仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化研究

以仙人掌为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀法得到超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）粗酶液。然后用Sephadex（葡聚糖凝胶）G-75层析柱层析对粗酶液进行进一步纯化,最后用邻苯三酚法测定酶活力,并对酶活力主要影响因素（包括pH值、温度、抑制剂）进行了研究。结果显示仙人掌SOD酶比活力为751.56U.mg-1。pH值为7.5~8.5时酶活力最大,稳定性也好。温度维持在25~30℃时酶活力最高。由于过氧化氢和氰化钾均能使仙人掌SOD的酶活力显著下降,因而可以初步判断从仙人掌中提取到的SOD是Cu.Zn-SOD。     

野生蛹虫草与培植蛹虫草SOD酶活力的对比研究

[目的]为蛹虫草的进一步开发和利用提供依据。[方法]采用改良的邻苯三酚自氧化法,测定比较野生蛹虫草菌丝体、子座与培植蛹虫草菌丝体、子座之间的SOD酶活力。[结果]野生蛹虫草菌丝体的SOD酶活力(64.3 U/ml)明显高于子座的SOD酶活力(47.1U/ml),培植蛹虫草菌丝体的SOD酶活力高于子座的SOD酶活力。野生蛹虫草不同部位的SOD酶活力均高于培植蛹虫草的相应部位,但差距不大,说明培植蛹虫草的栽培技术已日益成熟,培植蛹虫草发酵菌丝体是其发展的重点。[结论]在野生蛹虫草资源日益缺乏的今天,培植蛹虫草完全可以取代野生蛹虫草发挥其保健治疗作用。     

多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的干扰

测定了甘薯、小白菜叶和人红细胞三种生物材料对邻苯三酚自氧化速率的影响、它们的 SOD 活性和多酚氧化酶的活力;讨论了多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定 SOD活性的干扰。结果表明:在植物中,多酚氧化酶含量较多而 SOD 活性较低,而在动物材料中,多酚氧化酶含量低而 SOD 活性较高。因此,植物材料不宜采用邻苯三酚自氧化法测定 SOD 的活性.但可作为测定动物材料中 SOD 活性的一种简便、灵敏的方法。     

猪血超氧化物歧化酶联合提取工艺及其活性检测研究

[目的]研究猪血超氧化物歧化酶（SOD）与其他生物活性物质的联合提取工艺,为充分利用猪血资源和规模化生产SOD提供技术基础。[方法]从猪血中分离纤维连接蛋白、免疫球蛋白和血红素后,提取SOD。通过优化邻苯三酚的用量、SOD样液用量、反应温度和缓冲液pH值,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的条件进行了优化。按照优化后的条件测定联合提取的SOD的比活力。[结果]SOD活性测定的优化条件为50mmol／L邻苯三酚7μl,50mmol／L Tris—HCl（pH8．2）3ml,反应温度为25℃,SOD样液添加量为10μl。联合提取的SOD的比活力达到5056U／mg蛋白质。[结论]通过现代生物工程集成技术从猪血中分级提取了4种生物活性物质,所提取的SOD具有较好的活性。     

利用几种生物原料提取SOD的比较研究

研究利用不同生物原料提取SOD(超氧化物歧化酶)的差异,采用有机溶剂处理,分离提取红酵母、啤酒酵母、香菇、平菇和毛霉菌体中的SOD,并以邻苯三酚自氧化法测定它们的活性.结果表明,利用啤酒厂的废酵母提取SOD,不仅成本很低,而且酶活力高,可作为SOD工业化生产的最佳原料.     

六价铬对草鱼肝脏SOD和GSH-Px活力的影响

采用灌喂法,研究不同剂量六价铬在48 h内对草鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响.结果显示,用较低剂量的六价铬处理时,草鱼肝脏SOD和GSH-Px的活力均出现不同程度的、短暂的诱导效应;当六价铬剂量较高时,SOD和GSH-Px的活力并未出现明显的诱导现象,2种酶的活力均随六价铬剂量的增加而下降.由此可见,2种酶的活力变化与六价铬剂量具有一定的相关性.此外,这2种酶对六价铬的敏感性也存在一定程度的差异,其中SOD对六价铬较敏感,更易受六价铬的影响.     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

六价铬对草鱼肝脏SOD和GSH-Px活力的影响

采用灌喂法,研究不同剂量六价铬在48 h内对草鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响。结果显示,用较低剂量的六价铬处理时,草鱼肝脏SOD和GSH-Px的活力均出现不同程度的、短暂的诱导效应;当六价铬剂量较高时,SOD和GSH-Px的活力并未出现明显的诱导现象,2种酶的活力均随六价铬剂量的增加而下降。由此可见,2种酶的活力变化与六价铬剂量具有一定的相关性。此外,这2种酶对六价铬的敏感性也存在一定程度的差异,其中SOD对六价铬较敏感,更易受六价铬的影响。     

莴苣超氧化物歧化酶分离与鉴定

抑制剂敏感性试验表明 ,莴苣超氧化物歧化酶 (SOD)属于Cu·Zn -SOD。莴苣SOD对KCN和H2 O2 都很敏感 ,1mmol L的KCN抑制其活力达 92 % ,1mmol L的H2 O2 抑制其活力达 6 8%。莴苣不同组织SOD活力不同 ,以整株莴苣为原料提取的SOD活力为 1.6 5 1U ml,明显大于以莴苣茎为原料提取的SOD活力 ( 1.375U ml)。同时以酶活力最大为最优分离目标 ,确定了莴苣SOD最佳分离操作条件     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

热处理蜂王浆对小白鼠巨噬细胞吞噬活力的影响

采用加糖保护和不加糖保护热处理的蜂王浆饲喂小白鼠,并以新鲜蜂王浆和冰箱中保存1a的蜂王浆作对照饲喂。结果表明,对小白鼠巨噬细胞吞噬活力的影响是,加糖保护热处理至56℃的蜂王浆与新鲜王浆对比无明显差异,却明显地高于冰箱中保存1a的蜂王浆;加糖保护热处理至63℃的蜂王浆,与冰箱中保存1a的蜂王浆对比无明显差异;而不加糖保护热处理至56—63℃的蜂王浆均明显地低于对照组。     

蜂王浆酶解产物特性及生理功能研究进展

蜂王浆营养丰富,是传统的滋补佳品,具有多项生理保健功效,其生理活性与干重中含量最高的蛋白质关系密切,但蜂王浆中蛋白质不稳定,储藏过程中容易发生变化,影响其生理活性的发挥。该文主要综述了蜂王浆酶解产物的稳定性等特性及生理功能,为蜂王浆在食品、药品、化妆品等领域的应用提供一定的参考。     

蜂王浆对离体蟾蜍心脏活动的影响

采用离体蛙心灌流方法,分别观察不同浓度的蜂王浆提取液对心肌心率和收缩力的影响。结果:蜂王浆浓度在1∶100~1∶500时,完全抑制心肌的活动;浓度在1∶600~1∶10 000时,随着浓度的降低,对心肌的抑制力减弱。结论:在一定浓度范围内蜂王浆溶液对蟾蜍离体心脏活动有抑制作用,且浓度越高对蟾蜍离体心脏抑制力越强。     

蜂王浆介导外源基因转移的初步研究

采用DNA延滞实验研究蜂王浆与DNA的结合能力,然后通过蜂群哺育和人工培育两种方式,对1日龄工蜂幼虫进行短期饲喂,初步研究蜂王浆介导绿色荧光蛋白基因的方法和转移情况.结果表明:在蜂群环境下,蜂王浆中的外源DNA短期内不会完全被分解;但用蜂王浆作媒介并未实现蜜蜂基因转染,蜜蜂能否通过蜂王浆介导实现基因转移,还需进一步探讨.     

中药灌喂蜜蜂对所产蜂王浆的影响

为了探讨中药灌喂蜜蜂对所产王浆的影响,笔者采用定群编组的方法,观察用不同中药组(1、2、3号)方,灌喂蜜蜂后,台基接受率、王浆产量、微量元素和维生素C水平的改变.结果表明中药组蜂王浆其颜色气味明显区别与普通蜂王浆;观察台基接受率、产浆量发现3号方会影响蜜蜂台基接受率、产浆量外,1、2号方对蜜蜂台基接受率、产浆量无明显影响;进一步研究发现,生物蜂王浆的微量元素、维生素含量区别于普通王浆.用中药灌喂蜜蜂,所产王浆成分有别于普通王浆.     

王浆高产蜜蜂和原种意大利蜜蜂咽下腺发育蛋白质组分析

 【目的】对王浆高产蜜蜂（浆蜂）（A. m. ligustica）和原种意大利蜜蜂（原意）（A. m. ligustica）1、3、6日龄工蜂咽下腺进行蛋白质组研究,揭示咽下腺在此阶段的发育特征。【方法】采用双向电泳方法对浆蜂和原意咽下腺进行蛋白质组研究,通过与已鉴定蛋白功能的咽下腺和蜂王浆蛋白质组图谱比较,推断部分蛋白的功能。【结果】浆蜂咽下腺在3个日龄表达的蛋白数（210、192、230）分别显著的高于原意（169、188、212）,两蜂种均在6日龄表达蛋白最多（P＜0.05）。浆蜂咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为119个,其中21个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,14个蛋白显著下调;原意咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为107个,其中15个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,19个蛋白显著下调（P＜0.05）。1日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为145个,其中28个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,14个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为65个,原意为24个;3日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为138个,其中31个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,19个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为54个,原意为50个;6日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为175个,其中44个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,25个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为55个,原意为37个（P＜0.05）。与原意相比,浆蜂咽下腺发育3个日龄特有蛋白点总数为72个。从3日龄开始在浆蜂和原意咽下腺的蛋白表达谱中出现大量的王浆主蛋白点。【结论】从工蜂羽化到6日龄这一阶段内,浆蜂咽下腺蛋白表达明显比原意活跃,6日龄是2蜂种表达最为活跃的阶段。咽下腺发育过程中的共有蛋白为咽下腺发育所必需的管家蛋白,但它们的表达模式存在较大差异。不同日龄的特异蛋白表明咽下腺在不同的发育阶段需要不同的蛋白来调控。两蜂种工蜂咽下腺都从3日龄就开始分泌蜂王浆。     

西方蜜蜂产浆适龄幼虫及取浆时间

对西方（ＡｐｉｓｍｅｌｉｆｅｒａＬ．）采用１和２日龄工蜂幼虫产浆的王台接受率和不同时间取浆浆量进行研究，结果显示：（１）２日龄工蜂幼虫的王台接受率（８０．６７％）极显著高于１日龄（４９．３３％）（Ｐ＜０．０１）；（２）１和２日龄幼虫产浆的台平均产浆量最高峰分别在各自移虫后第８４ｈ和第７２ｈ，浆量较高时段分别在移虫后第７８—９０ｈ和第６８—７８ｈ．２个日龄幼虫产浆最高浆量之间及浆量较高时段的浆量均无显著差异，但采用２日龄幼虫产浆的比１日龄幼虫的提前１２ｈ达到台平均产浆量高峰和浆量较高时段．（３）采用２日龄幼虫产浆其总产浆量可比采用１日龄的增加５６％．通过试验认为，西方蜜蜂产浆采用２日龄幼虫，并在移虫后第６６—７８ｈ内取浆最适     

不同湿度环境下蜂王浆酶解产物的吸湿保湿性能

为了研究蜂王浆酶解产物在不同湿度环境下的吸湿保湿性能,利用碱性蛋白酶对蜂王浆进行酶解,以蜂王浆冻干粉和骨胶原为对照,对蜂王浆酶解产物在25℃,相对湿度分别为20%、50%和65%条件下酶解产物的吸湿和保湿性能进行测定。结果表明:在本实验湿度环境范围内,在底物质量分数为8%、酶与底物含量比1%、酶解温度45℃、酶解时间3h、pH值9.5的酶解条件下,酶解产物的吸湿和保湿性能均高于蜂王浆冻干粉,且明显优于骨胶原。说明蜂王浆通过碱性蛋白酶酶解的产物具有良好的保湿和吸湿性能,在吸湿保湿化妆品开发方面具有广阔的开发前景。     

添加剂对王浆增产与工蜂王浆腺发育影响的研究

通过分组试喂不同营养添加剂，观察营养物对王浆增产的作用，试验证明，可提高王浆产量２１．１８％。同时，通过解剖工蜂王浆腺，从生理学角度进一步证实营养对王浆增产的效果，并探索了王浆增产的生物学机制。     

蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62甲基化影响

【目的】研究蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62甲基化水平影响。【方法】以意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）和中华蜜蜂（A. cerana cerana）1日龄幼虫为试验材料,分别饲喂意大利蜜蜂蜂王浆和中华蜜蜂蜂王浆,并提取每组3日龄和6日龄幼虫样品的基因组DNA,利用Sequenom MassARRAY技术检测dynactin p62甲基化水平。【结果】饲喂异种蜂王浆可以更显著降低雌性蜜蜂幼虫dynactin p62整体甲基化水平;饲喂同一种蜂王浆,均为6日龄幼虫dynactin p62整体甲基化水平显著低于3日龄;2种蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62各位点甲基化水平影响不同。【结论】2种蜂王浆对雌性蜜蜂幼虫dynactin p62整体甲基化水平和各位点甲基化水平影响不同,这说明不同蜂王浆具有不同的生物学效应。