原料乳中耐冷假单胞菌的种类及其肽酶活力

在冷藏的原料乳中,假单胞菌经常出现并成为主导菌群,其分泌的耐热酶会使原料乳变质。对从原料乳中分离的102株假单胞菌经rpoB基因测序进行菌种分析,用偶氮酪蛋白测试所有假单胞菌在2种培养条件(30℃培养2d或6℃培养8d)下胞外肽酶的蛋白水解活性和耐热性。结果表明:荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是假单胞菌中最主要的菌种,其次是莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)和假单胞菌sp1 (Pseudomonas sp1)。不同假单胞菌菌种之间的产肽酶能力存在明显差异。大多数荧光假单胞菌(23/41)在不同温度(30℃和6℃)条件下培养后能产肽酶,而大多数的假单胞菌sp1不产肽酶,所有分离的莓实假单胞菌(13/13)只在6℃条件下产肽酶,大多数的假单胞菌所产肽酶都有热稳定性。在6℃培养条件下,荧光假单胞菌菌株M02有最高肽酶活力(11.78ΔA/ (h·mL)),其胞外肽酶最佳催化pH值为6.5,最佳催化温度为40℃。当M02的接种浓度为103 CFU/mL时,6℃培养5d就能使脱脂乳溶液产生沉淀。对耐冷假单胞菌的种类和产肽酶能力进行分析和考察有助于提高原料乳或乳制品的质量和安全性。     

原料乳中耐冷菌群及其产酶特点

耐冷菌及其分泌的耐热酶是原料乳中常见污染物,会导致乳制品腐败。通过16S rRNA基因测序分析了分离自上海地区原料乳的耐冷菌群,以及通过平板法研究不同耐冷菌的蛋白酶和脂肪酶活力。结果表明:所有的分离株属于9个菌纲,含33个菌属,其中数量占主要的菌属是假单胞菌(Pseudomonas)(55％)、不动杆菌(Acinetobacter)(10％)和黄杆菌(Flavobacterium)(5％),其余30个菌属占所有菌株数的30％。耐冷菌产酶能力平板法实验显示,大部分的耐冷菌都有产蛋白酶或脂肪酶的能力,不同菌属之间产酶特点存在差异。假单胞菌和黄杆菌主要表现为产蛋白酶活性,克雷伯氏菌(Klebsiella)主要表现为产脂肪酶活性,而大多数的不动杆菌没有产蛋白酶或脂肪酶活性。     

牛乳中嗜冷假单胞菌胞外蛋白酶的研究进展

假单胞菌通常被认为是危害原料乳及其制品的主要嗜冷菌,其分泌的胞外蛋白酶具有耐热性,甚至能在超高温灭菌处理后仍有活性残留,并减短超高温灭菌乳的货架期.本文对来自牛乳中的嗜冷假单胞菌蛋白酶的研究进展做了总结,重点假单胞菌蛋白酶的催化机制研究进展,相关基因包括蛋白酶基因apr X在假单胞菌鉴别中的应用研究进展.最后讨论了嗜冷假单胞菌蛋白酶需要深入研究的方向.     

1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 阐明青海省大通县某鸡场病鸡发病原因,为奇异变形杆菌病防控提供参考。[方法] 无菌采集病鸡肝脏、脾脏和泄殖腔拭子等样品,接种普通琼脂和SS琼脂平板进行细菌分离纯化培养,挑取平板上生长的疑似菌落进行革兰染色镜检,再将分离的菌落接种生化鉴定管进行生化鉴定,同时通过PCR扩增16S rDNA和tuf特异性基因并测序。将分离菌接种雏鸡进行致病性试验,采用K-B法评价分离菌对27种抗菌药物的敏感性。[结果] 分离菌为短杆、长杆状多形性杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。PCR成功扩增出1 400 bp的16S rDNA,序列比对显示与奇异变形杆菌同源性最高,为99.9%。雏鸡致病性试验结果表明,该株奇异变形杆菌对雏鸡有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对哌拉西林、头孢吡肟和头孢噻肟等高度敏感,对环丙沙星、奥格门汀中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林和头孢唑啉有耐药性,提示该菌对头孢类药物高度敏感。[结论] 分离到的一株奇异变形杆菌对鸡具有较强的致病性,且对多种药物表现出耐药性。     

一株具有广谱抗菌性的海洋微生物的筛选与鉴定

为了分离出广谱抑菌的海洋微生物,试验以北冰洋沉积物为样本,采用涂布平板法分离海洋微生物单菌落,以9种致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、弧菌、铜绿假单胞菌、沙门氏杆菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌、鲍曼不动杆菌)为指示菌,进行抑菌试验及抑菌谱的研究;通过形态学特征、生理生化特征和16S rDNA测序对抑菌效果最好的海洋微生物进行鉴定。结果表明:共分离得到100个单菌落,除去菌落形态相同的菌株,共分离得到40株分离菌。从待测的40株菌株中筛选出1株抑菌效果最好的菌株(26号菌株),根据形态学特征、生理生化特征和16S rDNA测序结果鉴定为地衣芽孢杆菌,该菌株对大肠杆菌、沙门氏杆菌、弧菌表现为高敏,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌表现为中敏。说明26号菌株对畜禽养殖过程中常见的致病菌——大肠杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌都表现出较为明显的抑菌效果,具有作为饲料添加剂中益生菌的可能性。     

肉鸽铜绿假单胞菌分离与鉴定

从南京某肉鸽养殖场死亡病鸽肝脏中分离到1株细菌,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、药敏试验、实验动物致病性试验和16S rDNA基因片段PCR检测及基因测序试验,结果表明,该菌可以在普通营养琼脂和SS琼脂平板上生长,革兰染色镜检为革兰阴性菌,生化试验检测结果鉴定值为1 655,符合铜绿假单胞菌生化特性;药敏试验表明,该菌对磷霉素、环丙沙星和阿米卡星高度敏感,接种小鼠能导致其死亡并分离出同一细菌,16S rDNA基因片段测序后与GenBank中登录的铜绿假单胞菌同源性为99%。综合以上结果鉴定该分离菌为铜绿假单胞菌。     

眼镜蛇腐皮病病原菌分离鉴定与药敏试验

为了研究眼镜蛇腐皮病的致病菌,试验采用细菌分离培养的方法,在无菌条件下,从患腐皮病眼镜蛇皮肤溃烂处挑取少许内容物划线接种于普通琼脂平板、兔血平板、SS琼脂平板及真菌培养基上,继而选取优势菌落进行分离、纯培养。结果表明:得到9种细菌,没有发现真菌。根据细菌形态、菌落生长特征和生化特性得出,这9种细菌分别为:黏质沙雷菌1株、奇异变形杆菌3株、铜绿假单胞菌3株、克氏耶尔森菌1株、肺炎克雷伯菌1株、雷极普鲁威登斯菌1株、嗜麦芽假单胞菌1株、金黄色葡萄球菌1株和腐生葡萄球菌3株。经致病性试验证实,奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、克氏耶尔森菌、雷极普鲁威登斯菌、嗜麦芽假单胞菌和金黄色葡萄球菌具有致病性,黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和腐生葡萄球菌无致病性。药物敏感性试验证实:在15株致病菌中,除克氏耶尔森菌外,均对妥布霉素和庆大霉素高度敏感;嗜麦芽假单胞菌对妥布霉素不敏感,对庆大霉素高度敏感;除金黄色葡萄球菌外,均对阿米卡星高度敏感;15株致病菌均对头孢类抗生素不同程度敏感;哌拉西林、氨曲南和卡那霉素对大部分菌有抑制作用。说明眼镜蛇腐皮病主要由致病性细菌引起,敏感药物治疗后有良好效果。     

长春市某奶牛场乳腺炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

奶牛乳腺炎是制约奶牛养殖效益和奶品质的主要疾病之一，为了解当前长春市某大型集约化奶牛场奶牛乳腺炎病原菌流行和耐药情况，本试验对该场奶牛乳腺炎发病情况进行了调查，对采集的119份临床型乳腺炎乳样进行细菌分离鉴定并对分离鉴定的病原菌进行小鼠致病性试验和药敏试验。结果显示：该场奶牛乳腺炎发病率在4%左右，初产牛乳腺炎发病率明显高于经产牛，乳腺炎发病率还与胎次、年龄等因素相关。本试验共分离鉴定出木糖葡萄球菌49株(42.2%)、松鼠葡萄球菌39株(33.6%)、大肠杆菌15株(12.9%)、金黄色葡萄球菌5株(4.3%)、无乳链球菌3株(2.6%)、菠萝泛菌3株(2.6%)、产酸克雷伯菌1株(0.9%)和铜绿假单胞菌1株(0.9%);其中菠萝泛菌、无乳链球菌和铜绿假单胞菌对小鼠具有较强致病性。药敏试验结果显示，分离菌株的耐药性普遍存在，大肠杆菌和铜绿假单胞菌耐药种类最多。除无乳链球菌外，其他菌株均对庆大霉素或阿米卡星敏感，可作为该场奶牛乳腺炎治疗首选药物。本试验通过对该场乳腺炎调查、分离菌鉴定和耐药性分析，为该场乳腺炎的防治提供了参考依据。     

鹅肠道纤维素分解菌的分离与优化组合研究

本研究旨在从鹅肠道中分离、鉴定纤维素分解菌,并进行优化组合,通过平板法筛选纤维素分解菌,根据菌株形态、培养特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析确定其种属,并利用菌株拮抗试验和交叉酶活力测定试验对优势纤维素分解菌进行优势组合。结果表明:从鹅肠道样品中分离出纤维分解菌29株,其中需氧菌19株、厌氧菌10株;8株纤维分解能力较强的菌株分别为胶质类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、解纤维梭菌、溶血性葡萄球菌、绿脓假单胞菌;蜡样芽孢杆菌与绿脓假单胞菌组合的酶活力最高,达到9.86 U/mL。     

金针菇菌糠纤维素降解菌的分离、生物学特性及酶活性分析

[目的]分离筛选金针菇菌糠来源的纤维素降解菌,研究其生物学特性和所产纤维素降解酶活性,为菌糠资源的饲料化利用提供技术支撑。[方法]采用稀释涂布法接种金针菇菌糠样品,采用硝酸纤维素钠培养基进行纤维素降解菌的分离培养,利用刚果红培养基初步分析分离菌株的纤维素降解能力;通过16S rDNA测序分析和生物安全性预测挑选候选菌株,然后进行生理生化特性分析、不同温度下生长曲线测定以及纤维素降解酶活性动态分析。[结果]样品经硝酸纤维素钠培养基筛选培养后获得30个独立菌落,所有菌株在刚果红培养基上都能形成明显的透明圈,部分菌株具有较强的纤维素降解能力。16S rDNA测序分析显示,30株分离菌被鉴定为韩国假单胞杆菌、明斯特小陌生菌、深红沙雷菌等9个菌种;结合生物安全性预测及纤维素降解能力初筛结果,选取韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis,编号：JK-32）、明斯特小陌生菌（Advenella mimigardefordensis,编号：JK-52）、深红沙雷菌（Serratia rubidaea,编号：JK-56）、马葡萄球菌（Staphylococcus equorum,编号：J...     

Pseudomonas aeruginosa in raw and pasteurized milk

Eighteen strains of Pseudomonas aeruginosa, i.e. 8.87%, were isolated during a year from 203 samples of raw milk. Two Pseudomonas aeruginosa strains, i.e. 4%, were isolated from 50 samples of pasteurized milk. The strains were isolated using propagation techniques in meat-peptone broth with malachite green and on selective media--on centrimide agar (CEM) and on Pseudomonas F agar. All the isolated strains produced protease, whereas lipase was produced by only five strains. The strains were devitalized when exposed to pasteurization temperatures (72 degrees C) for 20 seconds. At cold store temperatures (4 degrees C), Pseudomonas aeruginosa strain cells propagated on average by two orders, inhibitory effects of low temperatures were recorded only with one strain. Inhibitory effects of milk cultures (cream, yogurt) on Pseudomonas aeruginosa were observed; their effects were more clear-cut at the temperature of 4 degrees C. The strains were markedly susceptible to gentamycin.     

嗜冷菌对UHT乳品质的影响研究

摘要：原料乳嗜冷菌污染是影响uHT乳保质期的重要原因之一,并且嗜冷菌分布具有地域特征性本研究对蒙牛8个牧场原料乳中的嗜冷菌进行了分离和鉴定,确定了牧场常见嗜冷菌种类及特性,并分析了其对uHT乳品质的影响．结果表明,从试验样品中分离出的嗜冷菌为假单胞菌属、微球菌属和产碱杆菌属;牧场原料乳的嗜冷菌数量与气温有关,1～3月份数量较高,6～9月份数量较低;原料乳嗜冷菌数越多,UHTqL货架期越短;原料乳中嗜冷菌数达到10^5 CFU／mL时,对uHT乳苦味值的影响显著（p〈（1．（15）;嗜冷菌脂肪酶活力达10IU／mL、蛋白酶活力为15Iu／mL、25IU／mL时对UHTSfL苦味值的影响显著（P〈0．05）;原料gLpH值为6．7和3.5％2冷藏条件下,蛋白酶、脂肪酶活性较高,不利于uHT乳长期贮存、综上研究,原料乳中嗜冷菌数过多会严重影响uHT乳品质和风味;低温贮藏条件下,嗜冷菌产生的脂肪酶和蛋白酶会破坏UHT乳品质,因此不建议长期低温保存uHT乳、     

母乳乳清蛋白抗氧化活性肽的研究

母乳是婴幼儿的最佳食物来源,而乳清蛋白是营养和活性物质的基础,其中生物活性肽对人体健康具有重要促进作用.为研究母乳乳清蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶4种酶制备抗氧化活性多肽,通过单因素试验和响应面分析对乳清蛋白酶解工艺进行优化.结果表明:中性蛋白酶最适于母乳乳清蛋白抗氧化肽的制备,此时的最佳工艺参数为pH 7.21、反应温度50.03℃、酶与底物比(E/S)4 486.68 U/g、酶解时间5h;影响1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率的因素大小为:酶与底物比＞温度＞pH值.利用大孔树脂、葡聚糖凝胶过滤色谱G-25、G-15分析得出组分峰Ⅰ抗氧化活性最强,其DPPH自由基清除率达到了60.31％.     

Cholesterol oxidase and resistance of Rhodococcus equi to peroxidative stress in vitro in the presence of cholesterol

Rhodococcus equi is a well-characterized bacterial pathogen which lyses cell membranes with the help of cholesterol oxidase (CO). Survival in macrophages is warranted by its ability to resist reactive radicals via catalase and superoxide dismutase (SOD). Therefore, CO production in the absence or presence of 0.1 % cholesterol and sensitivity to exogenous hydrogen peroxide (H2O2) and superoxide anion (SOA) were tested in seven strains of R. equi in vitro. When R. equi strains were grown on agar plates with cholesterol, the bacterial growth [colony-forming units (cfu)/plate] did not increase significantly in comparison with the growth on plates without cholesterol. The activity of CO increased, significantly for extracellular CO. In subsequent experiments, R. equi strains grown on cholesterol were stressed with H2O2 or SOA so that approximately 10 % of cfu/plate survived. During stress induced by SOA, membrane CO and SOD activity increased significantly. Catalase activity increased 2-fold with H2O2 and 3-fold with SOA exposure. These data suggest that the presence of cholesterol induces CO in bacteria grown on agar plates. Catalase, SOD and even membrane-bound CO respond to reactive oxygen species.     

动物性食品中单核白细胞增多症李氏菌的检测

比较了4种增菌液和3种分离琼脂对动物性食品中单核白细胞增多症李氏菌的检测效果,以蛋白陈增菌液和胰蛋白陈琼脂为最佳.用这种方法检测了市售猪肉、分割鸡肉、鲜牛奶、奶皮、奶酪和奶豆腐中的单核白细胞增多症李氏菌,其检出率分别为6.7%,5.45%,5.0%,7.89%,27.03%和58.97%.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 了解泰州市某奶牛场乳房炎中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染情况及其对常用药物的敏感性。[方法] 试验选用Baird-Parker培养基分离、生化鉴定、PCR检测等方法,对采集的9份奶牛乳房炎奶样进行分离鉴定和药敏试验。[结果] 共分离到6株葡萄球菌,进一步通过凝固酶试验和16S rDNA测序等方法鉴定其中3株为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,3株金黄色葡萄球菌对青霉素G均耐药,2株对四环素耐药,2株对红霉素和苯唑西林表现为中介。[结论] 该次分离的金黄色葡萄球菌主要对青霉素G和四环素耐药,对其他常用抗生素表现为敏感。     

生鲜牛乳中三聚氰胺快速检测报告

[目的]为了快速、准确地检测出生鲜牛乳中是否含有三聚氰胺,以保证生鲜牛乳及其产品的卫生安全。[方法]采用酶联免疫法（SNAP法）检测生鲜牛乳中三聚氰胺的含量,对新疆巴音郭楞蒙古自治州辖区内的17个奶站的奶缸、运输车辆进行生鲜乳样品抽样检测,共抽样60份。f结果]对60份生鲜乳样品进行三聚氰胺含量检测,检测结果全部为阴性。[结论]对新疆巴音郭楞蒙古自治州辖区内的17个奶站的奶缸、运输车辆所抽取的60份生鲜牛乳进行了三聚氰胺含量检测,60份生鲜牛乳样品检测结果全部为阴性,检测样品60份,合格数60份,合格率为100％。     

Some Microbiological Aspects of Staphylococcal Mastitis

(1) Mannitol fermentation is a reasonably reliable method for the detection of coagulase positive staphylococci in milk. This reliability can be improved if mannitol fermentation is carried out under anaerobic conditions.

(2) Among hemolytic strains of staphylococci isolated from milk, beta hemolytic staphylococci predominate. Bovine and sheep blood agar plates give similar hemolytic patterns, but the hemolysis is more pronounced on sheep blood agar.

(3) Gelatin liquefaction cannot be relied upon for the selection of coagulase positive staphylococci in milk.

(4) Urease production is a feature of the majority of coagulase positive staphylococci isolated from milk.

(5) Tellurite Glycine agar medium is not satisfactory for the selection of coagulase positive staphylococci in milk.