程序升温-气相色谱技术同时检测饲料中10种防腐剂

实验采用DB-5MS毛细管柱结合程序升温技术的气相色谱法在7 min内同时分离和检测了饲料中丙酸（PA）、山梨酸（SA）、苯甲酸（BA）、脱氢乙酸（DHA）、对羟基苯甲酸甲酯（MP）、对羟基苯甲酸乙酯（EP）、对羟基苯甲酸丙酯（PP）、对羟基苯甲酸丁酯（BP）、对羟基苯甲酸异丙酯（IPP）、对羟基苯甲酸异丁酯（IBP）等10种防腐剂。结果表明,10种添加剂的线性相关系数r≥0.9989,检测限为0.1～5μg/mL,样品平均回收率为81.5%～90.0%,相对标准偏差小于5.0%。     

HPLC法测定复方多聚甲醛粉中水杨酸和苯甲酸

建立了HPLC法测定复方多聚甲醛粉中水杨酸和苯甲酸的方法。采用AgilentZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,以0．05mol／L磷酸二氢钾溶液（pH6．0）-甲醇（90：10）为流动相,流速1．0mL／min,检测波长230nm,柱温40cC,进样量10μL,以外标法定量。水杨酸和苯甲酸在1．0～50μg／mL范围内均线性关系良好,相关系数r均为0．9999,平均回收率分别为99．06％～99．69％（RSD=0．09％～0．63％）和99．12％～99．73％（RSD=0．16％～0．48％）,n=3。本方法简便、准确,可快速测定复方多聚甲醛粉中水杨酸和苯甲酸的含量,为产品质量控制提供了依据。     

高效毛细管电泳法同时检测饲料中七种防腐剂

建立酸性条件下同时分离测定山梨酸(SA)、苯甲酸(BA)、脱氢乙酸(DHA)、对羟基苯甲酸甲酯(MP)、对羟基苯甲酸乙酯(EP)、对羟基苯甲酸丙酯(PP)、对羟基苯甲酸丁酯(BP)七种防腐剂的高效毛细管电泳法。本试验用甲醇:水=1:1(体积比)的混合液作为提取剂提取饲料样品中防腐剂;以40 mmol/l磷酸二氢钾(KH2PO4)和100 mmol/l十二烷基硫酸钠(SDS)的1:1体积比混合液(pH=4.00)作为缓冲液,采用高效毛细管胶束电动色谱法测定样品中七种防腐剂。该方法在19 min内实现了七种防腐剂的分离;SA、BA的线性范围分别为1～500μg/ml和3～500μg/ml,DHA、MP、PP、BP、PP的线性范围均为5～500μg/ml,线性相关系数≥0.999 5。SA、BA、DHA和四种对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检测限分别为0.5、1.5、3.0、2.5μg/ml;样品平均回收率为80.8%～107.0%,相对标准偏差≤5.0%。该方法高效快速分离了多种防腐剂,并且可以应用到各种饲料样品的检测。     

高效液相色谱-DAD法同时测定饲料中6种防腐剂

本实验建立了同时分离检测饲料中苯甲酸(BA)、山梨酸(SA)、对羟基苯甲酸甲酯(MP)、对羟基苯甲酸乙酯(EP)、对羟基苯甲酸丙酯(PP)和对羟基苯甲酸丁酯(BP)6种防腐剂的高效液相色谱-二极管阵列检测器(DAD)法。以甲醇和0.1 mmoL/L甲酸铵溶液(pH5.5)为流动相,结合溶剂梯度和流速梯度,在220~300 nm为提取最大吸收波长的条件下对这6种防腐剂进行分离与检测。结果表明,6种防腐剂在6 min内实现了基线分离,线性相关系数在0.9896~1.0000,BA和BP的检出限分别为0.1μg/mL和0.025μg/mL,SA、MP、EP和PP的检出限均为0.05μg/mL。样品加标平均回收率为85.5%~95.2%,相对标准偏差(RSD)为1.47%~3.25%(n=5)。     

毛细管胶束电动色谱法检测饲料中防腐剂

建立了同时分离测定山梨酸(SA)、苯甲酸(BA)、对羟基苯甲酸甲酯(MP)、对羟基苯甲酸乙酯(EP)、对羟基苯甲酸丙酯(PP)、对羟基苯甲酸丁酯(BP)6种防腐剂的胶束电动毛细管色谱方法。以十二烷基硫酸钠(SDS)-磷酸盐-硼砂缓冲体系为缓冲液,pH为7.73,电压为20 kV,于245 nm波长下对样品进行检测。结果表明,6种防腐剂均在14 min内实现很好分离,SA、BA的线性范围分别为0.5～150μg/mL和15～200μg/mL,MP、EP的线性范围均为2～200μg/mL,PP的线性范围为5～200μg/mL,BP的线性范围为1～200μg/mL,线性相关系数为0.9987～0.9995,平均回收率为89.7%～96.7%,RSD≤5.91%,检测限为0.25～10μg/mL。     

HPLC法检测乳品中对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素

建立了乳制品中的对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素的高效液相色谱分析方法.样品用甲醇提取后,使用C18反相色谱柱分离,以甲醇-醋酸水溶液为流动相,紫外检测器检测,检测波长256nm和305nm条件下5种防腐剂在35min之内完全分离.在一定条件下各组分的相关系数均大于0.9990,线形范围1～100mg/kg,回收率为83.7％～103％.     

五氯柳胺混悬液中对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯含量的HPLC测定

建立高效液相色谱法(HPLC)测定五氯柳胺混悬液中防腐剂对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的含量。色谱柱采用Hypersil BDS C18(150 mm×4.6 mm;5μm),流动相为0.025 mol/L无水磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH 6.5)∶乙腈=65∶35,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,进样量为20μL,柱温为25℃。结果表明,对羟基苯甲酸甲酯在0.923μg/mL^9.230μg/mL线性范围内,对羟基苯甲酸丙酯在0.615μg/mL^6.15μg/mL线性范围内均具有良好的线性关系,相关系数均达到1.000,平均回收率分别为100.03%和100.33%,平均RSD分别为0.087%和0.077%。结果表明,该方法具有操作简单,灵敏度较高、结果准确等特点,适用于五氯柳胺混悬液中对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的检测。     

SI与APP、PRRS、PCV－2和Mhyo交叉感染的血清学调查

对甘肃省健康规模猪场和发病（非流感）规模猪场进行H1N1和H3N2猪流感（SI）感染抗体检测,健康规模猪场H1N1SI和H3N2SI混合感染抗体阳性率为25．45％（28／110）;发病（非流感）规模猪场H1N1SI和H3N2SI混合感染抗体阳性率为25．97％（20／77）。对两个规模猪场1、6、7和10月份的抗体检测结果,平均抗体阳性率分别为21．27％、56．14％、75％和15．62％。H1N1和／或H3N2SI阳性猪场猪传染性胸膜肺炎（APP）、猪繁殖与呼吸综合征（PARS）、猪圆环病毒病（PCV-2）和猪支原体肺炎（Mhyo）感染抗体平均阳性率依次分别为50．79％、40．32％、43．82％和33．33％;猪传染性胸膜肺炎（APP）免疫抗体平均保护率为49．5％,猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪圆环病毒病（PCV-2）和猪支原体肺炎（Mhyo）免疫抗体阳性率依次分别为56．52％、47．92％和38．04％。     

动物园珍稀野生动物弓形虫感染的血清学调查

用改良凝集试验（MAT）和SPA－ELISA对上海动物园珍稀野生动物的血清作了弓形虫抗体的检测。在隶属于2纲、10目、18科、37属、52种（包括亚种）的117头动物中，MAT阳性者41头（35％）；ELISA检测98头动物中阳性者33头（33．7％），2种试验的阳性率无显著差异（P＞0．05）。MAT的阳性率在鸟类组、灵长类组、肉食类组和草食类组中分别为11．1％（4／36）、25．0％（4／16）、69．4％（25／36）和27．6％（8／29）；ELISA的阳性率分别为0．0％（0／36）、33．3％（4／12）、87．1％（27／31）和10．5％（2／19），2种试验检测不同动物组的阳性率均有非常显著差异（P＜0．01）。ELISA未能在鸟类和偶蹄类动物检测到弓形虫抗体。     

日本群马地区野猪和家猪戊型肝炎病毒感染的流行趋势

用血清学和遗传学方法检测日本群马地区野猪（Susscrofa leucomystax）和家猪感染戊型肝炎病毒（HEV）的流行趋势。野猪的抗HEV IgG抗体和HEV RNA的阳性率分别为4．5％（4／89）和1．1％（1／89）,而家猪的分别为74.6％（126／169）和1．8％（3／169）。     

日本群马地区野猪和家猪戊型肝炎病毒感染的流行趋势

用血清学和遗传学方法检测日本群马地区野猪（Susscrofa leucomystax）和家猪感染戊型肝炎病毒（HEV）的流行趋势。野猪的抗HEV IgG抗体和HEV RNA的阳性率分别为4．5％（4／89）和1．1％（1／89），而家猪的分别为74.6％（126／169）和1．8％（3／169）。     

伊川县猪弓形虫病血清学调查与分析

利用间接血凝试验,对河南省伊川县部分规模化猪场的897份血清样品进行了弓形虫抗体检测,以抗体效价≥1：64为阳性判定标准,结果发现,上述被检样品的总阳性率为17．7％（159／897）,母猪、保育仔猪、育肥猪的阳性率分别为27．9％（76／272）、158％（29／183）、12．2％（51／442）。阳性母猪、保育仔猪和育肥猪抗体效价的几何平均数分别为1：229．4、1：89．4、1：169．7。     

对羟基苯甲酸酯类防腐剂应用现状与展望

对羟基苯甲酸酯是国际上公认的高效广谱性防腐剂，目前广泛应用于食品、化妆品、医药等行业。对羟基苯甲酸酯具有优良的抑菌特性，作为饲料防霉剂具有较好的开发前景。因此，本文就对羟基苯甲酸酯的来源、抑菌机理与效果、在动物体内的吸收与代谢以及目前的应用现状等进行综述，以期为其在饲料工业中的应用与推广提供参考。 [关键词] 对羟基苯甲酸酯|抑菌特性|饲料防霉剂|应用现状     

猪和野生动物源大肠杆菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测

对从四川省10个规模化猪场和16种野生动物的粪样中分离鉴定出的67株大肠杆菌、57株沙门菌进行了药敏试验。结果，猪源和野生动物源分离菌对磺胺类药物的耐药率分别为72．0％（72／100）和29．2％（7／24）。根据GenBank中登录的序列，设计了3对特异性引物，对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了三重PCR检测。在这124株细菌中，Sul1基因的检出率最高，为47．6％（59／124），Sul2基因的检出率为17．7％（22／124），Sul3基因的检出率为18．5％（23／124）。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为89．9％。     

兽用吡喹酮-聚乳酸-羟基乙酸缓释植入棒含量测定及释放度考察

建立了吡喹酮-聚乳酸-羟基乙酸（吡喹酮-PLGA）缓释植入棒含量测定的HPLC法,并对其释放度进行了考察。以甲醇-水（100：40,V／V）为流动相,采用GraceC18反相色谱柱（4．6mm250mm,5μm）,流速1．0mL／min,紫外检测波长263nm,在此试验条件下,吡喹酮在10—200μg／mL范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9999;平均回收率为99．48％,RSD为0．53％（n=9）。三批样品的含量分别为98．96％、98．67％和98．81％,该方法简单、快捷、辅料无干扰、准确度高,适于吡喹酮-PLGA植入棒的含量测定。吡喹酮-PLGA植入棒以骨架溶蚀释放机制缓慢释放,释药期可达三周,释放度高于300μg／d。     

家蚕人工饲料防腐剂的效果试验

本试验分别用山梨酸、苯甲酸、丙酸、山梨酸＋丙酸共4种防腐剂添加到小蚕人工饲料中，调查其对蚕生长发育的影响，试验结果表明，小蚕人工饲料的防腐剂，以添加0．25％-0．3％的山梨酸为宜。     

青海地区引进仔猪猪瘟抗体的ELISA检测报告

运用ELISA检测方法对调入青海省西宁市、湟源县、湟中县以及海东地区的民和县、循化县、互助县、乐都县送检的438头份仔猪血样,进行猪瘟血清抗体检测。结果表明：7个地区的猪瘟阳性检出率分别为50．00％（60／438）、74．00％（50/438）、48．35％（91／438）、53．73％（50／438）、3．45％（91／438）、46．15％（52/438）和73．33％（60/438）。此次血样检测的群体免疫保护率为59．99％．达到50．00％的保护率．但是远远低于免疫良好猪群的70．00％的保护率。     

鸡肉和鸡蛋中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测UPLC-MS/MS法研究

建立了鸡肉和鸡蛋中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法（UPLC-MS／MS）。样品在酸性条件下乙腈提取后,用正己烷去除脂肪,高速离心去除蛋白质等杂质,上机测试。液相色谱条件：色谱柱为BEHC18（50×2．1mm,1．7μm）,流动相为0．1％甲酸乙腈溶液＋0．1％甲酸水溶液,流速0．3mL／min,柱温30cI二,进样量10μL。质谱条件：电喷雾离子源（ESI^＋）,多反应监测（MRM）方式进行采集。结果表明：金刚烷胺与金刚乙胺在2～100ng／mL浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数（R。）分别为=0．9977和0．9988;鸡蛋和鸡肉中金刚烷胺与金刚乙胺残留检测方法检测限均为1ng／g,定量限均为2ng／g。从鸡肉组织在2、5和10ng／g三个添加浓度检测结果可以看出,金刚烷胺与金刚乙胺的平均回收率分别为79．6％～107．5％和78．4％～101．2％,批内和批间RSD均小于15％。从鸡蛋在2、5和10ng／g三个添加浓度检测结果可以看出,金刚烷胺与金刚乙胺的平均回收率分别为90．8％～111．1％和75．4％～87．4％,批内和批间RSD均小于15％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K—B（Kirby-Bauer）法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B（85．6％）、头孢噻肟（85．3％）、阿米卡星（84．8％）和大观霉素（65．0％）相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5．4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1（65．89％）、aaC2（52．35％）、aaC4（12．91％）和aphA3（10．95％）。耐药基因型检出率较高的是aadA1／aaC2（29．61％）、aadA1（18．04％）。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1／aaC2（43）、aadA1／aaC2／aaC4（20）和aadA1／aaC2／aaC4／aphA3（20）在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星（68．39％）。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。     

动物源性食品中泰乐菌素残留ELISA试剂盒的研制

采用杂交瘤技术,筛选并克隆出能够稳定分泌抗泰乐菌素（TYL）单抗的杂交瘤细胞株,免疫BALB／c小白鼠制备抗泰乐菌素单克隆抗体,建立泰乐菌素竞争ELISA检测试剂盒。结果表明,logit／log拟合标准曲线为y=-1．84x＋2．02,相关系数r=0．9944,线性检测范围为1．5～121．5ug／L,半数抑制浓度（IC50）为10.3ug／L,灵敏度为1．5ug／L,检测限为1．5～3．0ug／L;肌肉、肝脏、蜂蜜的添加回收率分别为64％～99％、61％～102％、60．5％～95％;平均批内和批间变异系数均小于10％;泰乐菌素与替米卡星（TIL）的交叉反应为40％,与其他类抗生素无交叉反应;此泰乐菌素试剂盒在4℃可保存6个月以上。本文建立的竞争ELISA检测方法可用于动物源性食品中泰乐菌素残留的定量检测。