黑龙江省南瓜疫病菌毒素的研究

辣椒疫霉(Phytophthora capsici)是黑龙江省南瓜疫病的病原菌，其在培养液中培养时可分泌毒素，该毒素能引起南瓜叶片产生水渍状褐腐斑，及幼苗的萎蔫，类似病原茵侵染后产生的症状。Plich’s培养液有利于P．capsici的生长和产毒，而胡萝卜汁培养液只是有利于其生长，不利于产毒。用稀释不同浓度的毒素液处理南瓜幼苗，其叶片中POD活性及MDA含量呈升高后又下降的趋势，但在整个处理时期内都比对照(蒸馏水)的含量高。这与用辣椒疫霉孢子悬浮液(5OOO个孢子／ml(毫升))处理的幼苗表现一致。这说明辣椒疫霉所分泌的毒素可能在其对南瓜的致病过程中起着重要的作用。     

西瓜炭疽病菌产毒条件优化及其生物活性测定

针对西瓜炭疽病菌进行了产毒条件优化、粗毒素的生物活性及其理化性质测定的研究。结果表明：不同的培养条件
对病原菌粗毒素活性的影响不同,pH 值为6 的Richard 培养液产生的粗毒素的生物活性最强,培养温度25 ℃、黑暗条件下
持续振荡培养20 d 为最佳产毒条件。粗毒素接种西瓜茎蔓可产生与病菌作用相同的发病症状,对种子胚根生长及种子萌发
有抑制作用,对幼苗有致萎作用,说明该粗毒素是西瓜炭疽病菌侵染过程中的主要致病因子。以病菌粗毒素接种10 种供试
植物,其中甜瓜、西葫芦及草莓发病症状明显,而番茄、茄子及辣椒均未见发病症状。     

紫斑病菌粗毒素对大蒜幼苗防御酶活性和叶片解剖结构的影响

以抗病品种G087和感病品种G025为试材,研究了大蒜紫斑病菌粗毒素对大蒜幼苗叶片超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性和丙二醛（MDA）含量及叶片解剖结构的影响。结果表明：在大蒜紫斑病菌粗毒素处理后120 h内,抗病品种和感病品种叶片SOD活性呈现一致的变化趋势,均在96 h达到峰值,但抗病品种SOD活性始终高于感病品种。随着大蒜紫斑病菌粗毒素处理时间的延长,感病品种叶片POD和PAL活性均呈先持续升高后稍下降的趋势,均有1个峰值|而抗病品种叶片POD和PAL活性均出现2个峰值,POD活性的2个峰值分别出现在48 h和96 h,PAL活性的2个峰值分别出现48 h和120 h|抗病品种酶活性的最大峰值高于感病品种。在大蒜紫斑病菌粗毒素处理后的大部分时间内,抗病品种叶片MDA含量低于感病品种。抗病品种叶肉组织结构比感病品种紧密|经大蒜紫斑病菌粗毒素处理后,两个品种叶片栅栏组织及海绵组织的密度都比处理前增加,抗病品种叶肉组织结构比感病品种更加紧密。     

杧果细菌性角斑病菌粗毒素的生物活性、理化特性及致病作用

【目的】探讨杧果细菌性角斑病菌粗毒素的生物活性、理化特性及其在致病过程中的作用,以期为明确该病菌的致病机制及病害防控提供有效依据。【方法】以‘台农一号’杧果叶片为试验材料,利用离体叶片针刮法对其粗毒素生物活性进行了研究,通过测定杧果叶片防御酶活性、可溶性蛋白含量、总糖含量和叶绿素含量的变化分析其对杧果的致病生理机制;同时以不同培养液、培养时间、培养温度及培养液p H为条件,对该菌产毒条件进行了优化。【结果】在Watanabe培养滤液中得到淡黄色粗毒素,是一类具有热稳定性的非蛋白类物质。毒素对杧果叶片有浸解作用,随着浓度的上升,对杧果叶片的损伤程度不断加重,形成的病斑与病原菌症状一致。生理生化研究发现粗毒素侵染杧果叶片后,能激活杧果体内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。POD、PPO、CAT与PAL分别在接种病菌48、72、36 h后达到顶峰,酶活性分别是965.33、8 456、1 341.13和4.02×104U·g~(-1)·min~(-1),是健康叶片的1.35、2.20、1.08和4.19倍。可溶性蛋白含量、总糖含量随着处理时间的延长而显著升高,叶绿素含量呈现相反的变化趋势,随着处理时间的延长不断降低。毒素通过摇瓶震荡培养,优化出病菌的最佳产毒条件是:Watanabe培养液(p H 7~8),24℃培养120 h。【结论】因该粗毒素对杧果叶片产生明显的浸解作用,表明其能改变细胞膜的通透性,导致杧果叶片组织电解质的渗漏,对叶片细胞膜具有损伤作用,最终导致病害的发生。由此推断,毒素可能属于非寄主专化性毒素(NHST),同时可能是杧果细菌性角斑病菌的致病因子之一。     

香蕉品种对枯萎病菌感病性与对病菌毒素敏感性之间的相关性

为明确香蕉品种对香蕉枯萎病菌感病性与对病菌粗毒素敏感性之间的相关性,采用根部病菌孢子接种测定了36份香蕉品种苗对香蕉枯萎病菌4号生理小种的感病性,以及采用植株根部和叶片毒素处理测定了5份香蕉品种苗对病菌粗毒素的敏感性。结果表明,天宝角蕉(AAA)、柴蕉(AAA)、广粉1号(AAB)和贡蕉(AA)表现抗病,哥斯达黎加蕉(AAA)和抗枯5号(AAA)表现中抗;感病品种对毒素的敏感性高于抗病品种。通过香蕉不同品种的病情指数、萎蔫指数和叶片损伤面积的差别分析,发现香蕉苗期对枯萎病菌感病性与对病菌粗毒素敏感性之间存在正相关性,60d龄期的假植苗病情指数与其叶片损伤面积之间存在显著的正相关性。因而叶片毒素处理法测量香蕉假植苗中部叶片损伤面积可作为一种快速区别香蕉抗病能力的有效方法。     

苦瓜枯萎病菌的产毒条件优化及发酵滤液特性

为明确苦瓜枯萎病菌毒素产生的最佳发酵条件以及发酵滤液的特征特性,采用浸根法接种,研究病菌的产毒培养条件和发酵滤液的生物活性、稳定性等基本性质.结果表明,苦瓜枯萎病菌产毒的最适液体培养基、振荡培养时间、装液量分别为Czapek培养液、14 d、100 mL(250 mL三角瓶);病菌毒素发酵滤液对紫外光(36μW·cm-...     

链格孢菌粗毒素对月季的伤害及对月季长管蚜影响

研究了4个链格孢菌菌株产生的毒素对月季幼苗伤害作用及对月季长管蚜的影响。结果表明:0845菌株产生毒素伤害活性最强,0309次之,0203伤害活性最小;毒素原液处理幼苗后对月季长管蚜生长和繁殖有抑制作用,7484菌株发酵液处理月季幼苗对蚜虫的抑制活性最高。0393次之,0203最差;受毒素原液处理后的月季材料对蚜虫引诱活性降低。0393处理对蚜虫选择寄主的抑制活性最弱,0845,0203,7484菌株毒素粗提液处理对蚜虫寄主选择抑制活性明显较大,选择毒素处理植物材料的比例明显低于选择健康叶片的比例。     

美洲南瓜枯萎病菌分离鉴定及其生物学特性

通过采用病原菌形态学观察、ITS分子鉴定、病原菌生物学特性测定,明确甘肃省武威地区美洲南瓜枯萎病的病原菌及其生物学特性。结果表明,引起甘肃省武威地区美洲南瓜枯萎病的病原为尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)。该病原菌在25℃、12 h光暗交替,pH为8,以淀粉为碳源时生长最好。以硝酸钠和尿素为氮源时其生长速率最快,以牛肉浸膏为氮源时最有利于产孢。美洲南瓜枯萎病的病原菌及生物学特性的明确,为后续的病害防治等方面提供了理论基础。     

大蒜白腐病菌产毒素培养条件的优化

采用大蒜幼苗根系生长抑制率生物检测法,研究了该病菌在不同培养基、培养时间、培养温度、培养液pH、光照和振荡培养等条件下粗毒素的活性和产量,结果表明：大蒜白腐病病菌的最佳产毒培养基为Fries液体培养基,培养温度为18.0 ℃,培养基pH值为5.0,在黑暗条件下连续振荡培养6 d时产生的粗毒素的毒性最强。     

哈茨木霉β-葡聚糖酶诱导、纯化及对黄瓜幼苗的促生防病作用

在实验室条件下分别以β-葡聚糖、麦麸和黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)细胞壁作为唯一碳源诱导哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)Th-30发酵产生β-葡聚糖酶,采用硫酸铵盐析和琼脂糖凝胶色谱柱层析法对β-葡聚糖酶进行分离纯化,以津研4号黄瓜为试验材料,探究β-葡聚糖酶对黄瓜幼苗抗性生理指标、形态指标的影响及黄瓜常见土传病害的防控作用。结果表明：不同诱导条件下木霉Th-30发酵产β-葡聚糖酶活性差异显著,经β-葡聚糖诱导发酵的粗酶液酶活性最高,发酵72 h时达75.63 U·mL^-1;纯化的β-葡聚糖酶比活力为783.56 U·mg^-1,是粗酶液的45.32倍;5倍液和10倍液β-葡聚糖酶可显著提高黄瓜幼苗的根系活力、游离脯氨酸含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性以及根冠比和壮苗指数;β-葡聚糖酶10倍液处理对黄瓜立枯病、黄瓜枯萎病、黄瓜疫病、黄瓜猝倒病、黄瓜菌核病的防效为50.36%～80.63%。     

植物提取物对瓜类枯萎病菌的抑菌活性

以黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌和甜瓜枯萎病菌为供试病原菌，对27种植物的乙醇提取物进行了离体抑菌活性筛选，并采用盆栽活体试验测定了狼毒大戟、藿香、肉桂、黄檗等提取物对黄瓜枯萎病菌的生物活性。离体抑菌活性测定结果表明：27种供试植物提取物对3种病原菌的菌丝生长均具有一定的抑制作用，其中狼毒大戟、白屈菜、藿香、肉桂、黄檗、龙葵等提取物对3种病原菌的抑制率均可达70%以上。盆栽活体试验结果表明：狼毒大戟提取物对黄瓜幼苗抗枯萎病菌的预防效果和治疗效果均较好，分别达70.54%和57.89%|肉桂提取物对黄瓜幼苗抗枯萎病菌的预防效果、诱导抗病效果、治疗效果均可达50%以上|藿香提取物的诱导抗病效果最高达75.60%，而预防效果和治疗效果不明显|黄檗提取物的预防效果可高达83.33%，诱导抗病效果亦达55.55%，但治疗效果不明显。     

韭菜水提液对甘蓝枯萎病菌抑制作用初探

采用离体抑菌测定和盆栽测定相结合的方法,研究了韭菜水提液对甘蓝枯萎病菌1号生理小种的抑制作用和盆栽防治效果。结果表明:韭菜水提液对甘蓝枯萎病菌的菌丝生长速率以及孢子萌发率具有明显的抑制作用,当韭菜水提液浓度为0.75g·m L~(-1)时,菌丝生长抑制率达到100%;当韭菜水提液浓度为0.25g·mL~(-1),处理20h后观察,孢子萌发抑制率达95.47%;在盆栽试验中,基质中加入韭菜水提液浓度为0.086g·g~(-1)接种15d后,甘蓝枯萎病的防治效率可达40%,甘蓝死亡率下降27%。     

不同浓度海藻生根剂对黄瓜幼苗生长及根系形态的影响

以黄瓜品种‘鲁黄瓜3号’为试验材料,在穴盘育苗条件下,研究了灌根施用600、300、100倍液海藻生根剂对黄瓜幼苗生长的影响,以筛选黄瓜壮苗培养的最适施用浓度。结果表明:随着海藻生根剂稀释倍数的降低,根系生长旺盛。在施用300倍液时,幼苗壮苗指数达到峰值。继续降低稀释倍数,幼苗根系生长量和根尖数目增加则受抑制,壮苗指数显著下降。300倍液处理的幼苗根系吸收面积、根尖数显著高于清水对照,分别高出36.58%、133.39%,幼苗株高、茎粗及叶面积均增大,叶片叶绿素含量显著高于对照。灌根施用300倍液海藻生根剂,可同时促进黄瓜幼苗地上和根系的生长,是培育黄瓜穴盘壮苗的最佳浓度。     

‘改良蒜’抗紫斑病变异株系的离体筛选

以‘改良蒜’品种带蒜瓣基部的茎盘为外植体,在含有不同浓度大蒜紫斑病菌粗毒素的MS培养基上采取分步筛选法筛选大蒜抗病变异系,并诱导形成小鳞茎;对小鳞茎繁殖的幼苗叶面喷施病菌粗毒素进行抗病性鉴定。结果表明,大蒜紫斑病菌粗毒素对‘改良蒜’愈伤组织的诱导有显著抑制作用,粗毒素浓度越高,抑制作用越强,抗病愈伤组织诱导的适宜病菌粗毒素浓度为30%;在粗毒素浓度10%、20%和30%的培养基上依次分步培养筛选获得了抗紫斑病变异系。粗毒素接种抗性鉴定表明,抗性系幼苗的抗病性比对照增强。     

接种Forl对番茄幼苗生长、根系保护性酶及防御相关基因表达的影响

以番茄品种‘Moneymaker’幼苗为试材，采用人工接种番茄颈腐根腐病病原菌的方法，研究了接种该病原菌后番茄幼苗形态、生理及相关基因的相对表达量，病原菌对番茄幼苗生长、根系保护性酶活性及防御相关基因表达的影响，以期为该病防治提供参考依据。结果表明：与对照相比，接种12 d后，番茄幼苗主要生长指标显著低于对照，病情指数高达62.3%。随着接种天数增加，接种和对照处理幼苗根系活力均呈上升趋势，但接种处理增幅较为缓慢，且接种后6 d和12 d均显著低于对照；而超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均显著高于对照。另外，随着接种天数增加，接种处理幼苗根系中乙烯信号标记基因ETR4与Pti4相对表达量均显著升高；水杨酸合成关键基因ICS的相对表达量显著增加，而PAL的相对表达变化幅度较小；防御信号基因PR1a的响应较为强烈，相对表达量最高升至200倍左右；而蛋白酶抑制剂基因PI-1的相对表达量变化较小。     

叶面喷施沼液肥对高温胁迫下辣椒幼苗生长及生理特性的影响

以朝天椒‘辣椒王’为试验材料,研究了叶面喷施沼液肥对高温胁迫下辣椒幼苗生长及生理特性的影响。结果表明,在胁迫8 d,叶面喷施沼液肥20倍液处理的生长指标和生理指标均最好,其中幼苗鲜质量、干质量分别比对照高32.13%和40.74%,叶绿素a含量、叶绿素b含量、根系活力分别高27.38%、49.31%、18.4%,叶片净光合速率和POD、CAT酶活性分别高75.8%、46.2%和63.1%,叶片MDA含量和O~-_2产生速率分别比对照低18.78%和16.32%,热害指数比对照低33.3%。综合以上指标,喷施沼液肥20倍液对缓解辣椒高温伤害的效果最好。     

香蕉枯萎病菌4号生理小种毒素解毒剂的筛选及对香蕉防御酶活性的影响

从15种候选解毒剂中筛选出对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)4号生理小种(简称Foc 4)毒素解毒效果最好的2种解毒剂——硫酸锌和井冈霉素。在2 g.L-1浓度下,硫酸锌和井冈霉素对Foc 4毒素的钝化率分别为76.67%和71.33%,而在5 g.L-1浓度下,它们的钝化率分别为90.33%和80.00%。探索了毒素—硫酸锌和毒素—井冈霉素处理体系在2 g.L-1和5 g.L-1浓度下对香蕉苗5种防御酶(PAL、POD、PPO、SOD和CAT)活性的影响。结果表明,在这个处理体系中,香蕉苗PAL和PPO酶活高峰出现的时间(PAL 36 h、PPO 36 h和48 h)较毒素单独处理(PAL 48 h、PPO 60 h)早;SOD和CAT酶活高峰出现的时间与对照基本一致;而POD酶活高峰出现的时间较复杂。总体上,这个处理体系的酶活高于毒素单独处理和无菌水对照。"毒素—硫酸锌处理体系"在PAL、SOD整体酶活上高于"毒素—井冈霉素处理体系",而后者在其他3种酶活上普遍高于前者。     

籽用美洲南瓜白粉病病原菌生理小种鉴定及抗性遗传分析

利用形态学和分子生物学的方法对内蒙古不同地区籽用美洲南瓜白粉病病原菌种类进行鉴定,并采用国际通用的13个甜瓜生理小种鉴别寄主和鉴别标准体系,对不同地区白粉病菌的生理小种进行鉴定。对20份籽用美洲南瓜种质的抗病性进行鉴定,并采用苗期人工接种的方法对籽用美洲南瓜六世代群体进行抗性统计分析,开展白粉病抗性遗传研究。形态学鉴定结果表明,籽用美洲南瓜白粉病病菌具有成串的椭圆形分生孢子,具有纤维状体。系统发育树鉴定结果表明该白粉病菌ITS序列与GenBank中已公布的瓜类单囊壳白粉菌(Podosphaera xanthii)的序列聚在一个分枝,确定内蒙古地区白粉病菌为单囊壳白粉菌P.xanthii。初步确定内蒙古地区籽用美洲南瓜白粉病存在4个生理小种,分别为小种4、小种2F和小种1,还有1个未知的小种。种质抗性鉴定结果表明,20份籽用美洲南瓜种质中有7份抗病种质,4份中抗种质,1份高抗种质。内蒙古地区籽用美洲南瓜抗白粉病基因由1对主效隐性单基因控制。     

籽用美洲南瓜白粉病病原菌生理小种鉴定及抗性遗传分析

利用形态学和分子生物学的方法对内蒙古不同地区籽用美洲南瓜白粉病病原菌种类进行鉴定，并采用国际通用的13 个甜瓜生理小种鉴别寄主和鉴别标准体系，对不同地区白粉病菌的生理小种进行鉴定。对20 份籽用美洲南瓜种质的抗病性进行鉴定，并采用苗期人工接种的方法对籽用美洲南瓜六世代群体进行抗性统计分析，开展白粉病抗性遗传研究。形态学鉴定结果表明，籽用美洲南瓜白粉病病菌具有成串的椭圆形分生孢子，具有纤维状体。系统发育树鉴定结果表明该白粉病菌ITS 序列与GenBank 中已公布的瓜类单囊壳白粉菌（Podosphaera xanthii）的序列聚在一个分枝，确定内蒙古地区白粉病菌为单囊壳白粉菌P. xanthii。初步确定内蒙古地区籽用美洲南瓜白粉病存在4 个生理小种，分别为小种4、小种2F 和小种1，还有1 个未知的小种。种质抗性鉴定结果表明，20 份籽用美洲南瓜种质中有7 份抗病种质，4 份中抗种质，1 份高抗种质。内蒙古地区籽用美洲南瓜抗白粉病基因由1 对主效隐性单基因控制。     

利用甲基磺酸乙酯和枯萎病菌毒素诱变筛选香蕉抗毒素突变体

 以化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）和香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）4号生理小种的粗毒素为诱变剂,以香蕉愈伤组织和分化芽为筛选材料,通过多步筛选法,优化了筛选体系,并筛选出了抗香蕉枯萎病菌毒素的突变体。以体积百分比浓度为0.5%的EMS 分别处理香蕉愈伤组织和分化芽40 min,获得“半致死剂量”效应,对存活的香蕉愈伤组织和分化芽在依次递增的粗毒素浓度（5.0%→10.0%→12.5%）胁迫下进行定向筛选,获得了抗香蕉枯萎病菌毒素的愈伤组织块和分化芽,从抗病分化芽突变体获得了再生植株。对再生植株抗毒素的性能进行鉴定,其病情指数（24.72）显著低于对照植株（96.11）,抗毒素效果达到74.28%。