PT-PCR方法在实验小鼠肝炎病毒检测中的应用

实验应用RT-PCR方法对来自不同单位、6个品系、不同等级的84只小鼠进行了MHV检测。结果显示：MHV阳性小鼠35只,阳性率为41．67％;其中普通级小鼠29只,阳性18只,阳性率为62．07％;SPF级小鼠55只,MHV阳性小鼠17只,阳性率为30．91％。     

RT-PCR方法在实验小鼠肝炎病毒检测中的应用

实验应用RT-PCR方法对来自不同单位、6个品系、不同等级的84只小鼠进行了MHV检测。结果显示:MHV阳性小鼠35只,阳性率为41.67%;其中普通级小鼠29只,阳性18只,阳性率为62.07%;SPF级小鼠55只,MHV阳性小鼠17只,阳性率为30.91%。     

小鼠肝炎病毒RT-PCR检测方法的研究

用4株小鼠肝炎病毒(MHV 1,MHV 3,A 59,JHM)分别感染DBT细胞,收获病毒,提取病毒RNA.根据病毒基因的特异性保守序列设计引物,在最佳条件下进行RT-PCR,建立了RT-PCR检测方法,即两步法和一步法,分别扩增出600bp,375 bp的特异性核酸片段,其中,一步法检测MHV更快速、简便.     

小鼠肝炎病毒RT-PCR检测方法的研究

用4株小鼠肝炎病毒(MHV1,MHV3,A59,JHM)分别感染DBT细胞,收获病毒,提取病毒RNA。根据病毒基因的特异性保守序列设计引物,在最佳务件下进行RT—PCR,建立了RT—PCR检测方法,即两步法和一步法,分别扩增出600bp,375bp的特异性核酸片段,其中,一步法检测MHV更快速、简便。     

实验小鼠感染小鼠肝炎病毒后的抗体变化

采用MHV-A59标准毒株通过3种途径(腹腔、滴鼻、灌胃)对6个品系的实验小鼠(BALB/c、C57、nu/nu、NIH-Ⅲ、IL-4T、IL-10T)进行了病毒感染。通过检测小鼠感染后1个月内不同时段的抗体变化,发现小鼠在感染MHV后,血清转阳一般发生在感染后5-7 d,3周左右特异性IgG水平达到高峰;而特异性IgM水平出现上升时间比IgG早,3 d左右开始升高,7 d到达高峰,3周后开始下降。不同品系小鼠由于遗传背景不同,对MHV的易感性和耐受性存在明显差异。不同感染途径之间也存在着一定的差异,腹腔感染MHV的小鼠抗体转阳时间和IgG、IgM高峰水平出现的时间都较滴鼻和灌胃途径早,而滴鼻感染MHV后小鼠抗体转阳时间出现较晚,但其维持时间较长,认为MHV感染后产生免疫力的持久性在很大程度上取决于免疫途径的选择。     

小鼠肝炎病毒研究进展

该文就MHV在病原、免疫相关、诊断及检测方法等三个方面的现状和发展作一概述。     

小鼠肝炎病毒以不同途径感染4个品系小鼠的比较

用小鼠肝炎病毒A59株以滴鼻、灌胃、腹腔注射3种途径人工感染近交系小鼠(BALB／c小鼠、C57BL小鼠)、免疫缺陷小鼠(NIH—Ⅲ小鼠、BALB／c—nu／nu小鼠),接种病毒后3、5、7、14、21、28d分别取各鼠的肝脏,提取肝脏总RNA。用RT—PCR方法检测小鼠肝炎病毒的感染情况。结果显示：腹腔注射病毒的小鼠在肝脏中能最早检测出病毒,其次是灌胃,滴鼻则最晚;另外,近交系小鼠及免疫缺陷小鼠感染后3d在肝脏中检测出病毒,而转基因小鼠则在感染后7d在肝脏中检测出病毒。     

单克隆抗体ELISA双抗体夹心法与ELISA间接法检测小鼠肝炎病毒抗体的比较

用辣根过氧化物酶标记的抗小鼠肝炎病毒(MHV)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA 双抗体夹心法,并与 ELISA 间接法检测小鼠血清中的 MHV 抗体进行了比较。发现两种方法在检出率、特异性、稳定性方面并无明显差异,但由于间接法操作更为简便,因此认为,检测血清中 MHV 抗体采用间接法较好。     

鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV)3D基因序列,设计合成1对引物,通过优化RT-PCR反应条件,建立了DHV的RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该引物仅特异性扩增出DHV 460 bp的特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和鹅副粘病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法能检测到100 pg的DHV核酸;对6份临床病料进行RT-PCR扩增,DHV的检出率为83.33%(5/6)。结果表明:该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床病料中的DHV进行快速检测。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒（CVB）的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织5和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85％;将感病组织总RNA以10x梯度稀释成不同浓度,测出RT－PCR检测CVB的灵敏度为10^-4x;PCR产物克隆作为RT－PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT－PCR鉴定和检测技术。     

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒(CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,结果从感病组织中扩增出与预期的776bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将PCR产物插入pGEM-T载体克隆并测序,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到85%;将感病组织总RNA以10 x梯度稀释成不同浓度,测出RT-PCR检测CVB的灵敏度为10-4x;PCR产物克隆作为RT-PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT-PCR鉴定和检测技术.     

用PCR和ELISA方法分析奶牛血清和奶中类乙型肝炎病毒

用人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）ＥＬＩＳＡ试剂盒检测８５份奶牛血清和９３份奶样。结果测出３３份血清为ＨＢｓＡｇ阳性，其中４价亦为ＨＢｅＡｇ阳性；２２份奶样为ＨＢｓＡｇ阳性，其中１１份亦为ＨＢｓＡｇ阳性。７个双阳性的样本，用针对ＨＢＶ表面抗原基因不同部位的两对引物作ＰＣＲ分析，结果未能扩增出特异片段，排除了奶牛ＨＢＶ血清学阳性是由人ＨＢＶ感染所致。     

人鼻咽上皮裸小鼠移植及诱癌实验中的EB病毒DNA检测

人鼻咽组织移植于２０只裸小鼠，分三组再分别多次以ＥＢＶ（７头）、ＥＢＶ＋ＴＰＡ（５头）或生理盐水（对照８头）皮下注射，诱癌后处死，将移植物作常规病理切片观察，并同时提取ＤＮＡ为模板，以ＥＢ病毒ＢａｍＨＩＷ片段特异性引物作ＰＣＲ检测ＥＢ病毒。结果显示：ＥＢＶ组与ＥＢＶ＋ＴＰＡ组中，７只可见鼻咽组织移植物发生癌前或癌变（原位癌、早期浸润癌各１只），而对照组均未见上述改变，两组比较差别有显著意义（０．０１＜Ｐ＜０．０５）；无形态变化的受试动物中ＩＢ病毒阳性２只，阴性１１只；有癌前病变和癌变的动物中，阳性５只，阴性２只，两组差别有显著性（０．０１＜Ｐ＜０．０５），提示观察到的病变与ＥＨ病毒感染有关。     

荧光定量PCR方法检测禽白血病病毒的研究

根据禽白血病病毒各亚群pol基因序列相对保守的特点,在其保守区内设计了1对引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为214 bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性、特异性和重复性试验。试验结果表明：标准曲线线性关系R值均为0.999以上,检测极限约为8.21E＋01拷贝数质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有禽白血病病毒能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%;用已建立的方法对人工感染SPF鸡的不同组织进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。以上结果表明：该方法稳定可靠,为禽白血病的早期诊断建立了特异、灵敏和快捷的方法。