五株荷叶离褶伞碳氮源及适合发酵菌株的筛选

以荷叶离褶伞为试材,以菌丝体生物量和胞外多糖产量为指标,分别采用不同碳源和氮源对5株荷叶离褶伞菌株进行单因素液体发酵试验,以期筛选荷叶离褶伞液体培养最适碳源、氮源及适合发酵菌株,并为探索其工厂化发酵奠定理论基础。结果表明:菌株ZY01、ZY02及ZY03的最适碳源是蔗糖,最适氮源是蛋白胨,其次为麸皮、尿素;菌株ZY04、ZY05以菌丝体生物量为指标的最适碳源是葡萄糖,最适氮源是蛋白胨,以胞外多糖产量为指标的最适碳源是蔗糖,最适氮源分别是尿素、蛋白胨;菌株ZY02的菌丝体生物量为12.626g/L与ZY03的胞外多糖产量为11.5148mg/L在分别以2%蔗糖+0.2%蛋白胨、2%蔗糖+0.3%蛋白胨组合试验中值最大;不同碳、氮源对荷叶离褶伞菌丝体生物量及胞外多糖产量的影响不呈正相关,菌株ZY02、ZY03分别是各指标下的适宜发酵菌株。     

烟色离褶伞工厂化栽培菌株的初步筛选

以10株烟色离褶伞菌株为试材,按照拮抗、固体和液体菌落生长、农艺性状栽培试验的方法,进行不同烟色离褶伞菌株亲缘关系和菌株生长特性研究,以期为烟色离褶伞工厂化栽培提供参考依据。结果表明:通过拮抗试验初步判定出A、B、E、F、I菌株是各自独立菌株,C、D、J、G、H菌株为同一菌株。F菌株综合性状最佳,在固体培养基上培养时,菌丝生长均匀,且生长速度最快,达到(4.45±0.01)mm·d^-1;在液体培养基中培养时,菌球密度最大,为188个·mL^-1。菌球直径最小,单个菌球直径为1.23 mm,生物量为253 mg·(10mL)^-1。在出菇栽培试验中,F菌株的污染率最低,出菇整齐,生物学效率显著高于其它菌株,达到55%。     

荷叶离褶伞工厂化栽培

本研究首次报道荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)在中国工厂化栽培成功.试验结果表明,所建立的荷叶离褶伞工厂化生产工艺可重复性好,平均污染率为0.94%,发菌时间为52d,单瓶产量为104 g.     

白灵菇液体菌种制备及栽培试验

对白灵菇液体培养基配方、培养条件、菌丝体生物量等进行了研究。试验表明，白灵菇1号、天山2号供试菌株可以在多种液体培养基中生长，其中A9、A14和A16配方比较适合于两个供试菌株的生长。27℃下液体培养的菌球数量、菌球直径及菌丝生物量干重比较理想。液体培养中菌丝体生物量的大小，不仅与液体培养基配方、培养温度有关，而且与盛液量、转速和培养液黏滞度也有一定关系。250mL的三角瓶装液量为140～170mL，转速150r／min较为适宜。用琼脂提高培养液的黏滞度可以提高菌球的数量，琼脂添加量在1．25～2．0g/L。用液体菌种栽培试验表明，B1、B2、B7和B8栽培料配方的生物学产量高，白灵菇品质好。     

荷叶离褶伞菌丝体多糖的提取及还原力的研究

荷叶离褶伞是一种具有药用功能的名贵珍稀食用菌。本试验以液体深层发酵法培养荷叶离褶伞,采用热水浸提法从菌丝体中提取多糖,用硫酸一苯酚法显色,在540nm处运用分光光度计测其吸光度值,计算多糖提取率;利用单因素和正交试验对离褶伞菌丝体多糖的提取工艺进行研究,并对其还原能力进行了研究。结果表明,影响荷叶离褶伞菌丝体多糖提取率因素的主次关系是浸提温度〉浸提时间〉料液比〉乙醇体积分数。荷叶离褶伞菌丝体多糖提取最优工艺条件是粉碎度100目、浸提温度90℃、料水比l：80（g·mL^-1）、浸提时间2h、添加3倍95％乙醇醇沉。苯酚一硫酸法测定此最佳提取工艺条件下粗多糖得率可达4．23％。多糖的还原能力均随着多糖质量浓度的提高而提高,与抗坏血酸Vc相比,荷叶离褶伞多糖的还原力较弱。     

野生荷叶离褶伞菌株的鉴定及其生物学特性研究

以野外采集到菌株LL-1为试材，采用形态学和分子生物学方法进行分类鉴定，并针对该菌株进行了生物学特性和驯化栽培研究，以期为辽宁省野生荷叶离褶伞资源的开发利用提供参考依据。结果表明：LL-1菌株形态学特征符合荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes),且ITS序列荷叶离褶伞相似度高达100%,可鉴定为荷叶离褶伞。该菌株适宜生长温度20～25℃,最佳碳源为麦芽糖，最佳氮源为牛肉膏，最佳无机盐为硫酸镁，生长因子为复合维生素B。LL-1子实体单菇质量达到了5～8 g,转化率为68%。     

灰树花多糖高产菌株诱变选育研究

采用原生质体紫外诱变法选育灰树花多糖高产新菌株,经过大量的诱变筛选试验,获得一株灰树花新菌株,其液体摇甁发酵试验菌丝体生物量和胞内多糖产量分别达到1.15 g/100 m L和0.78 g/L,在同样条件下比出发菌株提高了40.2%和37.5%,且遗传性状稳定,有望作为优良菌种应用于液体深层发酵法制备灰树花多糖的工业化生产中。     

两个离褶伞野生菌株的鉴定及其液体培养基的初步筛选

以2个分离自云南鸡足山的野生离褶伞菌株C821-001和C822-003为试材,根据ITS序列分析,对2个野生菌株进行分类鉴定。采用液体摇瓶培养法,以菌丝生物量为主要指标,对C821-001和C822-003进行液体培养基筛选,从5种不同培养基中分别筛选出适合2个菌株菌丝生长的液体培养基。结果表明:经ITS序列分析证实C821-001为真姬离褶伞Lyophyllum shimeji,C822-003为烟熏褐离褶伞Lyophyllum infumatum。C821-001和C822-003均在配方5中生长最好,菌丝体干质量分别达到1.948 8 g和1.128 8 g,因此,配方5可作为2个菌株菌丝体繁殖的首选液体培养基。     

五株羊肚菌碳、氮源及适合发酵菌株的筛选

以菌丝体生物量和胞外多糖量为指标,分别采用不同碳源和氮源对5株羊肚菌[Morchella angusticeps、M.conica、Morchella sp.(50647)、Morchella sp.(50648)和M.esculenta]进行液体发酵,筛选出这5株羊肚菌的最佳碳源、氮源以及最适合液体发酵的菌株.实验结果表明:5株羊肚菌最佳碳源均为可溶性淀粉,最佳氮源分别为:硫酸铵、蛋白胨、酵母膏、硝酸钠、硝酸钠.最适合液体发酵的菌株为Morchella angusticeps,其生长到第7天时菌丝体生物量最高,可达5.76 g/L;第12天左右时胞外多糖产量最高,可达2.17 g/L.     

不同搅拌转速和通气量对桑黄深层发酵培养的影响

探讨在20L搅拌式发酵罐中,转速和通气量对桑黄菌丝生物量、胞外多糖产率、溶氧以及菌丝形态的影响。结果表明,实验范围内,转速为150r/min时,桑黄菌丝体生物量最大(12.65g/L),胞外多糖得率最高(2.99g/L),相对溶氧下降最快,菌球小球状、较紧密、丝状体比例小;通气量为1∶0.65vvm,桑黄菌丝体生物量最大(12.69g/L),胞外多糖得率最高(3.00g/L),相对溶氧下降最快,菌球大小均匀、紧密、生长良好。     

二株茶薪菇菌丝多糖深层发酵的培养特征比较与条件控制

以2株茶薪菇为试材,研究比较了其多糖深层发酵的培养特征及发酵的控制条件。结果表明:茶薪菇多糖发酵罐深层培养以26℃,pH 6.5,150~250r/min搅拌,0.03~0.05MPa罐压,0.2~0.4m3/h通风,发酵96h较适宜;菌丝胞内多糖达937~1 080mg/g。2个菌株罐批培养多糖高峰期与摇瓶一致,但产量略高,较固体栽培子实体多糖高1.3~1.5倍,时间缩短12倍。比较发现,菌株U27厚垣孢子数量较多,液体培养效果较好,摇瓶种子菌球小而齐,直径1.0~2.0mm,密度(1.5~2.5)×103个/mL,液体深层发酵的菌丝多糖达1 080mg/g,为子实体多糖的1.5倍,是1株良好的多糖深层发酵的生产菌株。     

液体发酵真姬菇多糖高产菌株的筛选

试验研究了18个真姬菇菌株在平板上菌丝的生长速度和液体发酵菌丝体生物量,以及各菌株液体发酵菌丝体胞内多糖、胞外多糖、总多糖的产量。结果表明：不同菌株菌丝在固体平板上的生长速度与液体培养的菌丝体生物量问呈负相关（-0．442）;18个菌株中,胞内多糖产量最高的菌株为49菌株,其产量为244mg/L;胞外多糖产量最高的菌株为JB06菌株,其产量为1353mg/L;总多糖产量高产菌株为JB06,其总多糖产量为1575mg／L。     

低能N~+离子注入诱变选育金耳多糖高产菌株的研究

应用低能N~+离子注入金耳酵母状分生孢子菌株进行诱变,以获得一株多糖产量更高的金耳诱变菌株。试验确定了低能N~+离子注入的适宜参数:注入剂量为60×10~(14)ions/cm~2,注入能量20 KeV,靶室真空度10~(-3)Pa。以5 s脉冲式注入,间隔时间为15 s。离子注入后,分别以液体发酵生物量(孢子量)及多糖产量为初筛和复筛标准,经遗传稳定性试验验证,筛选到了一株金耳多糖高产菌株,其产量较对照菌株提高了12.3%,液体发酵多糖产量(包括菌体多糖与发酵液多糖)达2.7 g/L。结果表明:低能N~+离子注入是一种较为理想的金耳诱变育种手段。     

一株野生裂褶菌的分离鉴定和驯化培养初探

采用孢子分离法分离培养一株野生裂褶菌,得到纯培养菌株,并采用内转录间隔区序列(ITS)分析,将其鉴定为Schizophyllum commune。用桑枝屑培养基,26℃接续培养该菌株,随着转接次数的增加,菌丝逐渐浓密,生长速度呈加快趋势,最终(培养7代)菌丝生长速度为7.0～7.3 mm/d。驯化7代后的菌株用马铃薯葡萄糖液体培养基,26℃、150 r/min摇床培养10 d后菌丝体生物量达17.3 g/L。驯化培养的菌株接种培养料袋,菌丝培养30～35 d满袋,再培养7～10 d出菇,生物学效率为16.8%。     

香菇液体菌种发酵条件的优化

对香菇ZHX-1液体培养得到的菌丝球和胞外多糖含量的影响因素进行了试验。在单因素试验的基础上,采用正交试验设计,结果表明,最佳液体发酵条件为玉米粉21 g/L,酵母膏5 g/L,KH_2PO_4 1 g/L,MgSO_4 0.5 g/L,pH4.5,培养温度25℃,摇床转速150 r/min,接种量8.5%,装液量100 mL/250 mL,培养7 d,增菇激活酶的添加量0.2%。在此优化条件下,香菇菌丝球的生物量为2.54 g/L,胞外多糖的含量为2.34 g/L。     

诱变筛选云芝高产多糖菌株及其液体培养条件优化

对从不同地区引进多株云芝菌株,进行云芝液体发酵试验,筛选出云芝菌丝体多糖产量高的菌株作为出发菌株,运用低能N~+离子注入诱变选育出云芝液体发酵高产云芝多糖的新菌株。对新菌株最佳培养基及液体发酵参数的研究与优化使其液体发酵菌丝体多糖产量高于高产出发菌株50%,液体发酵量菌丝体多糖达到了2.26 g/L。     

四种无机盐对荷叶离褶伞菌丝生长的优化试验

以荷叶离褶伞菌株为试材,采用L9(34)正交实验设计,在PDA基础培养基上测定了4种无机盐及其正交组合对其菌丝生长的影响,以期为其优质栽培提供理论依据。结果表明:荷叶离褶伞菌丝萌发与生长的最适组合为ZnSO42.0g/L、MgSO44.0g/L、KH2PO44.0g/L、FeSO41.5g/L;高浓度的ZnSO4、MgSO4、KH2PO4以及FeSO4对菌丝生长有抑制作用,其中MgSO4浓度≥10.0g/L时,菌丝停止生长;4种无机盐协同作用对荷叶离褶伞菌丝生长影响的大小依次为FeSO4MgSO4KH2PO4ZnSO4;各组合之间的菌丝生长速度差异极显著,不同组合间有明显的交互作用,最佳组合为2.0g/L ZnSO4+6.0g/L MgSO4+6.0g/L KH2PO4+1.0g/L FeSO4。     

秦巴山区黑木耳液体种培养基的响应面优化

以秦巴山区黑木耳菌株‘神农A8’为试材,在单因素试验的基础上,通过Box-Behnken设计对黑木耳液体种培养基进行响应面优化。结果表明:黑木耳液体种培养基最佳碳源、氮源分别是葡萄糖、牛肉粉,葡萄糖浓度、牛肉粉浓度以及KH2PO4浓度对菌丝生物量影响较大,优化得到黑木耳液体种培养基的配方是2.16%葡萄糖、0.48%牛肉粉、15%马铃薯、0.33%KH2PO4、0.1%MgSO4·7H2O,菌丝生物量的预测值为11.11g/L,采用上述优化的黑木耳液体种培养基进行验证性试验,测得菌丝生物量为11.37g/L,与预测值的相对误差为2.34%。因此,说明响应面法优化黑木耳液体种培养基是有效可行的。     

一株野生灰树花菌丝体液体培养基正交方法筛选

以1株野生灰树花菌株为试材,采用正交实验设计法,研究了不同液体培养基对其菌丝体生物量的影响。结果表明:其最适配方为蔗糖25g/L、玉米粉25g/L(浸提液)、麦麸20g/L(浸提液)、酵母粉2g/L、MgSO4·7H2O 2.5g/L、KH2PO45g/L、维生素B10.030g/L、pH自然,24℃培养静置培养10d,其菌丝生物量为10.41g/L。     

裂褶菌的鉴定及液体发酵技术优化

以采集到的裂褶菌标本为试材,采用正交实验和响应面优化试验,研究了裂褶菌液体发酵工艺,以期获得适于工厂化生产的液体发酵工艺技术。结果表明：该菌PCR产物长度为615 bp,结合ITS序列比对确定该菌株为裂褶菌(Schizophyllum commune);以得到的菌种为研究对象进行液体发酵试验,以菌丝干质量为标准,通过正交实验确定了裂褶菌液体菌种发酵的最优培养基配方为可溶性淀粉30 g·L^-1,牛肉膏8 g·L^-1,KH₂PO₄ 0.75 g·L^-1,MgSO₄ 0.25 g·L^-1,pH自然;通过单因素筛选、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验得出最佳培养条件为温度26℃,装液量109 mL,初始pH 6.3。结合正交实验和响应面优化试验后,培养的菌丝球密度大、大小适宜、活力强,适合作为菌种进行工厂化栽培。