展

大豆种子油是人类食用油的重要来源，该油用量占全世界食用油的31％。大豆种子油的主要成分是三酰甘油，其中的重要营养是脂肪酸。一般大豆品种的种子含油量约为18％～22％，其中的脂肪酸含量与组成分别是11．73％的棕榈酸(16：0)、3．29％的硬脂酸(18：0)、21．81％的油酸(18：1^△9)、54．16％的亚油酸(18：2^△9.12)以及8．98％的亚麻酸(18：3^△9，12，15。大豆种子脂肪酸合成主要发生在质体中，参与脂肪酸合成的酶主要为乙酰辅酶A羧化酶和脂肪酸合酶。通过基因工程改造大豆脂肪酸生物合成代谢，包括提高种子脂肪酸含量、改善脂肪酸组成，可以满足人类对大豆油日益增长的需求，并可以使大豆油更具有营养价值与特殊的工业应用价值。本文介绍了大豆种子脂肪酸合成代谢的基本途径，对近来脂肪酸合成代谢的基因工程调控研究进展进行了综述与展望。     

瘤胃原虫对细菌活性及代谢的影响

瘤胃是反刍动物进行饲料消化的发酵罐,瘤胃中寄存的复杂微生物主要包括瘤胃细菌、原虫和真菌,其相互作用为饲料的消化吸收提供了可靠的保障。研究原虫对细菌活性的影响,以探讨原虫是否有助于促进或保持瘤胃细菌的活性。以2头安装有永久性瘤胃瘘管的西门塔尔牛作为瘤胃液供体动物,同时以羊草为发酵底物,设置3个处理,分别包括细菌组、原虫组及原虫+细菌组。各处理羊草的发酵规律采用体外培养法连续测定24 h。发酵结束后测定瘤胃液的pH值,各处理组羊草的总产气量和各气体成分(包括CH4、CO2和H2)含量以及各挥发性脂肪酸(VFA)的产量用气相色谱仪测定。结果表明,细菌+原虫组的总产气量显著高于细菌组(P 0. 05),原虫组总产气量为零;细菌+原虫组的总挥发性脂肪酸及乙酸、丙酸和丁酸的产量极显著高于细菌组、原虫组(P 0. 01)。结果提示,细菌+原虫组的发酵效率均高于细菌或原虫单独培养发酵的效果,说明原虫在羊草细胞壁的降解发酵过程中,提高了瘤胃细菌的活性。进一步揭示了植物细胞壁在瘤胃内的降解是在细菌和原虫的共同作用下完成的,瘤胃细菌和原虫在降解植物细胞壁的过程中存在协同效应。     

水稻UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因(OsLpxA)RNA干扰载体的构建及遗传转化

细菌脂多糖由O-抗原,核心多糖和脂质A三部分组成,脂质A是细菌内毒素活性的根源。植物脂多糖与细菌脂多糖组成基本相似,但不具有微生物脂多糖的高毒性。目前,对植物脂多糖的合成机制缺乏最基本的认识,因此研究植物脂多糖的合成具有重要的科学价值。作者在水稻基因组中发现一个含有大肠杆菌Ec Lpx A功能结构域的基因,命名为OsLpxA,该基因催化水稻脂质A合成的第一步反应。本研究用水稻(Oryza sativa subsp.Japonica)苗期的叶片为材料,提取总RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增OsLpxA基因的si RNA靶序列,并将其连接到表达载体p TCK303上,构建了RNA干扰载体p TCK303-OsLpxA-RNAi。将该载体通过农杆菌介导法转化水稻,共获得59株具有潮霉素抗性的转化苗。然后利用潮霉素的特异性引物对全部抗性苗进行PCR检测,其中有38株转化苗呈阳性,表明潮霉素标记基因已整合到了水稻的基因组中。最后,利用定量PCR检测38株阳性苗中OsLpxA基因在转录水平表达的变化。结果表明,其中27株阳性苗中导入的OsLpxA基因RNA干扰结构成功地降低了目的基因的表达。该结果为后续对OsLpxA基因功能的研究提供参考。     

免疫应激对不同品种猪氨基酸消化率的影响

本试验通过注射大肠杆菌脂多糖（LPS）构建免疫应激模型,旨在探讨免疫应激对不同品种猪氨基酸消化率的影响。分别选用6头体重为32±3.6 kg莱芜猪、鲁莱猪和大约克夏猪,采用2×3因子设计（免疫应激*品种类型）,实施回肠末端T型瘘管手术。试验猪单栏饲养,术后经过14 d适应期,进行氨基酸代谢试验。结果表明：在所测定的16种氨基酸中,除了半胱氨酸和组氨酸,免疫应激降低了不同品种猪的氨基酸的回肠表观消化率（P < 0.01）（P < 0.05）;大约克猪对总氨基酸的回肠表观消化率的降低量高于鲁莱猪和莱芜猪（P < 0.05）。     

甘蓝型油菜种质群体十八碳脂肪酸含量变异及相关性分析

油菜是重要的植物油来源,十八碳脂肪酸是植物油重要的品质性状。本研究搜集了来自全国各地的363份甘蓝型油菜,种植在贵阳环境条件下,对该批材料的硬脂酸(C 18∶0)、油酸(C 18∶0)、亚油酸(C 18∶2)和亚麻酸(C 18∶3)含量进行测定和分析。Shapiro-Wilk检测显示,4个性状均不呈现正态分布。相关性分析显示:硬脂酸与油酸(r=0.66)、亚油酸(r=0.39)均呈极显著正相关关系;油酸与亚油酸(r=0.51)呈极显著正相关关系;亚油酸与亚麻酸呈极显著正相关关系(r=0.30)。通过主成分及分类分析,筛选出部分特异的育种材料。主成分分析获得PCA 1及PCA 2分别为51.84%和28.12%,共解释了79.96%的表型变异。其中,硬脂酸含量最低的材料为六60(林编13-47号)(0.00%)和4000(0.00%);油酸含量最高的材料为全B 02-1(85.39%);亚油酸含量最高的材料为印AB(林编13-5号)(31.63%);亚麻酸含量最低的材料为yh(林编12-64号)(8.51%);有益脂肪酸最高的材料为全B 02-1(103.75%);有害脂肪酸最低的材料为无名AC 21(10.02%)。该研究可为贵阳环境条件下甘蓝型油菜十八碳脂肪酸育种提供材料,也可为该性状的基础研究提供材料。     

南京农业大学在小分子RNA参与植物抗病免疫方面取得重要进展

正近日,《Nature Communication》(影响因子11.47)在线发表了南京农业大学植物保护学院微生物-植物互作实验室的一项最新研究成果,论文题为《mi RNA863-3p通过先后作用正向和反向调节因子调控植物抗细菌免疫》("mi RNA863-3p sequentially targets negative immune regulator ARLPKs and positive regulator SERRATE upon bacterial infection")。植保学院牛冬冬博士为第一作者,南京农业大学为