硫酸水解蚕丝蛋白制备丝素肽的研究

[目的]获得制备丝素肽的简便高效的方法.[方法]以废蚕丝为原料,用0.5％碳酸钠水溶液进行脱胶,硫酸进行水解,氧化钙水溶液中和沉淀,活性炭脱色制备丝素肽;采用正交试验L9（34）优化硫酸水解工艺条件.[结果]试验表明,蚕丝蛋白在固液比1∶40 g/ml,硫酸浓度30％,水解温度80℃,水解时间9h的条件下进行水解时,丝素肽的得率最高.[结论]研究可为丝素肽的进一步工业化生产提供可靠的理论依据.     

家蚕脱胶蚕丝的蛋白组成成分

【目的】探讨家蚕（Bombyx mori）蚕丝纤维脱胶后蛋白质成分的变化,为了解丝蛋白在蚕丝纤维中的分布特征打下基础,并为改进蚕丝纤维加工工艺提供依据。【方法】利用木瓜蛋白酶、碳酸钠、尿素、中性皂和碱水法5种方法对蚕茧进行脱胶处理;并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同方法处理的蚕丝和不同蚕丝加工产品的脱胶程度,以及脱胶对丝素的影响;利用FASP酶解法和液相色谱-串联质谱联用的技术鉴定不同方法脱胶后的蚕丝及各种蚕丝加工产品的蛋白组分;利用生物信息学的方法对鉴定到的丝蛋白进行注释并通过非标定量的方法比较各种样品中丝蛋白的丰度。【结果】通过5种方法对蚕茧丝进行脱胶,蛋白电泳检测发现木瓜蛋白酶法降解丝胶蛋白的同时基本不会破坏丝素蛋白;碳酸钠法对丝胶的降解能力较弱,但对丝素的降解较强;中性皂法和尿素法对丝胶蛋白和丝素蛋白的降解都比较严重;碱水法的效果不理想。通过蛋白质组学研究发现木瓜蛋白酶和中性皂法脱胶后的蚕丝中几乎没有丝胶蛋白,主要是丝素蛋白、seroin 1和甘氨酸富含蛋白等;尿素法和碳酸钠法脱胶后的蚕丝中残留蛋白最少,主要是丝素蛋白和甘氨酸富含蛋白等。通过蛋白电泳检测了6种蚕丝加工产品中的蛋白质,发现生丝和胚绸中的丝素蛋白比较完整,绸、缎和电力纺中的丝素蛋白出现了部分程度的降解,而丝绸旧衣中的丝素蛋白有严重的降解。通过蛋白质组学分析发现生丝和胚绸中的主要成分包括3种丝素、丝胶1、seroin 1、osiris 9a、甘氨酸富含蛋白和蛋白酶抑制剂SPI51等;绸、缎和电力纺的主要成分包括3种丝素蛋白和seroin 1,而丝绸旧衣中的主要成分包括3种丝素蛋白和甘氨酸富含蛋白。【结论】木瓜蛋白酶脱胶法能够最大程度地保持丝素纤维的完整性,碳酸钠和尿素法的脱胶程度最高。生丝和胚绸中的丝胶蛋白含量很高,丝素纤维比较完整。绸、缎和电力纺中的丝胶蛋白很少,丝素纤维有部分程度的降解。蚕丝经过彻底的脱胶后还剩余的蛋白包括丝素重链、丝素轻链、丝素p25、seroin 1和甘氨酸富含蛋白。     

不同水解程度丝素肽对黑色素生成抑制能力的研究

探讨了脱胶丝素经盐溶解后进行碱水解时 ,不同条件对丝素水解程度及不同水解程度丝素肽对蚕血黑色素生成的抑制能力的影响 .结果发现 ,温度对丝素的水解程度影响最大 ,时间其次 ,浓度的影响最小 ;丝素蛋白液未水解时 ,其对黑色素抑制率很低 ,只有 2 8.34% ,而丝素水解后 ,抑制率迅速提高到 4 8.95 % ,并且随着水解程度的加深不断提高 ,当氨基氮浓度达 0 .4 76 5g·L-1时 ,其对黑色素生成抑制率达最高值 6 7.14 % ;之后 ,随着水解程度的增加 ,其黑色素生成抑制率反而下降 .     

几种脱胶方法的比较研究

[目的]优化蚕丝的精制工艺,提高脱胶率。[方法]以N1白、杂交种和N2为材料,以蚕茧脱胶率、丝胶溶解率为考察指标,采用酶脱胶、酸脱胶和高温高压水脱胶3种工艺,探索蚕丝的最佳脱胶方法。[结果]采用酸脱胶和高温高压水脱胶时,随着时间的延长,脱胶率增加;在相同时间内,3个材料的脱胶率由大到小依次为:N1白>杂交种>N2。采用高温高压水脱胶时,N1白、杂交种和N2的脱胶率分别为17.80%~37.80%、14.67%~35.00%和12.33%~29.67%。在pH值为7、温度为60℃的木瓜蛋白酶液、浴比为1∶50的条件下脱胶2 h,N1白、杂交种和N2的脱胶率分别为18.50%、14.85%和12.50%。[结论]高温高压水脱胶工艺的脱胶率最高,此法由于无化学品引入,是获得纯净的丝素、丝胶的理想方法。     

柞蚕丝素粉的制取

对比分析了柞蚕茧经二次脱胶法脱胶,不同浓度的CaCl2溶液、稀HCl和稀NaOH溶液分别溶解相同质量的脱胶丝素制得丝素粉的方法.脱胶丝素在稀的强酸和强碱中所得丝素粉较少,原因是在加热过程中脱胶丝素降解为氨基酸,使得盐析的沉淀少, 丝素粉的制取率低,而50%左右的CaCl溶液是制取丝素粉的最佳浓度.从经济实用考虑,采用较便宜的CaCl2作为溶剂,可大大节省生产成本,符合生产的要求.     

家蚕丝素固定化α-淀粉酶的制备及其理化特性

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素,经物理吸附方法固定α-淀粉酶,制得碱化丝素固定化酶.每克碱化丝素固定化酶的总活力为439.81 U,固定化酶活力回收率为48.33%,活力表现率为74.18%.同样,蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末,经吸附后用戊二醛为交联剂固定了α-淀粉酶,制成粉末状丝素固定化酶.每克粉末状丝素固定化酶的总活力为509.09 U,活力回收率为58.33%,活力表现率为83.45%.经对固定化酶性质的研究表明:碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定α-淀粉酶;最适温度比游离酶升高了10 ℃;最适pH降低了0.8～1.0个单位,固定化酶具有较长的操作半衰期(26～38 d)、较强的抗蛋白质变性剂(8 mol/L尿素溶液中的活力在80%以上)和贮存稳定性(贮存60 d后,其活力大于50%);实验还发现:在制备固定化淀粉酶时,酶的最适浓度为2.8～3.2 g/L,戊二醛的最适浓度为0.25%.     

家蚕丝素固定化α—淀粉酶的制备及基理化特性

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素，经物理吸附方法固定α-淀粉酶，制得碱化丝素固定化酶。每克碱化丝素固定化酶的总活力为439.81U，固定化酶活力回收率为48.33%，活力表现率为74.18%。同样，蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末，经吸附后用戊二醛为交联剂固定了α-淀粉酶，制成末状丝素固定化酶。每克粉末状丝素固定化酶的总活力为509.09U。活力回收率为58.33%，活力表现率为83.45%。经对固定化酶性质的研究表明：碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定α-淀粉酶；最适温度比游离酶升高了10℃；最适pH降低了0.8-1.0个单位，固定化酶具有较长的操作半衰期（26-38d)、较强的抗蛋白质变性剂（8mol/L尿素溶液中的活力在80%以上）和贮存稳定性（贮存60d后，其活力大于50%）；实验还发现：在制备固定化淀粉酶时，酶的最适浓度为2.8-3.2g/L，戊二醛的最适浓度为0.25%。     

产丝素蛋白酶菌株发酵条件的优化

采用单因素法,研究了产丝素蛋白酶菌株在发酵过程中,培养温度,培养基初始p H值,培养基碳源、氮源、金属离子等因素对产丝素蛋白酶菌株的发酵影响,最后通过对发酵产生的产丝素蛋白酶酶活及丝素蛋白降解的影响分析,来初步确定最佳发酵条件。研究结果表明:培养温度30℃,培养基初始p H值8.0,培养基中添加丝素,以玉米粉作为碳源,KNO3为氮源,以Mg2+作为金属离子,在该条件下发酵所得丝素蛋白酶活性最高,降解程度最大。     

水酶法提取红花山茶籽油的精炼研究

以水酶法提取的红花山茶籽毛油为原料,分别考察不同因素对水化脱胶、碱炼脱酸和吸附脱色等过程精炼效果的影响。结果表明,水化脱胶的条件为脱胶温度为75 ℃,磷酸添加量为0.4%,加水量为5%,其脱胶率为(93.6±2.3)%,得到的脱胶油中磷脂含量为(20.2±0.6) mg·kg^-1;碱炼脱酸的参数为脱酸温度为80 ℃,脱酸时间为40 min,碱液浓度为15%,油脂酸价最低为(0.19±0.2)mg·g^-1;磁性纤维素微球为脱色吸附剂,脱色温度为100 ℃,脱色时间为30 min,吸附剂浓度为3%,油脂脱色率为79.1%。     

酶法制取丝素降胆固醇肽的工艺研究

[目的]利用废蚕丝制取具有降胆固醇的活性肽。[方法]考察不同水解度的丝素活性肽对胆固醇在胆汁胶束溶液中溶解度的抑制率,并以此作为碱性蛋白酶水解蚕丝蛋白的评价指标,采用单因素试验对碱性蛋白酶的水解工艺进行了探讨。[结果]其最佳工艺条件：产物浓度为20g/L,酶用最为0.4g/L,反应温度为40℃,pH为9.5。[结论]碱性蛋白酶水解丝素蛋白的水解度为16.5%时,产物具有最佳活性。     

利用硫氰酸锂水溶液提取云南琥珀蚕茧壳丝蛋白的适宜条件研究

琥珀蚕(Antheraea assama)是一种具有重要利用价值的经济昆虫,其蚕丝特性优良,在纺织、生物医药、生物材料等领域有较好的开发利用潜力。本研究利用硫氰酸锂水溶液提取琥珀蚕茧壳丝蛋白,结果表明:部分琥珀蚕丝蛋白可得到提取,且提取效率随提取温度的升高而提高。在设置的最高水浴温度60℃条件下提取12 h后得到的蛋白浓度为10.257 mg/mL,溶解率为8.91%;在60℃溶解条件下进行超声处理(53 kHZ,500W)12 h,蛋白浓度为14.552 mg/mL,溶解率达16.93%。SDS-PAGE凝胶电泳检测提取的丝蛋白,显示不同处理条件下提取的丝蛋白条带无明显差异,丝蛋白无明显降解。提取的丝蛋白在浓度和质量上都可满足实验室研究的需要。     

蚕丝蛋白溶液处理后生菜幼苗在高温胁迫下的生理生化变化

以瑞比特生菜为材料,4叶1心期幼苗于光照培养箱（20℃,9000Lx）中每天叶面喷施1次20～200mg／L质量浓度的蚕丝蛋白溶液,连续3d,以喷蒸馏水对照,然后置于高温胁迫条件下（昼温／夜温：40℃／30℃）生长3d,测定叶片各项生理生化指标。结果表明,经蚕丝蛋白溶液处理的幼苗,在高温胁迫下,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性和可溶性蛋白含量均高于对照,而丙二醛（MDA）含量低于对照,其中以50mg／L大分子丝素蛋白和100mg／L小分子丝素蛋白质量浓度处理效果最好。蚕丝蛋白可能具有缓解高温胁迫对生菜幼苗造成的破坏作用。     

微波辅助酸水解法制备丝素肽的研究

[目的]建立并优化快捷、高效制备丝素肽的微波辅助酸水解工艺。[方法]以家蚕废丝为原料,比较在碱液脱胶、磷酸酸解、石灰水沉淀除盐、活性炭脱色的工艺流程中酸水解的优化方案,并探讨亚硫酸和磷酸混合酸解对后继脱色工段的影响。[结果]微波辅助磷酸水解丝素蛋白最佳工艺条件为：磷酸浓度85%,温度70℃,功率150W,酸料比4∶1,水解90min,产品回收率达到69.0%,比磷酸水浴水解方案高约15%,且节省了4～5h的水解时间;在微波辅助水解条件下,亚硫酸和磷酸混合酸解比单独用磷酸酸解所得水解液颜色浅,色值可降低65.46%。[结论]对于丝肽的酸水解法制备,微波辅助能大大降低能耗,节省成本;混合酸酸水解法能降低酸解液色值。     

酶法水解丝素蛋白最佳条件的研究

通过6种酶对家蚕丝素蛋白水解的试验表明,Alcalase 2.4 L水解效果最佳,Flavorzyme次之,并经正交试验确定Alcalase对丝素水解的最佳条件为:浓度8%的丝素溶液中加入1%的酶,在pH值85、5℃条件下反应6 h,水解度可达39.34%,回收率为76%。SDS-PAGE电泳实验证明,水解产物的分子量大致为6.2~7.8 kDa。在此基础上,添加1.5%的Flavorzyme继续水解,在pH值75、0℃条件下反应3 h,水解度为44.13%,回收率为59%。     

正交试验法优化红小豆蛋白提取工艺

采用碱提酸沉法从红小豆中提取蛋白质。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计,研究pH值、温度、水解时间和料液比对红小豆蛋白提取率的影响。结果表明,各影响因素影响程度依次为:pH值>温度>料液比>水解时间;碱法提取红小豆蛋白的最佳工艺条件为:pH值9.5、提取温度50℃、提取时间60 min、料液比1 g∶35 mL,酸沉红小豆蛋白的最佳pH值为4.2。     

高温高压过热蒸汽处理木材的热稳定性

以日本柳杉(Cryptomeria japonica D. Don)为试材,采用差热分析仪(附带DSC测试配置)对经温度为80、120、160、180℃,相对湿度分别为0、40%、60%、100%(80℃时最大相对湿度为80%)过热蒸汽处理后的试件进行了测试,探讨不同温度、不同相对湿度条件对木材热稳定性的影响.结果表明:高温高压过热蒸汽处理后的木材与未处理材的热分解机理基本相同;处理木材的温度越高,木材热分解所需温度也随之增高;高温高压过热蒸汽处理材的热稳定性好于未处理材,并随处理温度的升高而提高;相同温度条件下,相对湿度较低时处理的木材,其热稳定性好于相对湿度较高时处理的木材;相同相对湿度条件下,高温处理的木材,其热稳定性好于低温处理的木材.     

碳化温度对成品卷烟烟丝挥发性致香成分的影响初探

【目的】研究成品烟丝致香成分与不同碳化温度间的关系。【方法】设计制作相同的成品烟丝样品,通过HS-GC-MS在不同碳化温度条件下(80、100和120℃)测定烟丝致香成分的种类,并研究两者间的相互影响。【结果】(1)成品烟丝从80℃开始碳化,120℃时碳化明显,从低温到高温,色泽由金黄色向棕褐色转变。(2)在80、100和120℃各温度条件下,平行测试的质谱峰形态基本表现一致,分别检测到18、52和81种致香成分,分子量范围为44.026~241.077 u。(3)从低温到高温,不同碳化温度下特征致香物质的数量分别为4、13和36种。【结论】随着温度的提升,致香成分的数量不断增加,其中,100℃时特征致香成分为胺类、醇类、硫化物和含氧多环类化合物,分子量40~200 u;120℃时特征致香成分为酮类、醇类、醚类和含氮多环化合物,分子量50~160 u。     

医用再生丝素蛋白膜的制备及性能研究

[目的]以再生丝素蛋白为原料,制备致密再生丝素蛋白膜,通过优选改性方法使得该膜具备一定的力学性能和不溶性、合适的降解速度等,以满足将来在子宫内膜修复中的应用要求。[方法]将蚕丝脱胶、溶解得到再生丝素溶液,采用流延法铺膜,并用无水乙醇和浓度0.1%戊二醛进行不溶化处理,用蛋白酶XIV进行降解试验,利用万能拉伸机、FESEM、FTIR和失重法等方法对丝素蛋白膜的微观形貌、力学性能、蛋白构象和降解性等进行测试。[结果]由再生丝素溶液可制备光滑致密的丝素蛋白膜,经乙醇和戊二醛处理后,丝素分子中β-折叠结构增多,无规卷曲结构减少,其力学性能增强,降解速度减慢。蛋白酶XIV可加速其降解。[结论]再生丝素蛋白膜在作为物理屏障用于预防和减少术后组织黏连方面有着极大的可能性。     

碱法提取花生粕蛋白质工艺条件的优化

采用碱提酸沉法从花生粕中提取花生分离蛋白,用蛋白质提取率作为衡量提取工艺的指标。在单因素试验基础上,以料液比、pH值、提取温度和提取时间为考察因素,采用正交试验优化最佳提取工艺,确定碱提的最佳工艺条件为:料液比1 g∶10 mL、pH值10.0、提取温度60℃、提取时间2 h。在此条件下,花生粕蛋白质最高提取率可达75.88%。在试验影响因素中,影响程度从大到小依次为:提取温度>pH值>提取时间>料液比。     

胰蛋白酶对叶蛋白水解作用的研究

以植物叶蛋白浓缩物为材料,用胰蛋白酶在不同条件下对其进行水解。结果表明,胰蛋白酶作用于植物叶蛋白,其最佳水解温度为４０℃;最佳水解ｐＨ值为９;水解程度随酶量和反应时间增加而增加;各种不同种类的植物叶蛋白在相同条件下被胰蛋白酶水解的程度基本一致,证明了植物叶蛋白易被动物体内蛋白酶分解。