诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱质量分数的影响

目的:研究不同浓度茉莉酸甲酯(MJ)、硝酸银(AgNO_3)、水杨酸(SA)、酵母提取物(YE)4种诱导子对颠茄毛状根生长及托品烷类生物碱合成的影响.方法:将0.5g新鲜颠茄毛状根接种于B5液体培养基中,黑暗培养12d后,将原有培养基换成加有不同浓度诱导子的4种新培养基,同样条件下再培养2d,收集颠茄毛状根材料,测定其鲜质量与干质量及托品烷类生物碱的含量.结果:MJ抑制了毛状根生长与托品烷类生物碱的积累,而AgNO_3虽然抑制了颠茄毛状根的生长,但却显著提高了托品烷类生物碱的积累,托品烷类生物碱的产量在100μmol/L AgNO_3处理下达到26.191mg,是对照的219.9%.在SA处理下,较小程度地抑制了毛状根的生长,对东莨菪碱的积累有促进作用.在YE处理下,随试验浓度升高,对毛状根生长及托品烷类生物碱的积累的促进作用也逐渐增强.结论:AgNO_3是提高毛状根中托品烷类生物碱的最佳诱导子,而YE是对颠茄毛状根生长的最佳诱导子.     

反义托品酮还原酶Ⅱ基因对三分三的遗传转化及生物碱含量测定

[目的]通过反义托品酮还原酶Ⅱ基因提高托品酮还原酶I（TRI）的表达水平,从而增加莨菪碱在三分三中的含量,为大规模开发生产托品烷生物碱提供理论基础。[方法]将携带反义托品酮还原酶Ⅱ基因的重组工程菌C58C1-p1304＋-antTRⅡ采用叶盘法对三分三进行遗传转化。潮霉素筛选转基因发根,PCR检测转基因发根基因组中是否同时含有rolB、rolC和Hygr抗性基因。PCR阳性转基因发根扩大培养后,提取生物碱,并采用高效液相色谱法进行生物碱含量测定。[结果]共有9个转基因发根的基因组同时检测到rolB、rolC和Hygr抗性基因,且这9个转基因发根中的莨菪碱含量较对照有不同程度的提高。[结论]反义托品酮还原酶II基因对托品烷生物碱代谢途径起到一定程度的正调控作用。     

莲花烷类生物碱化学成分和药理活性研究进展

莲花烷类生物碱属于异喹啉类吗啡型生物碱,主要存在于防己科千金藤属植物中,目前已发现70余个。其药理活性主要表现在抗HBV、与δ-阿片受体结合、抗单纯疱疹病毒等方面。为了更好地开发利用莲花烷类生物碱,本文综述了其化学成分与药理活性的研究进展。     

马铃薯与曼陀罗交互嫁接后药用生物碱的积累特征

【目的】探明托品烷类生物碱（Tropane alkaloids,TAs）在茄科植物中的转运和积累特征,并探索利用马铃薯块茎高生物量特性来富集TAs的可能性,为进一步拓宽TAs的研究方法和制取方法提供参考。【方法】以曼陀罗和马铃薯品系滇薯1418（D1418）为材料,进行交互嫁接,使用HPLC分别测定砧木和接穗各组织器官中的TAs含量。【结果】利用HPLC技术通过等度洗脱能有效分离和测定试验植物样本中的莨菪碱、阿托品、（-）山莨菪碱、（+）山莨菪碱和东莨菪碱。曼陀罗/D1418嫁接的曼陀罗接穗果实中TAs含量最高,为121.77 μg/g,接穗各组织器官主要富集（±）山莨菪碱,含量为29.15～87.98 μg/g;D1418/曼陀罗嫁接的马铃薯接穗茎、叶均能有效转运和积累TAs,其中莨菪碱含量最高,分别为76.02 μg/g和110.64 μg/g。【结论】马铃薯地下部块茎和叶腋处气生薯中均检测到5种托品烷类生物碱,马铃薯块茎能够积累一定量的TAs;曼陀罗和马铃薯茎叶中转运和积累TAs的机制可能存在差异;利用HPLC技术通过等度洗脱能有效分离和测定以曼陀罗和马铃薯交互嫁接植物样本中各组织器官的TAS含量。     

颠茄PMT·TR-I和H6H基因植物高效表达载体的构建

[目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶（Putrescine N-methyltransferase,PMT）基因、托品酮还原酶-I（Tropinone reductase-I,TR-I）基因和莨菪碱6-β-羟化酶（Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H）基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆到PMT、TR-I和H6H基因编码区序列,并连接到植物表达载体pCAMBIA1304^＋（p1304^＋）中。[结果]成功构建了植物高效表达载体p1304^＋-PMT、p1304^＋-TR-I、p1304^＋-H6H、p1304^＋-PMT-H6H、p1304^＋-TR-I-PMT和p1304^＋-TR-I-H6H,并转化农杆菌,获得可直接用于遗传改良颠茄的工程菌。[结论]该研究为利用植物基因工程技术提高东莨菪碱的产量奠定了基础。