免疫牛乳中乳铁蛋白的水平研究

应用ELISA法测定免疫牛乳中乳铁蛋白的水平,探讨除特异性抗体外,免疫乳治疗和预防感染性疾病的机制。结果表明,与非免疫牛比较,免疫牛的初乳中乳铁蛋白含量明显增高(P<0.05),提示特异性疫苗的接种对宿主合成乳铁蛋白等抗感染物质有促进作用。     

不同乳制品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的测定

建立高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳和婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量的方法。样品中加入超纯水溶解,经过二硫苏糖醇和碘代乙酰胺溶液反应打开二硫键并保护巯基后,加入胰蛋白酶溶液进行酶解,反应结束后用乙腈水溶液定容,离心,移取上清液待测,外标法定量。结果表明：α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白标准曲线在0～100 μg/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995;α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白在生乳中的平均加标回收率为93.5%～117.1%,相对标准偏差为1.4%～6.7%。该方法前处理操作简便,分析速度快,灵敏度高,可用于牛乳和乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定乳及乳制品中17种真菌毒素

基于高效液相色谱-串联质谱技术建立同时检测乳及乳制品中17种真菌毒素的方法。样品称量后加入定量同位素内标溶液,经20 mL乙腈-水-甲酸溶液（70∶29∶1,V/V）涡旋振荡提取,加入0.3 g氯化钠盐析,高速离心后上清液过0.22μm滤膜,用三重四极杆质谱在多反应监测模式下测定,通过同位素内标法定量。结果表明：在优化后的色谱及质谱条件下,17种真菌毒素线性范围良好,相关系数（r）均大于0.99,检出限为0.05～6.20μg/kg,定量限为0.2～20.0μg/kg,对低、中、高3个添加水平均具有良好的回收率和精密度,平均加标回收率为78.9%～119.5%,相对标准偏差为0.2%～8.4%。该方法操作便捷、稳定可靠、灵敏度高,能满足乳及乳制品中17种真菌毒素的定性定量分析要求,适用于实验室对乳及乳制品中17种真菌毒素的污染监测。     

乳与乳制品中糠氨酸含量的测定方法

糠氨酸(ε-N-2-呋喃甲基-L-赖氨酸)是牛奶在加热过程中美拉德反应的重要产物,美拉德反应的程度关系到生奶在加工过程中热处理的类型和强度,即成品液态奶品质的优劣;本方法用酸水解,固相萃取糠氨酸,反相离子对高效液相色谱紫外(280nm)检测器检测,依据糠氨酸标准物质定量。     

超高效液相色谱检测乳及乳制品中柠檬酸的含量

建立超高效液相色谱方法测定乳及乳制品中柠檬酸的含量。样品经亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀,超声提取,低温冷冻离心沉淀蛋白和脂肪,取上清液,Poroshell 120 Aq-C18(4.6 mm×100.0 mm,2.7μm)分离,以磷酸二氢铵溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,运用紫外检测器进行检测,外标法定量。结果表明：标准曲线线性良好,相关系数在0.999 9以上,平均加标回收率为95.3%～104.8%,检出限为100 mg/kg,相对标准偏差为0.16%～2.41%。该方法简便、快速、分离效果好,适用于乳及乳制品中柠檬酸的定量分析。     

乳及乳制品中乳铁蛋白定量测定法SDS-PAGE法的建立

为了有助于检测市场上乳及乳制品中的乳铁蛋白含量,本试验建立了定量测定乳及乳制品中乳铁蛋白的SDS-PAGE电泳分析法.试验采集了10种液态奶、3种乳清粉、3种干酪、4种奶粉和4种酸奶,利用SDS-PAGE法分离乳铁蛋白,并优化了分离胶的浓度、电压、上样量和染色法.SDS-PAGE法的最佳条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶电压120V,分离胶电压200V,改良的考马斯亮蓝染色,乳铁蛋白标准品的点样浓度0.1111mg/mL.点样量12μL.乳清粉及奶粉比干酪、液态奶和酸奶中的乳铁蛋白含量高,并且,液态奶、干酪和奶粉的检出限分别为2.9、29.0和29.0mg/100g,液态奶、干酪和奶粉的定量限分别为9.7、97.0和97.0mg/100g.该条件下测定乳及乳制品中乳铁蛋白含量的RSD分别为0.01%-8.70%.说明利用本文建立的SDS-PAGE电泳法简易、快速、准确,并且可以作为定量测定乳及乳制品中乳铁蛋白的方法.     

牛乳铁蛋白稳定性的研究

探讨牛乳铁蛋白在不同温度下的热稳定性，并研究其蛋白酶解稳定性性质。使牛乳铁蛋白在不同温度下处理一定时间，然后通过SDS—PAGE法检测其降解情况，并模拟胃液环境研究不同浓度胃蛋白酶对牛乳铁蛋白酶解的变化，根据电泳结果的灰度扫描计算不同时间消化后牛乳铁蛋白的残存率。结果表明，牛乳铁蛋白在一定时间内提高温度不会发生明显的降解，不同浓度的胃蛋白酶对牛乳铁蛋白的消化作用不同，牛乳铁蛋白对1μg／mL胃蛋白酶的抵抗能力最强，但是在被消化120min后牛乳铁蛋白残存率下降到1％左右。     

两段牛乳铁蛋白肽基因在乳酸乳球菌中的共表达

根据乳酸乳球菌密码子的偏嗜性,优化设计并合成牛乳铁蛋白肽的两段基因序列LFcinB和LFampin,将其与乳酸乳球菌表达载体pAMJ399分别用SalⅠ和BglⅡ双酶切后进行连接,并电转化至乳酸乳球菌MG1363中,经酶切鉴定表明获得带有两段牛乳铁蛋白肽基因的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFcinBA/MG1363。结果表明,优化表达条件,在GM17培养基中添加3.8%的β-甘油磷酸二钠可以获得表达重组蛋白的适宜pH,West-ern-blot检测可见重组蛋白大小约13 ku,表明牛乳铁蛋白肽在重组乳酸乳球菌中获得了表达。     

牛乳铁蛋白稳定性的研究

通过对牛乳铁蛋白在不同温度下处理一定的时间，研究牛乳铁蛋白热的稳定性，并模拟胃液环境研究不同胃蛋白酶浓度下，牛乳铁蛋白对胃蛋白酶消化的抵抗作用，研究其蛋白酶解稳定性。结果表明，牛乳铁蛋白在一定时间内，提高温度不会发生明显的降解，不同浓度的胃蛋白酶对牛乳铁蛋白的消化作用不同，牛乳铁蛋白对1μg／mL胃蛋白酶的抵抗能力最强。     

原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法研究

全面分析和比较了目前原料乳及乳制品中三聚氰胺的检测方法,主要包括色谱检测法(高效液相色谱法、气相质谱法、液相色谱-串联质谱法)、光谱检测法(拉曼光谱法、近红外光谱法、荧光光谱法)以及免疫检测方法。     

高效液相色谱法测定乳品中乳铁蛋白的含量

建立乳品中乳铁蛋白高效液相色谱的测定方法。采用pH值为7.0磷酸盐缓冲溶液做为提取剂,C_(18)色谱柱分离,不同浓度的乙腈-0.5 mol/L的氯化钠溶液-三氟乙酸的二元系统进行梯度洗脱。每100g奶粉(或每100mL液态奶)中乳铁蛋白添加量为5~10 mg时,回收率大于90%。定量限为0.5 mg/100g。该方法具有结果准确,操作简便,重复性好等优点,可用于乳品中乳铁蛋白的检测。     

超高效液相色谱质谱联用测定饲料、牛乳及乳制品中双氰胺

建立超高效液相色谱质谱联用法检测饲料、牛乳及乳制品中双氰胺的方法.研究适用于检测饲料、牛乳及乳制品的前处理方法,并对色谱柱进行了选择.样品经乙腈提取、C18固相萃取填料净化后,低温冷冻离心除掉杂质,含0.1％甲酸的乙腈溶液和含0.1％甲酸的10 mmol/L甲酸铵水溶液梯度洗脱,通过Acquity BEH Amide色谱柱分离,电喷雾正离子多反应监测模式进行检测.结果表明:该方法在1～1 000 μg/L范围内线性良好,相关系数r大于0.995,饲料定量限最高40 μg/kg.不同添加质量浓度的回收率为80.5％～108.4％,相对标准偏差小于7.0％.该方法具有简单方便、检测周期短,适用于饲料、牛乳及乳制品检测等特点.     

乳制品中糠氨酸和乳铁蛋白常用检测方法综述

为了推动奶业振兴,2016年国家奶业科技创新联盟发起实施了推动奶业可持续发展的专项研究项目——优质乳工程,它涵盖了创建优质乳标识制度、推动奶牛养殖技术升级,全面实施乳制品加工工艺标准化监管3个方面。其中优质乳标识制度提出了以活性酶类、活性蛋白和糠氨酸为核心的优质乳制品品质的评价方法。目前,在糠氨酸和乳铁蛋白检测中常用的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、毛细管电泳质谱联用法等。高效液相色谱法是最常用的检测方法,但前处理时间长且过程复杂,对样品纯度要求较高;液相色谱质谱联用法灵敏度高,但设备昂贵,对操作人员要求较高;毛细管电泳质谱法对生物大分子具有较好分离检测效果,但是毛细管电泳和质谱接口还存在一定缺陷,维护成本较高,检测重复性差。本文阐述了优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白的检测方法,比较了方法的优缺点,旨在为进一步开发优质乳中糠氨酸和乳铁蛋白检测新方法提供参考。     

高效液相色谱法测定乳制品中纳他霉素的不确定度评定

依据JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》的原理与方法,建立高效液相色谱法测定乳制品中纳他霉素结果不确定度评定的数学模型.对整个测量过程的不确定度来源进行分析,并对不确定度各个分量进行评估和合成,得出合成标准不确定度为0.014,扩展不确定度为0.28mg/kg,乳制品中纳他霉素测定结果的置信区间为(9.95±028)mg/kg,k=2.     

液相色谱‐串联质谱法测定乳与乳制品中激素残留

本文介绍了适用于乳与乳制品中11种激素残留的检测方法。根据乳与乳制品的不同性状,改进了现有的前处理方法,使方法更具体化,提高了检测的回收率。为乳与乳制品中11种激素残留检测提供了一种具有高灵敏度和准确度的方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定乳制品中季铵盐类化合物残留

建立牛乳、酸乳和乳粉3 种基质中超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种季铵盐类化合物残留的检测方法。用甲醇进行提取,经混合型弱阳离子交换反相吸附剂（WCX）固相萃取柱净化,2%甲酸甲醇溶液洗脱,氮吹后复溶,采用电喷雾正离子源、多反应监测模式进行检测。结果表明：牛乳、酸乳和乳粉中十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化胺和二癸基二甲基氯化铵的定量限均为10 μg/kg;季铵盐类化合物添加量为10～200 μg/kg时,回收率为81.4%～105.6%,相对标准偏差为0.97%～     

高效液相色谱法测定乳制品中三氯蔗糖的含量

建立乳制品中三氯蔗糖高效液相色谱的测定方法。样品采用乙酸铅沉淀蛋白,HLB固相萃取小柱净化,C1s色谱柱分离,流动相为15％乙腈溶液,蒸发光散射检测器检测。乳制品中三氯蔗糖添加量为7.5～70 mg/kg时,回收率94.6％～101.3％。定量检出限为7.5 mg/kg。该方法操作简便、检测准确,可用于乳制品中三氯蔗糖的检测。     

气相色谱-质谱联用技术在乳制品检测中的应用

气相色谱-质谱联用技术是一种气相色谱和质谱有效结合的分析方法,实现了两者的优势互补,大大提高了检测结果的准确性.气相色谱-质谱联用能对样品高效分离,同时还能定性、定量,在食品质量检测和安全控制方面有很重要的作用.近几年来,气相色谱-质谱联用技术广泛应用于乳制品的分析和检测中,可用于农药残留检测、食品添加剂检测、食品成分...     

高效液相色谱法检测乳制品中的VC

目的:建立乳制品中的VC液相色谱分析方法.方法:样品经偏磷酸沉淀蛋白后,滤纸过滤,以0.25％偏磷酸溶液为流动相;经C18反相色谱柱分离,用紫外检测器检测,外标法定量.结果:该方法操作简便、快速,具有良好的准确度和精密度,回收率93.6％～103.9％、相对标准偏差2.56％～4.05％、定量检出限1 mg/kg.     

高效液相色谱法测定乳与乳制品中柚皮苷

建立高效液相色谱法测定乳与乳制品中柚皮苷含量的方法。样品用甲醇提取,在284 nm波长下,流动相为体积分数0.1%醋酸水溶液-乙腈（75∶25,V/V）,C18色谱柱分离,经二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明：柚皮苷在5～500 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9;分别向乳粉、液态乳和酸乳样品中在加入柚皮苷标准品0.02、0.04、0.08 g/100 g时,加标回收率分别为96.2%～103.2%、96.3%～103.7%和99.7%～104.1%,相对标准偏差分别为1.12%～2.31%、1.25%～1.85%和1.24%～1.66%。该检测方法简便、快速、准确、重复性好,能够测定乳与乳制品中柚皮苷的含量。