氧化硅包裹的磁性纳米粒子抽提质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位, 本文依据DNA在高盐条件下吸附于氧化硅介质, 低盐条件下脱附的原理, 采用包裹有氧化硅的磁性纳米粒子, 粒径为20 nm左右, 在外磁场作用下提取细菌质粒DNA, 操作简便, 在20 min内完成. 从1～3 mL过夜培养的大肠杆菌LB培养液中可纯化得到1～30 μg的高纯度质粒DNA, 该质粒DNA可直接用于分子生物学下游操作.     

奶牛瘤胃胃液微生物总DNA的提取和纯化

本研究建立了从奶牛瘤胃液中提取混合微生物总DNA的方法，对现有的方法进行改进使其适合于瘤胃混合微生物总DNA的提取。粗提后的瘤胃DNA可以直接扩增出16SrDNA。提取效率为每毫升瘤胃液的DNA提取量为0.1～0.3μg。通过SiO2回收进行纯化，纯化回收率达到34%～50％；用clean-up试剂盒纯化，纯化率可达到85％以上。经过纯化后的DNA可进行其它的分子生物学操作。     

鸡减蛋综合征病毒基因组提取方法的比较

分别采取PEG-6000沉淀法、酶直接消化法和超速离心法浓缩、纯化减蛋综合征病毒，并提取基因组DNA。结果表明：上述三种方法对1．5mL鸭胚尿囊液(HA≥14(log2))提取的DNA量分别为148．4，189．2和210．4μg；其OD260／OD280值分别为1．702，1．635，1．738，均在1．6～1．8之间，完全符合要求的纯度；经电泳显示，三种方法提取的DNA图谱也完全一致。提示，在无超速离心机的条件下，酶直接消化法和PEG-6000沉淀法提取的EDSV基因组DNA在纯度和数量方面，完全可以满足分子生物学的研究需要，且利用PEG-6000沉淀法，在时间、设备和试剂方面更为节简，可作为一般实验室操作时的首选方法。     

一种简便有效的核酸纯化方法

核酸纯化是分子生物学实验中最常用的技术之一,现有的常规核酸纯化方法比较费时费力。结合经典的醇沉淀法与质粒提取试剂盒二者的优点,探索出改良柱纯化法,即在核酸溶液中加入适量的醇和醋酸钠,用硅胶柱快速回收核酸。试验证明新方法与现有方法的纯化效率相近,节约试验成本,且操作简单快速。纯化后的DNA能够满足酶切分析、细菌转化等试验的需要。     

碱裂解法小量制备质粒DNA应注意的问题

质粒DNA的小量制备是基因克隆中的常规操作 ,可快速提取质粒DNA进行各种鉴定或进一步操作 ,本文就碱裂解法谈一下质粒DNA提取操作中应注意的问题。1)无菌条件下挑取琼脂培养板上的单菌落 ,移至 2～ 5ml,含适当抗生素的LB培养液中 ,37℃培养 8～ 10h为最适。2 )取 1 5ml培养液至离心管 12 0 0 0r/min离心 30s,离心机启动时间不应计算在此 30s内。3)弃上清 ,要使菌体和管壁上不残留液体 ,旨在去除细菌生长过程中代谢废物和脱落的细胞壁 ,否则会影响质粒的质量和内切酶酶切效果。4 )溶液Ⅰ、Ⅲ在使用前要预冷。5 )溶液Ⅱ现用现配 ,加溶液…     

电穿孔法用于大肠杆菌和苏云金杆菌的转化及质粒消除

利用电脉冲将质粒pHT3101和pHE－4D分别转入了大肠杆菌和苏云金杆菌,结果显示大肠杆菌DNA的转化率（转化子）为104～105·μg－1,苏云金杆菌的DNA的转化率（转化子）为102～103·μg－1．同时利用该法消除了Escherichiacoli菌株TG1和Bt菌株ISP78／11中的pHT3101质粒,消除率分别为88．6％和66．4％．比较了转化和质粒消除的条件并构建了一个工程菌．     

质粒DNA碱裂解提取法的改进

对质粒的碱裂解小量提取法进行了改进 ,改进的方法克服了以往质粒提取方法的RNA等杂质污染和操作烦琐费时等问题 ,该方法操作简单、经济实用 ,提取的质粒DNA得率稳定、质量好 ,符合大多数分子生物学常规实验的要求。     

广西地区仔猪致病性大肠杆菌的菌毛基因多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析

对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这56个菌株质粒的获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,表明广西流行的猪大肠杆菌性腹泻病主要是由携带相同质粒的大肠杆菌引起。试验结果表明,质粒DNA指纹图谱法可作为大肠埃希氏菌分型的分子生物学方法。     

链霉菌高拷贝质粒pIJ101DNA的研究 I．在大肠杆菌中的启动子活性

用大肠杆菌座子与Tn5个去除了自身启动子区域的卡那霉素抗性基因（neo)作为指标标记来探测广寄主、高拷贝的链霉菌质粒pIJ101上DNA的启动子活性所做的基因融合试验揭示，pIJ101上至少有两个可大大肠杆菌中行使启动子功能的DNA片段。基因融合后所产生的杂合质粒能够赋予大肠杆菌ED8767较高的卡那霉素抗性。对含质粒菌株在液体培养基中的生长动力学分析揭示，这种菌株在从无药物向有药物的生物环境中过渡时，生长并不受到暂时的抑制。说明这种启动子活性不是pIJ101DNA上DNA的突变所引起。用大肠杆菌的启动子探针载体pKK232-8所做的体外亚克隆试验更进一步证实了这项观察，并把两个启动子功能区分别缩小到0．54kb和1．18kb的范围内。这项试验成功地组建了质粒pIJ101亚克隆库，便于对这个重要的链霉菌质粒进行精细的分子生物学研究。     

应用氯化锂法小量提取质粒DNA

用改良的氯化锂方法小量提取质粒DNA。结果表明,该方法所提取的质粒DNA的质量与常规碱裂解法获得的质粒DNA基本一致,可以满足分子生物学基础实验的要求;同时该方法简化了试验步骤,质粒DNA提取时间缩短了24 min。