甜菜RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg~(2+)、dNTP、引物、Taq酶和模板5种因素5个水平上对甜菜RAPD反应体系进行优化,确立了适合甜菜RAPD反应体系:25μL反应体系中含1×Buffer、1.0 mmol/LMg~(2+)、1U Taq DNA聚合酶、0.25 mmol/LdNTP、0.4μmol/L随机引物和25 ngDNA模板。利用优化的RAPD反应体系对38个甜菜品种进行亲缘关系分析。结果表明,38个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,38个甜菜品种遗传距离的变异范围在0.14～0.72。当以遗传距离0.50来划分时,可将38个品种分为两大类,以遗传距离0.40来划分时,又可以把第2大类分为6个亚类。结果显示,RAPD优化体系适合甜菜亲缘关系鉴定。     

石榴品种资源的RAPD亲缘关系分析

以36份石榴品种(类型)为研究对象,用RAPD技术对其亲缘关系进行分析。从128个随机引物中筛选出12个重复性好、条带清晰的多态性引物,并用这些引物对36份材料进行RAPD扩增,共扩增出111条谱带,平均每个引物9.25条。12个引物扩增出不同的多态性条带,多态性程度达到72.07%。用Statistic分析软件计算出的遗传距离在0.027~0.441之间,并对36份材料进行了UPGA法聚类,RAPD结果的亲缘关系树状图显示,36个品种或类型基因背景较复杂,说明了我国的石榴栽培品种有丰富的种质资源。     

苦豆子RAPD反应体系的优化

以苦豆子基因组DNA为模板,采用单因素递进筛选和全面正交设计相结合的方法,获得苦豆子RAPD扩增反应的优化体系.结果表明:在20μL反应体系中,DNA模板20 ng,引物浓度为30μmol/L,Mg2+浓度为50μmol/L,Taq DNA聚合酶2.5 U/μL,dNTP浓度为5 mmol/L,10×PCR Buffer 2.0μL.优化后的体系扩增产物稳定,条带清晰.利用随机引物09M27412对5份苦豆子DNA进行扩增,证实该体系重复性好,结果稳定,可作为苦豆子遗传多样性分析的1个稳定体系.     

平菇RAPD—PCR反应体系优化研究

以平菇黑丰268为试材,对RAPD—PCR反应体系的各项影响因素进行了优化,建立了平菇RAPD—PCR反应体系。结果表明,平菇RAPD—PCR最优体系为：20μl PCR反应体系中,Mg^2＋浓度为1．4mmol／L,模板DNA为50ng,引物浓度为0．6—0．8μmol／L,dNTPs浓度为250μmol／L,Taq酶为1．2U,10×Buffer2．0μl。     

珍珠黄杨RAPD最佳反应体系研究

以RAPD遗传标记为手段,对野生珍珠黄杨种群RAPD最佳反应体系进行研究。结果表明,在36℃时珍珠黄杨有比较好的片段数量和片段亮度。此外,2.5 mmol·L-1 Mg Cl2,0.25 mmol·L-1 d NTP,0.3μmol·L-1引物浓和2.0 U·(20μL)-1 Taq DNA聚合酶构成了珍珠黄杨RAPD扩增的最佳组合反应体系。     

瓠瓜ISSR—PCR反应体系优化

利用正交设计L9(34),对瓠瓜ISSR-PCR反应体系的4因素(dNTP、引物、Mg2 、Taq酶)在3水平上进行优化试验,建立适合瓠瓜ISSR-PCR反应体系,结果表明,在25μL反应体系中,含1×PCR buffer、200μmol·L-1dNTP、0.5μmol·L-1引物、2.5mmol·L-1 MgCl2、30ng模板DNA、0.75U的Taq酶为最佳处理;通过PCR梯度测验,瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2~6℃。     

獭兔RAPD反应体系优化研究

对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究。结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带。优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0μl。10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8μl。PCR扩增条件为:97℃预变性7 m in,94℃1 m in,36℃退火1 m in,72℃2 m in,45个循环后,在72℃延伸10 m in结束,4℃保存。PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测。点样后,以2~3 V/cm电压降稳压电泳3.0~3.5 h。     

暗紫贝母RAPD反应体系的优化

对暗紫贝母RAPD反应体系中的5个重要因子进行正交试验,筛选出了最优的反应体系(20μL):模板DNA 25 ng,随机引物0.8μmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶0.8 U。     

思茅松RAPD反应体系的优化

从思茅松幼苗的嫩叶中提取基因组DNA作为模板,运用均匀设计方法,获得思茅松RAPD扩增反应的优化体系:20μL反应体系中,DNA模板用量50ng,引物浓度0.5mmol.L-1,Mg2 浓度4mmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量2.0U,dNTP浓度0.75mmol.L-1。用19条引物进行验证,证实该体系重复性好、结果稳定。     

珍稀濒危植物连香树RAPD反应体系的优化

按照L25（5^6）的正交试验设计方法,对珍稀濒危植物连香树RAPD反应20止体系中Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、10×Buffer缓冲液用量、Taq酶用量、模板浓度和引物浓度的不同梯度组合进行了筛选。在此基础上对退火温度、退火时间和循环次数等条件进行了优化。最后得到优化的20μl连香树RAPD反应体系为：25mmol／L Mg^2＋2μl,dNTPs0．4μl,1U的TaqDNA酶1μl,10×Buffer缓冲液2．5μl,0．5OD引物0．8μl,约25ng模板0．6μl。优化的退火温度为37℃,退火时间为15s,循环次数为40次。     

石榴皮鞣质的长期毒性研究

[目的]观察石榴皮鞣质长期给药对大鼠产生的毒性反应。[方法]将80只供试大鼠随机分为4组,每组分别以0.3,0.9,1.5g/kg石榴皮鞣质连续对试验大鼠灌胃给药4周并设空白对照,末次给药24h后每组活杀一半大鼠,另一半停药后继续观察2周,分别测试大鼠体重、血液学、血液生化学、脏器系数及病理组织学变化。[结果]石榴皮鞣质3个剂量组与对照组比较无明显的毒性。[结论]石榴皮鞣质在上述剂量下连续服用4周是安全的。     

石榴种子油的理化性质分析

用气相色普法分析石榴种子油的脂肪酸组成,结果表明其主要脂肪酸为石榴酸,占86.01％。其次为亚油酸5.14％,油酸3.81％,棕榈酸2.91％,硬脂酸1.52％,亚麻酸0.61％。用常规方法测得石榴种子油的酸值为0.84,皂化值为181.5,碘值为156.5,折光率为1.5208(n_D~(20))。并通过自动氧化试验发现,石榴种子油在75℃下经4～8h,上层结出坚韧薄膜;110℃下经历40min,变成透明橡胶状物质,进一步肯定石榴种子油为优良干性油,可作为涂料等工业的优质油源加以开发利用。     

石榴嫩枝扦插育苗技术研究

[目的]探讨石榴嫩枝扦插育苗技术。[方法]将石榴嫩枝的插穗用配成0、50、100、200、300 mg/kg浓度的ABT生根粉和50、100mg/kg的旱地龙分别浸泡5和10 min后扦插在全光照育苗盘,观察石榴嫩枝扦插生根率与生根粉类型、浓度及浸泡时间的关系。[结果]结果表明,对于ABT生根粉,用100 mg/kg浸泡10 min和用50 mg/kg浸泡20 min生根率最大 对于旱地龙,用100 mg/kg浸泡10和20 min生根率均最大,而ABT生根粉的根率生优于旱地龙。[结论]生根粉对石榴插穗成活生根有促进作用。     

软籽石榴离体叶片愈伤组织诱导条件的优化

[目的]研究软籽石榴离体叶片愈伤组织诱导的最佳条件。[方法]以软籽石榴的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同浓度和类型的植物生长调节剂、叶片的不同部分、不同糖浓度和类型对愈伤组织诱导的影响。[结果]培养基MS＋0.1 mg/LNAA＋0.1 mg/L IBA＋1.0 mg/L 6-BA＋30 g/L蔗糖对愈伤组织的诱导效果最好,选择叶片中部或叶片基部为外植体,可以有效提高诱导率,降低褐化率,诱导率最高达93.3%,褐化率最低达23.3%。[结论]为石榴的离体快繁、种质保存和利用基因工程技术改良品质奠定一定的理论和实践基础。     

石榴根际寄生线虫的种类研究

2003~2006年,对云南省主要石榴产区蒙自县、会泽县和建水县的石榴寄生线虫进行了采样调查,采用形态特征进行鉴定。结果表明,寄生于云南石榴根际的线虫有15属12种,其中有11个种是寄生石榴的新记录种。     

突尼斯软子石榴丰产栽培技术

经过6年栽培试验,突尼斯软子石榴栽培上需要配置授粉树(6:1),严格疏花疏果,根据枝条特性整形修剪,冬季要采取防冻措施等.表现出良好的品种特性,果实性状、经济效益远高于其他品种,具有良好的市场前景,有很大的发展空间.     

泰山红石榴果实生长发育动态研究

以泰山红石榴(Punica granatum L.cv.Taishanhong)为试材,于花后1周开始观测果实体积、果实直径、平均单果重、子粒百粒重、果实中总可滴定酸含量、总可溶性固形物含量等各项果实发育相关指标,寻求其动态变化规律,以全面了解石榴果实生长发育动态。结果表明,泰山红石榴果实生长发育约历时5个月,经历幼果期、果实膨大期、果实转色期和果实成熟期4个时期。随着果实体积的增加,果实出现3次迅速生长期,分别在花后4周、13周和19周。果实生长发育期内,果实体积、果实直径、平均单果重、子粒百粒重、总可滴定酸含量及总可溶性固形物含量两两均存在相关性,且均达显著以上水平,这些相关性可为生长发育期的判定提供参考。     

石榴籽化学成分及应用研究进展

综述了石榴籽的化学成分及其抗癌、抗痢疾性腹泻、抗氧化、降血糖和雌激素样等药理作用;另外,还阐述了石榴籽油在工业领域的应用价值,揭示了石榴籽在治疗心血管疾病、皮肤癌、女性乳腺癌和糖尿病方面的应用前景。