禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚连接传代，从自然发病肉鸡脑组织中分离出一株禽脑脊髓炎病毒，命名为ＡＥＶ－Ｌ２Ｚ株。该病毒抗原与标准阳性血清之间出现清晰的沉淀线，在接种的发病鸡胚和病鸡的胰岛细胞和大脑神经细胞的胞浆中可见呈六边形颗业状的病毒粒于聚集或散在，直径２５～３０ｎｍ。该病毒对ｐＨ３，氯仿，乙醚，胰蛋白酶，去氧胆酸钠具有抵抗力，在Ｍｇ＾２＋保护下抵抗热效应（５０℃）对ｐＨ２无抵抗力，２５℃和－８０℃反复冻融３，     

禽脑脊髓炎病毒的分离与初步鉴定

禽脑脊髓炎(ＡＥ)是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病,以共济失调、头颈快速震颤、衰竭死亡为特征。本病1930年最早发现于美国〔1〕,此后,世界所有养禽地区均有发生,我国许多省、市、区均有发生本病的报道〔2〕,山东省对本病的报道多见〔3,4〕,但大都缺乏对ＡＥ病毒分离与?..     

鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为探究陕西省咸阳市某鹌鹑养殖厂的鹌鹑发病是否为禽脑脊髓炎病毒引起,采集发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道等组织,通过鸡胚传代、RT-PCR扩增、免疫组织化学试验及动物回归试验对病原体进行分离鉴定,并对得到的序列进行同源性及遗传性分析。RT-PCR扩增结果显示,用禽脑脊髓炎病毒(AEV)特异性引物成功扩增得到大小为288bp的目的片段,与参考株的核苷酸序列相似性及氨基酸序列相似性分别为84.9%~99.3%和95.8%~98.9%;遗传进化分析结果表明,分离株与SX株位于同一分支;免疫组化试验结果显示,发病鹌鹑的脑、肝脏、肠道组织切片中存在大量的阳性棕黄色着色区域,而阴性对照没有;动物回归试验结果显示,攻毒组鹌鹑出现典型的禽脑脊髓炎(AE)临床症状,发病率55.1%,病死率100%,病理剖检发现患病鹌鹑的脑组织软化,脑半球轮廓模糊,对照组未见异常。成功分离得到1株鹌鹑源禽脑脊髓炎病毒,命名为AEV XY/Q-1410株,为鹌鹑禽脑脊髓炎的诊断及预防提供理论与技术支持。     

用蔗糖密度梯度离心法提纯禽脑脊髓炎病毒

用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化。将禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）Ｌ２Ｚ株、Ｖan Ｒoekel株和１１４３株分别经卵黄囊接种６日龄ＳＰＦ鸡胚,接毒后,以４５００r/min离心及胰腺,用玻璃匀浆器制成１０％的组织悬液。组织悬液经３次反复冻融后,以４５００r/min离心１５min,取上清液。而后用氯仿处理,取水相,经冷冻真空浓缩,进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含ＡＥＶ的组分,用ＰＢＳ稀后超速离心除去蔗糖,得到     

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制

禽脑脊髓炎病毒的分离与疫苗研制卢中华张红英于晓军杨霞（河南农业大学，郑州４５０００２）王之岑（淮阳师范学校）张保亮（许昌县畜牧兽医技术中心）禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓＡＥ）是一种主要侵害雏鸡的病毒性传染病。１９３０年首次...     

禽脑脊髓炎病毒不同批次毒种致病性的研究

[目的]探讨不同批次的鸡源及胚源毒种致病性,为有效控制禽脑髓炎（AE）的发生提供参考。[方法]将AEV Van Roekel（VR）株毒种用雏鸡及鸡胚进行繁殖与传代,制备了不同批次的鸡源及胚源毒种,将这些毒种以不同接毒剂量经脑内接种8～10周龄的SPF鸡,进行致病性试验。[结果]不同批次的鸡源毒种致病性均很强,接种后可引起SPF鸡出现严重的禽脑脊髓炎症,不同批次的胚源毒种致病性存在明显差异,有强有弱。[结论]P080603和170807012个批次胚源毒种可以用作AE攻毒效检毒种。     

禽脑脊髓炎的病理学研究

禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ,ＡＥ）是由禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）引起的一种主要侵害雏鸡的传染病,本病已遍及全国各地〔１〕,尤其在山东时有本病发生的报道〔２～５〕,本病已成为危害养鸡业的主要传染病之一。但有关本病发病机理及组...     

禽脑脊髓炎发病机理和特异性病理诊断的研究

本研究从自然病鸡中分离出一株ＡＥＶ，经鉴定、提纯建立起ＡＥＶ－ＮＨ９３７株，进一步研究结果主要明确了：（１）各类发病雏鸡、感染鸡胚的病变特征、不同病例病变的差异、病理诊断和鉴别诊断，超微结构变化和ＡＥＶ在病变细胞内存在的部位、形式和病毒形态特征；（２）ＡＥＶ 抗原动态定位、靶细胞、播散途径和侵及范围；（３）免疫反应细胞类别和数量变化。同时确立了ＡＥ免疫荧光特异性病理诊断的方法，研制了ＡＥ琼护沉淀抗     

禽脑脊髓炎病毒引起SPF雏鸡淋巴细胞和神经细胞凋亡的研究

本实验主要采用病理组织学方法，流式细胞仪检测技术、末端标记技术等手段进行检测，探讨禽脑脊髓炎病毒引起SPE雏鸡淋巴细胞和神经细胞凋亡变化。结果表明，禽脑脊髓炎病毒能够引起感染鸡淋巴细胞和神经细胞发生凋亡变化。     

禽脑脊髓炎病毒(VR株)接种鸡胚的病理变化

通过卵黄囊接种法,将禽脑脊髓炎病毒接种到8日龄SPF鸡胚内,继续在孵化箱内孵化。第17天收病毒,经观察,接毒的鸡胚局部有出血点、体重减轻、爪子弯曲等病理变化。     

单抗直接Dot-ELISA检测禽脑脊髓炎病毒抗原

本研究在已制备的 AEV单抗基础上建立了检测 AEV抗原的直接 Dot- ELISA方法。该方法对 AEV最低检出量为 8.0 3μg.m L-1。人工感染 1日龄 SPF鸡 ,取临床发病鸡 (6～ 1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本病原阳性检出率分别为 :脑 98% ,胰 94% ,十二指肠 80 % ,腺胃 85%。对 1 0 0份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 90 %。对 1 0份 AEV病原分离阳性样品检测阳性率为 1 0 0 %。     

鸡传染性支气管炎病毒豫北株的分离与鉴定

[目的]分离与鉴定鸡传染性支气管炎病毒。[方法]从豫北某蛋鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集气管分泌物、肾脏等组织分离病毒,进行血凝试验、NDV干扰试验,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对HN07的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定。[结果]结果表明,分离到1株病毒,经连续鸡胚传代后,出现侏儒胚和蜷缩胚;血凝试验中,尿囊液无血凝性,而经胰酶处理后有血凝性;NDV干扰试验中,分离的尿囊液明显干扰NDV的增殖;病毒回归试验中病毒可引发接种鸡37.5%死亡;RT-PCR检测试验中,扩增到了约为1.7 kb的目的片段。DNAstar软件分析表明,测定基因具有IBVS1基因的共有分子特征,而且分离株HN07和HD株S1的同源性最高,核苷酸同源性为93.6%。[结论]分离的病毒株HN07为鸡传染性支气管炎病毒。     

禽脑脊髓炎发病机理和特异性病理诊断的研究

本研究从自然病鸡中分离出一株ＡＥＶ，经鉴定、提纯建立起ＡＥＶ一ＮＨ９３７株，进一步研究结果主要明确了：（１）各类发病雏鸡、感染鸡胚的病变特征、不同病例病变的差异、病理诊断和鉴别诊断，超微结构变化和ＡＥＶ在病变细胞内存在的部位、形式和病毒形态特征；（２）ＡＥＶ抗原动态定位、靶细胞、播散途径和侵及范围；（３）免疫反应细胞类别和数量变化。同时确立了ＡＥ免疫荧光特异性病理诊断的方法，研制了ＡＥ琼扩沉淀抗原和ＡＥ灭活油乳剂疫苗。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒SF分离株的鉴定

对分离的疑似肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作了进一步的鉴定。鸡胚盲传至第5代时开始出现死亡和侏儒胚,胚体肾脏肿大有尿酸盐沉积;电镜观察可见80~120 nm的病毒粒子;分离病毒在鸡胚上可干扰新城疫病毒Lasota株的增殖,本身也能被AEV病毒所干扰;SF5株分离毒与部分标准IBV毒株的血清进行中和试验,结果显示与Ark99株有部分交叉保护;经过一系列实验,确定了所分离病毒为肾型IBV,定名为SF株。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本。     

野鸡源H9N2亚型禽流感病毒NA基因的序列分析

通过病毒RNA抽提、RT-PCR、克隆，试验一次性获得野鸡源禽流感病毒A／Pheasant／Guangdong／GZI／2003（H9N2）NA全基因．序列分析及联机检索表明，该病毒的NA基因由1458bp组成，其中开放阅读框（ORF）l401bp编码466个氨基酸；ORF与A／Chicken／Guangdong／11／97同源性最高，达98％；与A／Chicken／Guangdong／11／97的NA亲缘性最近．     

禽流感病毒A/Duck/Shnghai/02/99(H9)HA基因的克隆及序列分析

根据GenBank已公布的禽流感病毒H9亚型血凝素蛋白编码基因,设计了一对引物(H1和H2),RT-PCR扩增禽流感病毒A/Duck/Shanghai/02/99(H9)的HA基因,扩增片段与载体pUCm-T的连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,重组质粒pUCm-T-HA经限制性内切酶酶切和PCR鉴定后进行测序。BlastN分析结果显示该分离株血凝素编码基因与已发表的鸭源禽流感病毒A/Duck/Shantou/1605/01(H9N2)和A/Duck/Hong Kong/Y280/97(H9N2)血凝素编码基因的核甘酸序列同源性为98%,从而从分子水平确定了该分离株为H9亚型禽流感病毒。