渗透胁迫下烟草根系基因的表达谱分析

 【目的】了解干旱胁迫下烟草的抗旱机制。【方法】采用拟南芥基因芯片检测PEG渗透胁迫（-1.2 MPa）48 h后烟草根系中基因表达的变化。【结果】在31 182个基因微矩阵点中,有效差异表达（ratio 值≥2或≤0.5）的基因有126个,其中上调79个,下调47个。上调基因主要是根系中一些受渗透胁迫诱导参与信号转导的激素（主要是ABA）响应蛋白基因、钙信号响应蛋白基因及蛋白激酶基因。而下调表达的基因则主要是一些与烟株生长发育相关的赤霉素响应蛋白类基因和根系中参与蛋白质降解的泛素连接酶类基因。【结论】通过分析这些特异表达基因,揭示出烟草植株体在非生物环境胁迫条件下的一些响应机制,为阐明烟草抗旱的分子生物学机理提供了有价值的信息。     

基因芯片在食品研究及检测领域中的应用

基因芯片技术是一种多学科交叉融合产生的高新技术,该技术具有高效、大信息量和高特异性的特点,其在食品研究及检测领域中的运用越来越广泛。对基因芯片的概念原理及其主要内容作了介绍,并详述了基因芯片技术在食品领域中的应用现状和前景。     

分子生物学技术在百合病毒病害检测中的应用

对百合病毒的分子生物学检测技术作了综合评述,主要有RT-PCR检测技术、核酸杂交技术、基因芯片技术等。目前,常用的分子生物学技术以RT-PCR为主,而基因芯片检测技术是近几年发展起来高效的检测手段并在植物病毒检测上有广泛的应用前景。     

基因芯片技术在口蹄疫检测中的应用

口蹄疫属于小核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属,包括7个主要的血清型,由4种结构蛋白和7种非结构蛋白等构成基因组。检测口蹄疫的方法很多,其中基因芯片技术相对与其它传统检测技术具有更多的优点,它将会成为后基因时代最重要的基因功能分析技术。基因芯片原理是利用核苷酸序列杂交和信号检测进行定性与定量分析。基因芯片技术在口蹄疫诊断上的应用主要是cDNA芯片技术,寡核苷酸芯片技术和多种病毒、多种基因的共分析,是一种快速、高效、高通量和自动化的核酸分析手段。     

基因芯片技术及其在病原微生物研究中的应用

概述了基因芯片技术应用研究现状,包括芯片的制备、待检样品的标记、杂交以及杂交结果的检测和分析;基因芯片技术在病毒、细菌检测、基因组分析和药物筛选中的应用。     

基因芯片在微生物学领域的应用进展

基因芯片是研究生物大分子功能的新技术,具有高通量、微型化、连续化、自动化、快速和准确等特点.作为一种高通量的基因检测方法,该技术在微生物检测和鉴定方面的应用越来越多,具有巨大的应用潜力,主要对基因芯片技术的基本原理以及在微生物学领域的应用进展作一综述.     

烟草病毒的检测方法

烟草病毒病是全世界烟草栽培区发生普遍,危害严重的一大类病害。本文介绍了检测烟草病毒的主要方法有指示植物法、电镜诊断法、血清学检测法等。通过上述方法加强对烟草病毒病的防治。     

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的基因芯片检测技术研究

本研究建立了检测致病菌的基因芯片检测方法,通过16SrRNA基因序列设计了通用引物和特异性探针,并对下游引物进行荧光标记,通过PCR扩增、基因芯片杂交和信号扫读,实现在相同条件下能够同时检测并区分沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的目的。     

2004～2005年云南烟草农业检测项目的统计分析

对2004~2005年云南省烟草科学研究所分析测试中心的数据资料,从样品检测项目、项目分布、送检样品单位和送检目的等进行了统计分析,结果发现检测的样品主要是植烟土壤和烟叶;检测的植烟土壤项目27项,其中核心检测项目为速效钾、速效磷、碱解氮、有机质、pH值、全氮、全磷、全钾、水溶性氯离子共9项;检测的烟叶项目38项,其中核心检测项目为总氮、烟碱、总糖、钾、还原糖、氯、淀粉、镁、石油醚提取物总量、总磷共10项。这些核心检测项目是烟草农业检测项目的重点发展方向。送检单位主要是科研单位和烟草农业生产企业,其目的主要是为科研和生产企业提供基础数据。     

转基因产品的检测方法

目前,转基因产品的检测方法主要有分子杂交、PCR方法、酶联免疫分析法和基因芯片等,其中分子杂交包括Southern杂交、Northern杂交和Western杂交。对以上转基因产品检测方法进行了介绍,并对它们的优缺点进行了分析。     

基因芯片技术及其在植物育种上的应用

介绍了基因芯片技术的种类、原理、特点、基本过程及在植物育种中的应用。     

烟草抗马铃薯Y病毒病相关基因NtPsaN的克隆及表达分析

【目的】从高抗PVY烟草品种VAM中克隆抗病相关基因,分析该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在烟草抗PVY防御反应中的作用,为培育抗PVY烟草新品种奠定基础。【方法】利用SSH结合cDNA芯片筛选出来的病害诱导特异表达基因片段,通过RACE技术克隆烟草抗病相关基因;生物信息学分析该基因保守结构域以及序列特征;采用MEGA4.0软件构建系统进化树;利用实时荧光定量RT-PCR技术研究该基因的表达特性。【结果】克隆了1个烟草抗病相关基因,命名为NtPsaN,该基因具有PsaN基因家族保守结构域,OFR长度507bp,编码168个氨基酸;构建了PsaN亚基系统进化树;实时荧光定量RT-PCR结果显示接毒之后该基因表达与不接毒对照相比有明显上调趋势。【结论】克隆得到一个烟草PVY抗病相关基因NtPsaN,其表达受PVY侵染诱导,该基因可能在烟草抵御PVY病害侵染过程中起重要作用。     

DNA芯片技术研究进展

DNA芯片技术是近年来发展迅猛的生物高新技术，它是利用光刻合成、高速打印或电定位等技术，在支持物硅、玻璃或尼龙膜上胺照特定的排列方式有序地固化大量的基因探针，形成DNA微阵列。生物样品DNA／RNA通过PCR／RT－PCR扩增和荧光标记后与DNA微阵列杂交，通过荧光扫描器及计算机分析，即可获得样品的基因序列及表达的信息。     

水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化

【目的】尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达。【方法】根据已发表的相关序列，分别设计引物，通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件：质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子（Prrn）、质体psbA基因3′端终止子（psbA3′）、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因（aadA）、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG，大小3362 bp)，命名为crDNA、甘露聚糖酶基因（man）、绿荧光蛋白基因（gfp）。构建了水稻质体多顺反子定点整合表达载体pLM21(-psbC-Prrn-RBS -man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′- trnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪，用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选。【结果】获得质体转基因烟草4株。用PCR、激光扫描和Western blot等方法检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达，用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。【结论】水稻质体多顺反子定点整合表达载体已整合到烟草质体基因组中，并得到表达。     

转基因烟草的耐盐性研究

通过植物基因工程技术,获得了分别表达编码细菌1-磷酸甘露醇脱氢酶基因(mtlD)和6-磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)的转基因烟草。Southern和Northernblot结果表明,mtlD基因和gutD基因均已整合到烟草染色体DNA中,并转录产生对应的mRNA。糖醇含量测定表明,在所测试的mtlD基因转化烟草中,均有不同剂量的甘露醇的合成;在gutD基因转化烟草中,gutD的表达导致了细胞内山梨醇相对浓度的提高。在含1.75%NaClHoagland溶液中的耐盐实验表明,转化植株的耐盐性比非转化植株的大为增强。     

受PVY诱导的烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp的克隆与分析

【目的】通过筛选并克隆烟草抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)相关基因,分析其在不同诱导时间的相对表达量,揭示烟草抗病毒诱导的分子机理,以期为烟草抗病毒病育种奠定基础。【方法】通过抑制差减杂交和cDNA芯片从PVY诱导的抑制差减杂交文库中筛选上调表达(Ratio2)的基因中间片段,用RACE技术克隆其cDNA全长,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同诱导时期的相对表达量。【结果】从受PVY诱导的烟草叶片中筛选一条595bp的基因中间片段并克隆得到一个全长为1770bp的天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp(GenBank登录号为GU144571),该基因编码506个氨基酸。多序列比对结果显示,该基因的编码产物与其它植物天冬氨酸蛋白酶家族成员具有高度的同源性,具有植物天冬氨酸蛋白酶典型的结构特征。实时荧光定量PCR分析表明,Ntasp在PVY接种早期上调表达。【结论】克隆得到一个烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp,其表达受PVY侵染诱导。     

DNA芯片技术在动物医学中的应用研究进展（摘要）

从基因表达谱研究、病原微生物检测、细菌分型、基因突变和多态学研究等多方面概述了DNA芯片技术在动物医学中的应用进展,并对DNA芯片技术的原理和分类进行综述。     

Copper-Controllable, Site-Specific DNA Excision in Transgenic Plants

A copper-inducible, Cre-loxP recombination-mediated DNA excision system has been developed in transgenic tobacco plants. The copper inducible system derived from yeast was used for the control of the expression of the Cre recombinase. Upon copper induction, the GUS reporter gene expression unit flanked by two direct lox sites was excised from the transgenic tobacco genome. Quantitative fluorometric GUS assays,Northern blot and PCR analyses showed a high-efficient, copper-dependent and Cre-loxP mediated DNA recombination in all the tested transgenic lines. The copper inducible foreign gene excision might be of great potential in genetic control of transgenic crops.     

森林植物分子生态学的研究方法

森林植物分子生态学的核心内容是检测其群落、种群、个体水平上的遗传多样性．较详细地综述了DNA水平上森林植物分子生态学的研究方法;DNA分子标记、DNA测序、基因克隆技术、DNA芯片技术的的原理和方法；简要介绍了蛋白质水平上的研究方法：等位酶分析和蛋白质组学的原理和方法．     

多抗PVY、TMV和CMV转基因烟草的培育

 【目的】利用RNA介导抗性培育抗多种植物病毒的转基因烟草。【方法】分别以马铃薯Y病毒（PVY）、烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）全长衣壳蛋白（CP）基因为模板,通过设计PCR引物和亚克隆获得PVY CP 3′端长度100 bp、TMV CP 3′端长度100 bp和CMV CP 3′端长度200 bp的cDNA片段并拼接成嵌合基因,并以此为模板构建反向重复结构嵌合基因的植物表达载体pRHPTC。将pRHPTC通过冻融法导入农杆菌LBA4404,采用叶盘法转化烟草NC89,然后测定转基因烟草对3种病毒的抗性。【结果】经卡那霉素筛选和PCR检测,共获得276株转基因烟草。Southern和Northern blot分析表明,外源基因以不同拷贝数整合于烟草基因组中;不同转基因植株中病毒RNA的积累量存在显著差异。抗病性检测显示：23%左右的转基因植株表现出对3种病毒侵染的抗性。对转基因植株扩繁后代和T1代的抗性分析表明：多病毒抗性表现稳定。【结论】利用RNA介导的抗病毒基因工程可获得同时抗多种病毒的转基因烟草,其抗病性在T0代扩繁植株和T1代植株中得到稳定遗传。