离子交换层析复性重组人γ-干扰素折叠二聚体的形成

SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,复性后的重组人γ-干扰素的纯度达95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105IU·mg-1.以Superdex 75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复性的样品中没有重组人γ-干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人γ-干扰素的构象接近于其天然二聚体构象.     

重组人胶原蛋白肽的表达及纯化工艺的优化

将重组大肠杆菌pC6-BL21活化后,用IPTG诱导表达,探讨了大肠杆菌中重组胶原蛋白肽的最佳表达及纯化条件。结果表明,菌株在37℃,接种量为2%,摇瓶培养3.0 h后,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,30℃诱导5.0 h,收获的蛋白产量最高,经Ni-NTA柱亲和层析纯化,用梯度咪唑缓冲液洗脱蛋白,150 mmol/L咪唑缓冲液洗脱蛋白为纯蛋白,Western blotting分析显示该表达产物与人COL6A2单克隆抗体有特异结合能力。     

人重组溶菌酶对肉鸡营养消化及肠道组织结构的影响

研究人重组溶菌酶对肉鸡营养消化及肠道组织结构的影响,探讨其替代抗生素的可能性及其在肉鸡日粮中添加的最佳剂量。结果表明,添加0.2%人重组溶菌酶的促生长效果最好。     

人重组溶菌酶对肉鸡生产性能及胴体品质的影响

研究人重组溶茵酶对肉鸡生产性能、胴体品质的影响,探讨其替代抗生素的可能性及其在肉鸡日粮中添加的最佳剂量。试验结果表明,添加0．3％人重组溶菌酶促生长效果最好。     

重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合伊曲康唑治疗外阴阴道假丝酵母菌病54例

目的观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合伊曲康唑治疗外阴阴道假丝酵母菌病的疗效。方法门诊确诊为外阴阴道假丝酵母菌病患者106例,随机分为2组：研究组54例,用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊外用及伊曲康唑口服联合治疗;对照组52例,采用口服伊曲康唑治疗。两组患者于疗程结束后1周及治疗开始后第1、2、3个月来院随诊,比较两组治疗结束后1周的痊愈率及3个月时的总复发率。结果疗程结束后1周研究组的痊愈率为94.4%,对照组为90.4%,两者比较差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗后3个月研究组的总复发率为5.6%,明显低于对照组的28.8%（P〈0.01）。结论重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合伊曲康唑治疗外阴阴道假丝酵母菌病疗效好,复发率低。     

基于随机文法云模型的RNA二级结构预测

[目的]研究基于随机文法云模型预测RNA二级结构的方法。[方法]将云模型引入到随机文法模型中,提出适合于词汇化随机文法模型的机器学习算法,通过词网格模型对RNA序列进行词条获取和划分,再经过云分类器搜索每个词条被标注为某种二级结构类型的最大概率,然后将这些词条信息作为先验信息在随机文法云模型训练过程中引入,实现对RNA二级结构的预测,并对该方法进行试验检测。[结果]试验测试表明,在随机文法模型中引入云模型后,其在预测的准确度和搜索速度上较单纯的随机文法效果有明显改善。[结论]该研究为随机文法模型在RNA二级结构预测中的广泛应用奠定了基础。     

基于词条提取云模型的RNA二级结构预测(英文)

[目的]研究基于词条提取云模型预测RNA二级结构的方法。[方法]将云模型引入到随机文法模型中,提出适合于词汇化随机文法模型的机器学习算法,通过词网格模型对RNA序列进行词条获取和划分,再经过云分类器搜索每个词条被标注为某种二级结构类型的最大概率,然后将这些词条信息作为先验信息在随机文法云模型训练过程中引入,实现对RNA二级结构的预测,并对该方法进行试验检测。[结果]试验测试表明,在随机文法模型中引入云模型后,其在预测的准确度和搜索速度上较单纯的随机文法效果有明显改善。[结论]该研究为随机文法模型在RNA二级结构预测中的广泛应用奠定了基础。     

广东城乡经济结构的二元化特征分析

从构建和谐广东出发,运用实证分析的方法,对广东目前存在的城乡经济结构进行了定性分析与定量分析,指出广东城乡经济结构"二元化"特征总体上呈现弱化趋势,但近年来广东城乡收入差距呈现不断扩大的趋势.针对广东目前面临的客观形势,为实现广东城乡一体化的发展目标,提出了有针对性的解决措施.     

人及兔醛化红细胞的制备和应用

[目的]用4种血型的人醛化红细胞测定植物凝集素(PHA)的活性,并用标准抗血清对血型进行复查。同时初步探讨兔醛化红细胞对植物凝集素(PHA)凝集活性的测定效果。[方法]将新鲜的人A、B、O、AB型血以及兔血进行红细胞的提取并醛化,然后用抗A和抗B血清测定醛化后的人红细胞的血型,并用醛化的人的4种血型的红细胞悬液以及兔的醛化红细胞悬液对植物凝集素进行效价的测定。[结果]醛化后的人的4种血型的红细胞仍保持原血型不变,并且可以与植物凝集素发生凝集反应,结果与用新鲜血浆测定的效价一致。用兔醛化红细胞悬液也测定出同样的植物凝集素效价,且灵敏度与用人的醛化红细胞悬液测定相同。[结论]醛化的人的4种血型的红细胞以及兔醛化红细胞不仅未改变其表面的抗原,而且均可用于对植物凝集素的效价测定,同时具有保存时间长的优点。从降低成本的角度考虑,也可采用兔的醛化红细胞血液对植物凝集素进行效价测定。     

重组人组织激肽释放酶与猪胰腺组织激肽释放酶的理化特性比较

为了研究表达在蛋清中的重组人组织激肽释放酶(rhKl)是否与天然组织激肽释放酶具有相似的理化特性,对鸡输卵管暂态生物反应器表达的rhKl与猪胰腺组织激肽释放酶(pK)的理化特性进行比较鉴定.Western blotting检测结果显示,表达在蛋清中的rhKl能被人组织激肽释放酶(hKl)特异抗体识别,与pK无交叉反应,rhKl酶原和成熟酶的分子量约为43 kDa和37 kDa.理化鉴定结果显示,rhKl在pH7～10的范围内活性稳定,而pK在pH 8～9的范围内活性较稳定;rhKl和pK均能被Cu2+、Fe3+和Al3+完全抑制;rhKl和pK的热稳定性相似,但rhKl在37℃孵育20 min后被显著激活.以上试验结果表明,表达在蛋清中的rhKl分子量正确,理化特性与猪的天然酶相似,具有开发利用价值.     

中华鲟GH蛋白二级结构和B细胞抗原表位的预测

[目的]对中华鲟GH蛋白的二级结构及B细胞表位进行分析和预测。[方法]以中华鲟GH蛋白的氨基酸序列为基础,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测中华鲟GH蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法预测中华鲟GH蛋白的细胞表位。[结果]GH蛋白N端第37～51、88～92、97～104、133～148和187～193区段可能为α螺旋中心,在GH蛋白N端第6～17、24～35、56～57、105～107、109～110、117～119、124～126和204～208区段可能为β折叠中心,在GH蛋白分子N端第18～23、55～56、67～73、83～86、112～114、151～157和209～211区段具有较柔软的结构,这些区段有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。GH蛋白N端第19～23、51～71、84～95、128～139、164～176、189～196区段可能是B细胞的表位,在GH蛋白分子的这些区域内或附近都有柔性区域。因此这几个区段内或附近很可能是B细胞表位的优势区域。[结论]该研究结果对中华鲟GH蛋白单克隆抗体的制备,以及中华鲟分子调控机理的探讨具有一定的参考意义。     

化控时期对棉花成铃结构和产量的影响

[目的]发现对棉花产量影响较大的化控关键时期。[方法]试验设置不同时期的化控处理组合,研究化控时期与棉花成铃结构和产量之间的关系。[结果]棉花花铃中期时的化控对促进棉花中部果枝成铃至关重要,花铃后期的化控对顶部果枝成铃有利;从盛花期开始进入棉田化控的关键时期,盛花期及其以后时期的化控对棉花产量影响较大。[结论]盛花期以后是棉花化控关键时期,这可为棉田化控管理提供理论依据。     

广西巴马小型猪β-干扰素基因的克隆、序列分析和蛋白结构预测

从刀豆素A刺激12 h和15 h的巴马小型猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出β-干扰素(IFN-β)基因,将其克隆到PMD18-T载体上,进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,克隆的巴马猪IFN-β基因氨基酸序列与GenBank上登录的梅山猪和长白猪的IFN-β基因氨基酸同源性为98.4%和98.9%,与人、牛、马的IFN-β氨基酸同源性分别为65.1%,65.1%,66.1%。人和猪IFN-β基因在5个螺旋结构序列上同源性很高,而且在维持蛋白结构和生物学活性上的氨基酸位点也非常保守。     

细微化对玉米淀粉结晶结构和糖化效果的影响

通过行星式球磨机对玉米淀粉进行湿法细微化处理,并采用双酶法对玉米淀粉进行糖化,调查细微化对玉米淀粉结晶结构和糖化效果的影响。显微镜观察和X-射线衍射分析表明,玉米淀粉颗粒在湿磨1 h以后转变为非晶态;湿磨可消除液化反应对玉米淀粉酶解葡萄糖收率的影响,无液化反应时,湿磨1 h玉米淀粉的葡萄糖收率为99.5%,远高于原玉米淀粉的41.6%,在70℃的条件下液化,液化时间的长短对湿磨1 h玉米淀粉和原玉米淀粉的葡萄糖收率的影响较小,葡萄糖收率均维持在99%左右。由此可见,对玉米淀粉进行湿磨可使淀粉颗粒非晶态化,消除液化反应对淀粉酶解葡萄糖收率的影响。     

竹子溶解浆制备过程的浆料性能和结构表征1）

采用硫酸盐法（KP）-两段氧脱木素（OO）-聚木糖酶（X）及强化碱抽提的无元素氯漂白（D1ED2A）漂序制备竹溶解浆,并对各工段浆料进行性能和结构表征。结果表明：竹材经上述流程处理后,α-纤维素质量分数提高至95．19％,聚戊糖降至6．25％,ISO白度提高至86．8％,黏度下降至11．80 mPa· s,灰分降低至0．14％。扫描电镜分析得出,竹纤维表面出现了缝隙、沟槽、起皱等特征,微细纤维随着无元素氯漂白流程的进行暴露得更加清晰。 X-ray分析结果表明,浆料纤维素的晶型未发生转变,仍属纤维素Ⅰ型。在KP-OO-X-D1-E处理的过程中,纤维素结晶指数由59．77％提高至70．26％;随后进行D2-A处理,纤维素结晶指数降至67．77％。     

基于ITS2序列及其二级结构对矩镰荚苜蓿和近缘种的分子鉴定

为准确鉴定矩镰荚苜蓿(Medicago archiducis-nicolai)及其近缘种花苜蓿(M.ruthenica )、阔荚苜蓿(M.platycarpos )和毛荚苜蓿(M.edgeworthii ),利用DNA条形码技术对4个物种的ITS2序列进行注释、比对、检验,计算种内种间遗传距离,邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统发育树,通过RNAfold web server预测4个近缘种的ITS2二级结构。结果显示,矩镰荚苜蓿及其近缘种的ITS2序列长度为220~221 bp,稳定性好;种间遗传距离(0.004 55~0.022 73)明显大于种内遗传距离(均为0),存在明显的“Barcoding Gap”区域;NJ系统发育树显示,毛荚苜蓿聚为一支,矩镰荚苜蓿、花苜蓿和阔荚苜蓿聚为另一支,然后矩镰荚苜蓿与阔荚苜蓿又各自形成单系;在二级结构中,矩镰荚苜蓿与阔荚苜蓿、毛荚苜蓿存在明显差异,但与花苜蓿极为相似,难以区分。分析表明：除花苜蓿外,以ITS2序列作为条形码并辅以二级结构,可以达到对矩镰荚苜蓿、阔荚苜蓿和毛荚苜蓿准确、快速鉴定的目的。     

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的二级结构和B细胞抗原表位的预测

以TGEV（猪传染性胃肠炎病毒）基因组序列为基础,运用Garnier-Robson、Chou-Fasman和Karplus-Schulz方法预测其S蛋白的二级结构,运用Kyte-Doolittle方法对S蛋白的亲水性进行分析,并分别运用Jameson-Wolf方法和Emini方法预测了其抗原指数和表面可及性,最后结合吴玉章的方法综合分析预测了其B细胞抗原表位。结果显示,α螺旋数量少且分散,β折叠占据面积较大,柔性区域主要集中在N端第22～30、45～76、100～172、239～301、348～419、451～519、541～633、645～720、746～796、822～887、921～986、1052～1201、1239～1384、1434～1445区段。S蛋白可能的B细胞抗原位点是N端第20～32、44～54、69～78、97～106、635～655、781～803、949～994、1307～1328、1346～1362、1432～1448区段,这些区段内部或附近都有柔性区域存在,可作为S蛋白的抗原优势表位。     

提取时间对鸡骨蛋白凝胶特性和蛋白二级结构的影响

【目的】研究提取时间对鸡骨蛋白(chicken bone protein,CBP)凝胶特性的影响,为利用鸡骨副产物制备食用凝胶提供参考。【方法】采用热压抽提法提取CBP,于4℃孵育制备CBP凝胶,测定不同抽提时间的抽提液中总固形物、粗蛋白、羟脯氨酸含量、蛋白质二级结构、分子量分布的变化,探讨抽提时间对CBP凝胶色差、凝胶强度的影响,并分析各指标之间的相关性。【结果】抽提时间显著影响鸡骨蛋白的提取率(P0.05),导致蛋白结构发生显著变化进而影响其凝胶特性。抽提时间从0—120 min,抽提液中总固形物、粗蛋白和羟脯氨酸含量均显著增加(P0.05);随着提取时间延长(40—120 min),蛋白发生显著降解,分子量10—30 k Da的肽段从40 min的59.82%降低到120 min的13.99%,分子量10 k Da的肽段从40 min的35.46%升高到120min的86.01%;提取时间延长引起蛋白发生部分程度变性,导致其二级结构改变,0—40 min时的CBP酰胺Ⅰ带由100%的α-螺旋组成,60—90 min时出现9.9%—17.6%的β-折叠结构,120 min时β-折叠全部降解;对CBP凝胶特性的分析表明,抽提时间为0 min时,鸡骨蛋白不形成凝胶,而抽提20、40和60 min时的凝胶强度无显著性差异,均优于90、120 min组;随着提取时间延长(20—120 min),提取液的透明度显著增加(P0.05),但40和60 min组的CBP制备的凝胶色泽最佳(P0.05);抽提时间(20—120 min)对凝胶持水性无显著影响(P0.05)。相关性分析表明,CBP中羟脯氨酸含量、CBP降解程度与凝胶特性显著相关(P0.05)。【结论】热压抽提时间对CBP凝胶特性有显著影响,综合考虑蛋白得率、凝胶色泽、强度等因素,40和60 min提取的鸡骨蛋白较适合制备凝胶。     

中国猪瘟兔化弱毒（脾淋毒）基因组5′—UTR的克隆和二级结构分析

据已发表的 CSFV C-株序列 ,设计合成了 5′- UTR特异性 PCR引物对 P1- N 1及半套式下游引物N1′。从兔脾组织中提取总 RNA,应用 RT- PCR及 Half- nested PCR成功地扩增出了 CSFV5′- U TR,进一步将该片段克隆到 p MD- 18T载体质粒并进行了序列测定。与 Shimen株、AL D株、GPE-株、Holland C-株和 Russian C-株相应区段的比较分析表明 ,其同源性分别为 96 .2 %,95 .7%,96 .0 %,98.7%和 95 .4 %。 5′- U TR中发现的隐性 AUG起始密码子及茎环二级结构 ,可能在多聚蛋白前体的翻译以及病毒的复制中起着重要作用。