中草药对鲤不同组织溶菌酶活性的影响

中草药具有增强机体免疫、抗氧化和抗疲劳等作用。在水温23℃下,给饲养在水族箱中平均体质量85.88±2.45g的鲤（Cyprinus carpio L）投喂添加了复方中草药AB（由甘草等组成）、CD（由茵陈、板蓝根等组成）的配合饲料和一个对照组,连续饲喂28d后,停食一天,采集实验鱼血清和组织（肝胰脏、脾、鳃）样本,测定溶菌酶含量。结果显示,29d时,CD组血清及各组织溶菌酶含量均与对照组有明显差异（P〈0.05）,AB组除肝胰脏组织外,血清和其余组织中的溶菌本科含量也和对照有显著性差异（P〈0.05）,但两种中草药之间溶菌本科含量除肝胰脏组织外无显著差异（P〉0.05）。提示这两种复方中药均有不同程度促进鱼类免疫力的作用。     

中草药对鲤血清和免疫器官溶菌酶活性的影响

用添加刺五加、蒲公英、枸杞子、金银花和大蒜等单方中草药的配合饲料饲喂鲤(Cyprinus carpio L.),在开始饲喂后的第15d和第30d测定其血清和免疫器官(头肾、中肾、脾)的溶菌酶活性。结果显示,15d时,仅脾溶菌酶活性刺五加组和对照组有显著差异。30d时,血清溶菌酶活性蒲公英组、金银花组和大蒜组与对照组差异显著,头肾溶菌酶活性金银花组和对照组差异显著,中肾溶菌酶活性金银花组和大蒜组与对照组差异显著,脾溶菌酶活性所有试验组和对照组相比均有显著差异。     

甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活力的影响

选用60 g左右健康正常的鲤540尾,随机平均分为6组,每组设3个重复。试验设6种处理,即基础饲料中分别添加甲基盐霉素0(对照组)、10、20、40、80、160 mg/kg。研究了甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性的影响。试验结果表明,饲料中添加10 mg/kg甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性影响不显著,而添加20~160 mg/kg甲基盐霉素对鲤白细胞吞噬活性和溶菌酶活性有一个从促进到抑制的转变,剂量越高,这个转变越快,并且随饲喂时间的延长,其抑制作用越来越强。     

复方中草药对鲤肝脏转氨酶的影响

在饲料中添加复方中草药对鲤的正常鱼体和利用鱼类败血病的病原菌导致其肝受损后的鱼体进行药效试验,测定投喂前后血清生化指标中转氨酶浓度变化,表明该复方中草药对正常鱼体的肝脏具有保护作用,同时对鱼类败血病病原菌所致的肝损伤有一定的恢复和治疗作用。     

中草药复合诱食剂对鲤的诱食效果

试验根据中草药药理,将中草药复合诱食剂设计制成5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%8种不同浓度,以鲤为对象在迷宫中进行诱食活性试验,用t检验统计分析,结果表明,这8种浓度的中草药复合诱食剂对鲤均有诱食作用,且不同浓度的诱食剂诱食效果依次为30%>25%>20%>5%>15%>10%>40%>35%,其中30%,25%和20%的诱食剂对鲤的诱食效果显著。     

两种菊酯类农药对鲤血清溶菌酶和转氨酶的影响

采用肌肉注射法研究不同浓度的高效反式氯氰菊酯和功夫菊酯对鲤血清溶菌酶、转氨酶的影响。试验结果表明:高效反式氯氰菊酯低浓度(6、60μg/kg)短时间(24、48 h)作用使溶菌酶活性显著升高(P<0.05),但低浓度长时间(96、168 h)作用及高浓度(600、6000μg/kg)各采样点(24、48、96、168 h)作用则使其活性下降,各浓度组在168 h采样点抑制酶活力与对照组相比差异均达极显著(P<0.01)。功夫菊酯各浓度组在各采样点抑制酶活力均达极显著(P<0.01)。转氨酶则随两种攻毒农药浓度增大、作用时间延长活性均呈升高趋势,各浓度组与对照组比较酶活力升高均达极显著(P<0.01)。     

饲料中添加中草药对鲤血清主要离子含量的影响

采用五种常用中草药 (黄芪、板兰根、茯苓、黄芩和鱼腥草 )作为饲料添加剂 ,按 1 0g·kg- 1 的剂量添加到饲料当中饲喂一龄鲤 ,测定这几种中草药对鲤的血清中的K+、Na+、Ca2 +、Cl- 、Mg2 +、Fe2 +、Zn2 +含量的影响。结果表明 ,中草药使血清中的游离离子浓度发生了一定的变化。同时也测试了生活在含高浓度敌百虫水中的鲤在加中草药及不加中草药时血清的几种主要离子含量 ,并同正常水体中对照组及加中草药鲤血清的离子含量作了比较。     

5种中草药对鲤血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及红细胞过氧化氢酶活性的影响

用分别添加3%刺五加、蒲公英、枸杞子、金银花和大蒜单方中草药的基础日粮饲喂鲤(Cyprinus carpio),在第15 d和第30 d测定其血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及红细胞过氧化氢酶(CAT)活性。结果显示,15 d时,血清GOT活性仅大蒜组与对照组差异显著,血清GPT及红细胞CAT活性各试验组与对照组差异均不显著;30 d时,血清GOT活性各实验组与对照组的差异均不显著,血清GPT活性刺五加组和蒲公英组与对照组差异显著,红细胞CAT活性各实验组与对照组的差异均不显著。     

免疫增强剂对鲤血清中免疫酶指标的影响

为了解一种自制的免疫增强剂对鲤(Cyprinus carpio)免疫力的影响,在鲤基础饲料中添加1%的免疫增强剂为试验组,在投喂1周、2周、3周和4周后,分别取鲤的血清,测定血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)和补体C3的含量,比较免疫增强剂对鲤血清中3种酶含量的影响。结果显示：试验组鱼血清中溶菌酶、超氧化物气化酶和补体C3的值为先升高后降低,投喂2周时达到最高值,显著高于对照组(P<0.05),表明该免疫增强剂可有效增强鲤的非特异性免疫力。     

淇河鲫不同组织器官溶菌酶与抑菌活性比较

选择天然三倍体淇河鲫(Carassius auratus in Qihe River),通过试验研究其不同组织器官溶菌酶和抑菌活性,以了解淇河鲫不同组织器官的抗菌能力。结果表明,淇河鲫不同组织器官溶菌酶和抑菌活性存在差异,溶菌酶活性测定值依次为:肝胰脏肾脏鳃脑肠脾脏;抑菌活性测定值依次为:肝胰脏肾脏脑鳃肠脾脏(P0.01);淇河鲫抗菌活性较高的组织为肝胰脏和肾脏,且肝胰脏又极显著高于肾脏(P0.01),肾脏和鳃的抗菌能力极显著高于脾脏(P0.01);表明鱼类不同组织器官免疫能力和抗菌活性存在差异,这种差异与组织器官的生理功能和抗病响应机制不同有关;同时说明鱼类不同组织器官在致病菌干预过程中将发挥不同的作用。     

鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。     

Molecular genetic structure and relationship of Chinese and Hungarian common carp (Cyprinus carpio L.) strains based on mitochondrial sequence

China and Hungary are major providers of the common carp (Cyprinus carpio L.) in East Asia and Europe respectively. However, the genetic variation and relationship of this species in the two countries have been poorly understood. In this study, mitochondrial COII‐tRNA^Lys and D‐loop sequences were analysed to investigate the genetic structure and relationships of the representative wild and domesticated common carps distributed in China and Hungary. The results indicated that the genetic diversities of the Chinese common carps are higher than those of Hungarian common carps, and the diversities of the wild common carps are higher than those of domesticated common carps in both the countries. Analysis of molecular variance and pairwise F_ST demonstrated a significant genetic divergence between the Chinese and the Hungarian common carps, and between the wild and the domesticated common carps. Bayesian phylogenetic analysis and statistical parsimony network showed an obvious genetic differentiation between the Chinese and the Hungarian common carps, between the wild and the domesticated common carps. However, a few specimens and haplotypes from the Chinese wild common carps appeared in the Hungarian common carps, demonstrating that there was no absolutely isolated and possible genetic linker between the Chinese and the Hungarian common carps.     

微卫星分子标记辅助镜鲤家系构建

用微卫星标记辅助进行镜鲤(Cyprinus carpio L.)家系的建立及选育,通过对亲本遗传结构及遗传差异的分析,预测产生优良家系的最佳配组。用28个微卫星分子标记评估松浦镜鲤亲本群体的遗传潜力,结果显示,群体的多态信息含量(PIC)达到0.5627,处于高度的遗传多样性水平,具备进一步繁育筛选优良群体的潜质。用x2检验和遗传偏离指数(d)估计Hardy-Weinberg平衡,结果表明群体处于平衡状态,但在16个位点表现出杂合子缺失,这可能跟长期的人工选择有关。依据个体间的遗传距离,连续2年共建立1对1亲本的繁育家系70个,用网箱分别养殖,2月龄家系体长均值为7.24～10.60cm,体质量均值为14.02～40.63g,方差分析显示家系间体长、体质量差异均极显著;对其中4个家系1龄鱼种生长情况及遗传结构分析也表明家系间的遗传分化较大,近交系数(Fst)达到0.1537,家系的多态信息含量在0.3056～0.4077之间,保持中度多态水平。由子代家系的生长和遗传结构两方面的实验结果证实了微卫星在辅助家系建立尤其是亲本选配方面具有较好的预测性,所获得的家系差异较大,具备进一步选育优良家系的潜力,从而证实了用此方法对现有镜鲤种质进行遗传改良是可行的。     

鲤嗜水气单胞菌感染症及其病原生物学特性

对一起养殖鲤(Cypr inus carp io )发生的病害进行了发病情况、临床特征、病理变化等方面的检验。以3尾病(死)鲤进行病变组织中的细菌检查及细菌分离, 对分离菌进行了形态特征、理化特性等较系统的表观分类学指征鉴定; 同时选择代表菌株进行了16S rRNA 基因的分子鉴定, 测定了16S rRNA 基因序列、分析了相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树。结果表明, 分离菌为气单胞菌属(Aeromonas K luyv er and Van N iel 1936) 的嗜水气单[A.hydrophila (Chester 1901) Stan ier 1943] , 代表菌株( HC060718- 1株) 16S rRNA基因序列长度( 不包括引物结合区)为1 454 bp( GenBank登录号: EF669478)。择代表菌株做对健康鲤的人工感染试验, 表明了分离鉴定的嗜水气单胞菌在被检鲤病例的相应原发病原学意义及较强的致病作用。药敏试验结果显示, 对供试37种抗菌药物中的头孢噻肟等23种药物高度敏感, 对氨苄青霉素等5种药物敏感, 对青霉素G等9种药物耐药。     

The pathology of selenium deficiency in Cyprinus carpio L

Selenium is essential for the normal life processes, and all animals, including fish, need this inorganic element. In order to research the pathology of selenium deficiency in common carp, Cyprinus carpio L., 360 juvenile carp were allocated to three treatments. Each treatment containing 120 fish was randomly divided into four groups, fed with purified diets containing selenium at 0, 0.15, 0.30 and 0.45 mg kg^?1. The results indicated that the morbidity and mortality rates of the test groups were negatively correlated with the level of selenium in the diets. The morbidity and mortality rates were, respectively, 46.7%, 33.3%, 13.3%, 0 and 26.7% 16.7%, 6.7%, 0. The affected fish exhibited pathological changes, such as ‘thin back disease’ and lordosis. Histologically, there was no abnormality observed in muscles, liver and pancreas. Ultrastructurally, there was swelling of the mitochondria of the cardiac muscle cells, the liver cells and renal tubular epithelial cells, with disintegration and lysis of the cristae of the mitochondria which vesiculated. Serum glutamic oxaloacetic transaminase and glutamic pyruvic transaminase levels were increased and the activity of the serum glutathione peroxidase and the serum superoxide dismutase was decreased; in contrast, the serum malonaldehyde concentration was increased.     

阿克曼菌对鲤糖代谢的调控作用研究

[目的]本试验旨在探究巴氏灭活的阿克曼菌（Pasteurized Akkermansia muciniphila，P-Akk）调控鲤（Cyprinus carpio L.）糖代谢的分子机制。[方法]本研究通过不同糖水平（20%、30%、40%、50%葡萄糖）试验，探究鲤（10.5±1 g）4周和8周时胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）分泌及阿克曼菌（Akkermansia muciniphila，Akk）定植的时空变化；在不同糖水平试验基础上，设置40%葡萄糖和三个不同浓度P-Akk（108 cfu/g P-Akk、109 cfu/g P-Akk、1010 cfu/g P-Akk）组，探究添加P-Akk 4周后对鲤（16.38±0.39 g）糖代谢及GLP-1的调控；通过P-Akk孵育鲤原代肝、肠细胞试验，共同探究不同糖水平下鲤肠道Akk、GLP-1对糖代谢的调控机制。[结果]结果显示：（1）随着饲料中葡萄糖含量的升高，鲤血清中GLP-1b含量显著降低（P < 0.05），4周时高糖组鲤肠道GLP-1a、GLP-1b以及肠道内容物中Akk丰度均显著降低（P < 0.05），但8周时无显著性差异（P > 0.05）。（2）P-Akk处理后，鲤血清中葡萄糖、GLP-1含量显著减少（P < 0.05）；中肠绒毛高度、肌层厚度显著增加，GLP-1含量减少，短链脂肪酸含量增加，muc2 mRNA表达水平升高（P < 0.05）；此外，P-Akk上调肝脏中ampk、pi3k、akt及糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量，下调糖异生基因pepck mRNA表达量（P < 0.05）。（3）原代肝、肠细胞孵育结果显示，P-Akk处理肠细胞后GLP-1含量显著减少（P < 0.05），而gpr40的mRNA表达量升高；此外肝细胞中糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量显著升高。[结论]综上，外源添加P-Akk可以缓解高糖饲料引起的血糖升高，维持葡萄糖稳态。[意义]该研究结果可为Akk作为益生菌在水产饲料中的应用提供理论基础。     

镜鲤眼径及眼间距性状显著相关的微卫星标记筛选

利用镜鲤(Cyprinus carpio L.)全同胞家系68个个体,分析其眼径(ED)和眼间距(EC)与164个细菌人工染色体文库(bacterial artificial chromosome, BAC)末端序列来源的微卫星标记的相关性.结果164个微卫星标记共检测到401个等位基因,463种基因型,利用GLM模型对每个标记与对应的性状做回归分析, Permutation 10000次检验结果显示,共22个微卫星标记分别与眼径和眼间距具有显著相关性(P<0.05),其中CAFS1526等6个标记仅与眼径具有显著相关性(P<0.05), CAFS0882等11个标记仅与眼间距显著相关(P<0.05),而CAFS1298等5个标记与两个性状均具有显著相关性(P<0.05), CAFS1298和 CAFS1423与2个性状的相关性均达到极显著水平(P<0.01).用SPSS13.0的Duncan’s多重比较找到了每个标记与性状显著相关的基因型,进一步将与眼径和眼间距显著相关的标记整合到遗传连锁图谱上,其中9个微卫星标记与眼径或眼间距的 QTL 定位结果一致,其可解释表型变异率在13.3%~20.9%.     

正常鲤外周血白细胞cDNA文库的构建

随着水产养殖业的发展,与鱼病防治紧密相关的鱼类免疫机制的研究越来越显示出其重要的理论与应用价值。鱼类的免疫系统虽不及哺乳动物发达,但其外周血白细胞已具有类似T、B淋巴细胞的分类,是机体体液免疫和细胞免疫的重要组成部分[1,2],但目前人们对鱼类免疫应答调控的机制