钙稳态失衡在锰致体外培养鸡胚脑神经细胞凋亡中的作用

旨在探讨钙稳态失衡在锰致体外培养鸡胚脑神经细胞凋亡中的作用。以体外培养鸡胚脑神经元为研究对象,在含终浓度为0、1.5、22、.5 mmol.L-1MnCl2的DMEM培养液中培养24 h,应用流式细胞仪检测磷脂酰丝氨酸(PS)和线粒体膜电位(ΔΨm),琼脂糖凝胶电泳法(DNA Ladder)检测细胞染色质的断裂,以Fura-3/AM为探针检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),用实时定量PCR法检测细胞内CaMmRNA的表达水平。结果表明,随着MnCl2浓度的升高,ΔΨm呈降低趋势,PS膜外翻增加,细胞染色质DNA发生损伤,产生明显的梯形条带,细胞内[Ca2+]i呈升高趋势,CaMmRNA的表达水平下降。结果提示,过量锰通过抑制CaM活性,引起神经元内[Ca2+]i升高,膜通透性发生改变,ΔΨm降低,从而导致鸡胚脑神经元发生凋亡。     

钙稳态失衡在镉诱导大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中的作用

用不同浓度醋酸镉（0、5、10、20μmol／L）以及细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM（10μmol／L）单独或联合作用于大鼠大脑皮质神经细胞12h,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋];、活性氧（ROS）水平以及线粒体膜电位（△ψm）。结果显示,与对照组相比,各镉染毒组细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋]i和ROS水平显著或极显著升高（P〈0．05或P〈0．01）,△ψm显著或极显著降低（P〈0．05或P〈0O．01）。BAPTA-AM联合组与相应镉染毒组相比,细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋]i和ROS水平降低,△ψm升高,部分组间差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明,镉可诱导大脑皮质神经细胞凋亡,细胞内钙稳态失衡在镉诱导大脑皮质神经细胞凋亡中起着重要作用,凋亡机理可能与细胞内钙超栽引起ROS水平升高和△ψm下降有关。     

镉对体外培养大鼠大脑皮质神经元钙稳态的影响

选用原代培养大鼠大脑皮质神经元为模型,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元.用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经元12h,利用流式细胞仪检测细胞内[Ca2-]i,ATPase酶试剂盒测定Na-K+ ATPase和Ca2-Mg2--ATPase活性的变化,荧光定量PCR法测定钙调蛋白(CaM) mRNA转录水平.结果表明,免疫组化染色证实培养细胞呈现NSE阳性染色,证明是神经元.与对照组相比,各镉染毒组细胞内[Ca2+]i显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Na--K--ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组CaM mRNA转录水平极显著降低(P＜0.01).说明镉可能通过影响CaM的转录水平与维持钙稳态相关的酶(Na+-K-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤.     

钙稳态失衡在氯化镧诱粕CC-MSB1细胞凋亡中的作用

为研究钙稳态失衡在LaCl3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用,将MDCC-MSB1细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,加入终浓度为0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5和4．0mmol／L的LaCl3,继续培养24h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,DNA Ladder法和TUNEL法检测细胞凋亡,以Fura-2为荧光探针检测细胞内[Ca^2＋]i的变化。在LaCl3浓度为0．5-4．0mmol/L范围内,细胞的增殖抑制率增加,细胞凋亡数量和细胞内[Ca^2＋]i呈升高趋势,并呈剂量一效应关系。结l果表明,LaCl3能抑制MDCC—MSB1细胞的增殖,并可能通过改变[Ca^2＋]i而诱导其发生凋亡。     

MCU在低氧诱导肉鸡心肌细胞线粒体损伤中的作用

旨在探讨线粒体钙单向转运体（mitochondrial calcium uniporter,MCU）介导线粒体Ca²⁺转运是否参与低氧诱导的肉鸡心肌细胞线粒体损伤。试验通过分离白羽肉鸡鸡胚原代心肌细胞,在低氧条件下（3% O₂,5% CO₂,92% N₂）培养24、48、72 h,同时使用RU360抑制MCU的表达并在低氧条件下处理72 h后,使用流式细胞术检测细胞内Ca²⁺浓度、线粒体Ca²⁺浓度、线粒体活性氧水平和线粒体膜电位,检测MCU及其调节因子的mRNA和蛋白表达。结果显示,通过差速贴壁方法培养的心肌细胞纯度可达90%以上;低氧培养24 h,诱导心肌细胞MCU、MICU1 mRNA表达增加（P<0.05）,胞浆和线粒体内Ca²⁺浓度显著上升（P<0.05）,线粒体膜电位增加（P<0.05）;低氧培养48 h,诱导MCUR1和MICU1 mRNA表达减少（P<0.05）,细胞Ca²⁺浓度上升（P<0.05）;低氧培养72 h,诱导MCU mRNA表达增加（P<0.01）,细胞和线粒体内Ca²⁺增加（P<0.01）,线粒体膜电位下降（P<0.01）,活性氧增加（P<0.01）。低氧处理72 h后,与低氧组相比,RU360预处理组细胞和线粒体内Ca²⁺减少,线粒体膜电位上升,活性氧生成减少（P<0.01）,MCU mRNA表达减少（P<0.01）。结果表明：低氧诱导MCU上调导致线粒体钙超载,促使线粒体功能降低并发生损伤,进而心肌细胞发生损伤;抑制MCU表达可以减轻低氧诱导的心肌细胞线粒体钙超载,保护线粒体。     

钙稳态失衡在氯化镧诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用

为研究钙稳态失衡在LaCl3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用,将MDCC-MSB1细胞常规培养于RPMI-1640培养液中,加入终浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0mmol/L的LaCl3,继续培养24h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,DNA Ladder法和TUNEL法检测细胞凋亡,以Fura-2为荧光探针检测细胞内[Ca2+]i的变化.在LaCl3浓度为0.5～4.0 mmol/L范围内,细胞的增殖抑制率增加,细胞凋亡数量和细胞内[Ca2+]i呈升高趋势,并呈剂量-效应关系.结果表明,LaCl3能抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,并可能通过改变[Ca2+]i而诱导其发生凋亡.     

钙稳态失衡在氯化镧诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用

为探讨钙稳态失衡在LsCl3诱导MDCC-MSB1细胞凋亡中的作用,MDCC-MSB1细胞常规培养于RPMI1640培养液中,加入终浓度为0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5和4 mmol·L-1的LaCl3,继续培养24 h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,DNA Ladder法和TUNEL法检测细胞凋亡,以Fura-2为荧光探针检测细胞内[Ca2+]i的变化.结果表明,在LaCl3浓度为0.5～4 mmol·L-1时,细胞的增殖抑制率增加,细胞凋亡数量和细胞内[Ca2+]i呈升高趋势,并呈剂量-效应关系.这表明LaCl3能抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,并可能通过改变[Ca2+]i而诱导其发生凋亡.     

线粒体损伤在阿维菌素致体外培养神经细胞凋亡中的作用

通过体外培养王鸽脑神经细胞，并按终浓度0、2．5、5和10μg／L阿维菌素（AVM）染毒，培养24h时，经透射电镜观察神经细胞超微结构，DNA断裂评价细胞凋亡，MTT法测定线粒体活性，酶标仪检测Caspase-3、Caspase-9活性，流式细胞术测定线粒体跨膜电位（△ψm），探讨线粒体损伤在AVM致体外培养神经细胞凋亡中的作用。结果显示，AVM可明显抑制神经细胞线粒体的活性，引起△ψm下降，Caspase-3和Caspase-9活性升高，神经细胞发生凋亡，存在明显的剂量效应关系。证实，线粒体损伤是AVM致体外培养神经细胞凋亡的机理之一。     

哺乳动物精子线粒体研究进展

哺乳动物精子线粒体是维持精子活力的关键细胞器,对精子超激活运动、获能、顶体反应及受精等过程起到重要的调节作用。哺乳动物精子线粒体特有的形态特征与特异性酶异构体使其具有独特动力学和调节特性。精子线粒体中发生的氧化磷酸化过程是维持精子运动的重要途径,该过程产生的活性氧对精子功能的维持具有重要作用,但过量可能导致精子损伤,加速精子凋亡。哺乳动物精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻和相关半胱氨酸蛋白酶激活级联反应引起细胞凋亡。区别于体细胞线粒体,精子线粒体钙信号可能并未参与精子固有的凋亡途径,作为衡量线粒体功能的敏感指标,其对线粒体膜电位和耗氧量的检测研究至关重要。哺乳动物精子线粒体具有自身的遗传系统,线粒体基因拷贝数可能作为无创衡量精子质量和受精能力的标记。作者重点阐述了哺乳动物精子线粒体的结构、线粒体鞘的形成及其生物功能,包括发生在线粒体中的氧化磷酸化过程、活性氧对精子的利与弊、线粒体参与钙稳态与细胞凋亡过程;介绍了线粒体膜电位和耗氧量的检测,简述了线粒体基因组的研究进展,为进一步探讨线粒体所涉及的精子功能机制奠定基础。     

NO自由基在镉致育成鸡卵巢损伤中的作用

近年来,随着镉消费的增加和消费形式的改变,全国每年由工业废弃物排放到环境中的镉总量约680余吨,镉污染区覆盖畜禽约10亿头(只)、人口近1亿[1].镉对生殖系统的毒性较为敏感,已受到国内外的普遍关注,并进行了一系列的动物实验和人群流行病学研究[2-3].但有关镉对禽类生殖功能,尤其是对雌性生殖系统的影响,目前尚未见报道,本试验以健康育成鸡为实验动物,通过观察卵巢形态结构变化,检测血清和卵巢中NO含量及NOS活性,探讨镉对禽类雌性生殖毒理机制,为防治禽类镉中毒提供试验依据.     

铝暴露对鸡大脑组织钙稳态的影响

以1周龄海蓝白蛋鸡为实验对象,采用连续腹腔注射的方法建立铝中毒模型,研究铝对鸡大脑组织钙稳态的影响.实验设对照、低、中、高4个剂量组,暴露剂量分别为0、18.31、27.47、36.62mg/(kg·d)(Al3 ),染铝60d后,用原子吸收分光光度法检测鸡大脑组织中铝的含量,以Fura-2/AM作为细胞内游离钙离子荧光指示剂,检测鸡大脑神经细胞中游离钙离子浓度([Ca2 ]i),采用半定量RT-PCR法检测鸡大脑组织中钙调蛋白(CaM)mRNA的表达.结果表明,各染铝组鸡大脑组织铝含量、神经细胞[Ca2 ]i显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),CaMmRNA表达水平显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);且呈剂量-效应关系.提示铝暴露可致鸡大脑神经细胞内钙稳态失调.     

铝对体外培养鸡脾淋巴细胞钙稳态的影响

本研究通过对体外培养的鸡脾淋巴细胞进行染铝处理,检测细胞内游离钙离子浓度和CaM mRNA表达水平,以探讨铝对淋巴细胞钙稳态的影响,为探讨铝的免疫毒性机制提供基础资料.     

钙离子超载在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用

拟探讨Ca2+超载在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用。采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉、醋酸镉与Bapta-AM共同处理肝细胞。用MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和凋亡,流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度、ROS生成和ΔΨm变化。结果表明,随着镉剂量的增加和作用时间的延长,细胞变形,坏死细胞和凋亡细胞增多,镉可极显著提高细胞内Ca2+浓度和ROS生成量(P<0.01),极显著降低线粒体膜电位(P<0.01),Bapta-AM可显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低镉的毒性。研究结果提示Ca2+超载在镉致肝细胞凋亡中发挥重要作用。     

促红细胞生成素在铅镉联合胁迫致雏鸡贫血中的作用

为研究促红细胞生成素(EPO)在铅镉联合胁迫致雏鸡贫血中的作用,选用60只7日龄公雏鸡,平均分为对照组、铅组、镉组和铅镉组,每日经口灌服染毒,分别于第1、3、7天染毒后,检测雏鸡血液学指标和网织红细胞数量,并进行骨髓象的观察及红细胞膜ATP酶活性、红细胞渗透脆性和血清EPO含量的检测。结果表明铅镉单独染毒使雏鸡发生贫血,网织红细胞数量先增加后降低,骨髓象增生先活跃后受抑制,红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性降低,红细胞渗透脆性增加,血清EPO含量先增加后降低,铅镉联合染毒也表现出上述变化,且较单独染毒组变化明显(P<0.05或P<0.01)。本研究证实铅、镉单独及联合染毒均可引起雏鸡发生贫血,贫血类型主要为再生障碍性和溶血性贫血,且铅与镉存在显著的协同效应;EPO参与了铅镉联合胁迫致雏鸡的贫血作用。     

硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制鸡的颉颃作用

为探究硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制的颉颃作用,将336只11日龄非免疫健康罗曼雏鸡随机均分为7组：空白对照组（BC）、免疫对照组（VC）、环磷酰胺对照组（Cy）、sGPS3、sGPS5、sGPS6和药物对照组（APS）,每组6个重复,每个重复8只鸡。BC组和VC组注射0.5 mL生理盐水,其余组均肌肉注射8 mg/mL环磷酰胺0.5 mL,每天1次,连续3 d;14日龄时,除BC组外,其余组均用新城疫疫苗免疫,同时3个硒大蒜化多糖组分别注射0.5 mL浓度为1 mg/mL的sGPS₃、sGPS₅、sGPS₆,APS组肌肉注射黄芪多糖注射液0.5 mL,Cy组、VC组和BC组注射生理盐水0.5 mL,每天1次,连续3 d,28日龄二免。分别于首免后的第7、14、21、28天,每组随机抽取6只罗曼鸡翼静脉采血,分离血清,β-微量法检测血清ND-HI抗体效价、ELISA法检测血清γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）含量。称量体重后采集胸腺、脾脏和法氏囊组织并称重,计算免疫器官指数。结果显示,各给药组的血清ND-HI抗体效价、血清IFN-γ和IL-2含量、法氏囊指数均显著高于Cy组（P<0.05）;sGPS₆组血清抗体效价、IFN-γ含量在28 d,血清IL-2含量在21、28 d均显著高于其余各组（P<0.05）;在免疫后21、28 d,4个给药组中sGPS₆组体重、法氏囊指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）;在免疫后28 d,4个给药组中sGPS₆组胸腺指数、脾脏指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）。结果表明,硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致的免疫抑制具有颉颃作用,其中sGPS₆组的活性最高,可作为新型免疫抑制颉颃剂的候选药。     

镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法，检测了10／μmol／L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况，结果表明：10μmol／L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA，并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。     

镉致细胞凋亡的分子机制研究进展

镉是一种公认的对人和动物健康有害的金属元素,可诱导机体多种组织细胞发生凋亡。镉致细胞凋亡的信号转导通路主要包括线粒体通路和死亡受体通路,作者主要从这两条途径对镉诱导细胞凋亡的分子机制进行综述。