利什曼原虫候选疫苗佐剂的研究进展

利什曼原虫病是由利什曼原虫属的前鞭毛体引起的一种寄生虫性疾病,通过媒介昆虫的叮咬而传播,可感染许多哺乳动物。根据利什曼原虫在哺乳动物组织中的寄生部位,可将利什曼原虫病分为内脏利什曼原虫病、皮肤利什曼原虫病及黏膜利什曼原虫病,其中内脏利什曼原虫病危害最大[1]。目前,通过     

浅谈利什曼原虫病

利什曼原虫病是由利什曼属的各种原虫所致人兽共患的一种以慢性经过为主的寄生虫疾病。本病临诊病理特征为不规则高热、消瘦、贫血、     

蜥蜴利什曼原虫在小鼠体内的分布及增殖研究

通过腹腔途径用体内含有荧光蛋白的蜥蜴利什曼原虫感染BALB/c小鼠,感染后采其脏器做冰冻切片,荧光染料染色后用荧光显微镜观察,并经PCR鉴定,结果显示蜥蜴利什曼原虫感染小鼠后,主要分布于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏。另外,成功建立了利什曼原虫荧光定量PCR检测方法,并采用该方法检测感染蜥蜴利什曼原虫后BALB/c小鼠体内利什曼原虫的增殖情况,结果显示,感染13 d内,BALB/c小鼠体内蜥蜴利什曼原虫呈波浪状增殖。这一结果为研究蜥蜴利什曼原虫感染人和动物的致病机理和免疫方法及疫苗研制等方面提供了基础理论依据。     

硝唑尼特对利什曼原虫的体外药效试验

为观察硝唑尼特在不同浓度、不同作用时间对离体杜氏利什曼原虫的药效作用,以6个不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200μg/mL)的硝唑尼特分别作用体外培养的杜氏利什曼原虫前鞭毛体48h和72h。结果显示,随着浓度和作用时间的增加,药物对虫体的抑制率升高,显微镜下可见虫体变形,核和动基体不完整,细胞质内有空泡,鞭毛脱落,即硝唑尼特对杜氏利什曼原虫有较好的抑杀作用。     

弓形虫ROP18基因重组蜥蜴利什曼原虫的构建及鉴定

用PCR方法从弓形虫RH株全基因组中扩增ROP18基因,将其克隆至pMD18-T载体,经测序分析后,构建真核表达穿梭质粒pLEXSY-neo2-ROP18;利用电转染技术将外源基因表达盒转入蜥蜴利什曼原虫,G418筛选阳性克隆;阳性克隆分离培养后提取基因组,用ROP18特异性引物及同源重组鉴定引物进行重组利什曼原虫PCR鉴定,结果阳性虫体中扩增出特异性目的条带;应用鼠抗弓形虫多抗血清以Western blot印记法从蛋白水平进行重组蛋白检测,证明目的蛋白在蜥蜴利什曼原虫中得到表达。     

杜氏利什曼原虫NH36基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

应用RT—PCR技术扩增并克隆杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani）NH36编码基因，经鉴定及序列分析，构建其原核重组表达载体，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western-blotting鉴定其表达产物。结果显示，获得的NH36开放阅读框为945bp，编码314个氨基酸残基，与GenBank上发表的国际标准株NH36编码基因序列以及氨基酸序列同源性分别为88．57％（837／945）和89．17％（280／314）。表达蛋白为36ku，经1mol／L IPTG诱导6h后的表达量最高；薄层扫描显示表达的蛋白占菌体蛋白总量的57％；该蛋白可被抗杜氏利什曼原虫的多克隆抗体血清识别。     

弓形虫SAG1基因在蜥蜴利什曼原虫中的表达

利用PCR扩增技术从弓形虫RH株全基因组中扩增出弓形虫抗原基因SAG1,将其克隆入真核表达载体质粒pLEXSY-neo2,构建真核表达穿梭质粒pLEXSY-neo2-SAG1。利用电穿孔转染技术将外源基因表达盒转入蜥蜴利什曼原虫,经G418筛选阳性克隆。表达的外源重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,证明SAG1重组蛋白在蜥蜴利什曼原虫中得到表达。     

浅谈利什曼原虫病

利什曼原虫病是由利什曼属的各种原虫所致人兽共患的一种以慢性经过为主的寄生虫疾病。     

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。     

利什曼原虫实时荧光定量PCR方法的建立

以利什曼原虫的小环状动基体DNA(Leishmaniak DNA)为靶基因,建立实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法。根据GenBank报道的利什曼原虫小环状动基体DNA保守序列设计合成特异性引物,经PCR扩增后与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞。挑选阳性克隆重组质粒经鉴定正确后,作为模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线。结果构建的标准曲线线性关系良好,相关系数为0.996,而且特异性强,重复性好。本研究成功建立了实时荧光定量PCR检测利什曼原虫的方法,该方法可用于利氏曼原虫病的诊断、流行病学监测和科学研究。     

鸡传染性支气管炎病毒辅助蛋白研究进展

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的高度接触性传染病,给养殖生产造成巨大的经济损失。近年来随着反向遗传操作技术的发展,国内外学者在分子生物学水平对IBV基因组结构与功能开展了深入研究,在IBV编码的结构蛋白和辅助蛋白功能研究方面取得了重要进展。文章就IBV辅助蛋白对病毒复制、病毒毒力的影响以及辅助蛋白在疾病预防方面的研究进行总结,为IBV辅助蛋白的功能研究及减毒活疫苗研发提供新的方向。     

Detection of Leishmania (L.) infantum in stray dogs by molecular techniques with sensitive species-specific primers

Background: Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a worldwide parasitic zoonosis caused by Leishmania (Leishmania) infantum around the world. Canids are the definitive hosts and sand flies the intermediate hosts.

Objective: To test the hypothesis that a new species-specific primers (Lch14:Lch15, targeting a multiple alignment for L. infantum kDNA minicircle) is an efficient diagnostic tool for L. infantum.

Methods: The presence of L. infantum DNA was assessed in blood samples of 69 stray dogs using the conventional PCR (cPCR) and quantitative PCR (qPCR). Additional 50 lymph nodes and 50 bone marrow samples (positive and negative samples for parasitological tests) from dogs from endemic and nonendemic areas for CVL were also used.

Results: L. infantum strains, and all positive lymph node and bone marrow samples for parasitological test gave positive results for cPCR and qPCR, presenting analytical sensitivity of ～10⁰ parasite mL^?1. For the blood samples, 40/69 (58%; CI 95%; 46%–69%) resulted positive for L. infantum in both tests. All positive samples were confirmed by sequencing.

Conclusion: This study showed the importance of the specific detection of L. infantum based on species-specific primers by molecular techniques, highlighting the application as a confirmation method in epidemiological studies and to adopt the best control measures.     

感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究

【目的】研究感染鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)镜鲤的组织病理特征及CEV在各组织中的分布规律,以期为鲤浮肿病的诊断和防控提供参考。【方法】利用HE染色观察发病镜鲤心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑、鳃组织的病理变化情况;用免疫组织化学法检测CEV在镜鲤各组织的分布和蛋白表达情况;利用CEV P4a基因保守区域设计3条探针,于5′-端标记FAM进行原位杂交,检测CEV在镜鲤各组织的核酸分布情况;实时荧光定量PCR检测感染镜鲤各组织的病毒载量。【结果】HE染色观察发现,患病镜鲤的鳃丝肿胀、充血,鳃丝间有脱落堆积的红细胞和炎性细胞,肝脏细胞深染萎缩,胆小管出血,脾脏组织出现明显间隙并伴有出血,肾脏组织充血明显,肾小管有明显闭合现象。免疫组织化学结果显示,在患病鱼的鳃和肝脏组织中大量表达CEV P4a蛋白,在其他组织中也有少量表达。原位杂交结果显示,CEV核酸大量存在于鳃组织中,在心脏、脾脏和肾脏中均有少量阳性信号。实时荧光定量PCR结果显示,鳃组织病毒载量极显著高于心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑组织(P<0.01)。【结论】感染CEV后,镜鲤内脏组织出现不同程...     

Canine Transmissible Venereal Tumour Parasitized by Leishmania infantum

Veterinary Research Communications -     

组织原位杂交和Taq Man实时荧光定量PCR检测enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊绒毛膜中的表达

为了探究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊胚胎发育过程中的可能作用,本试验应用组织原位杂交技术和Taq Man实时荧光定量PCR对其在不同妊娠时期(30、50、70、90、110、130d)蒙古绵羊绒毛膜的分布定位和表达规律进行了研究。原位杂交结果显示,enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在妊娠30、50、130d蒙古绵羊绒毛膜组织的滋养层巨型双核细胞(BNC)、多核合胞体小半鞘翅(SP)和滋养外胚层(Tr)细胞中均有阳性信号表达;荧光定量PCR结果显示,在妊娠各时期绒毛膜组织中均有enJSRV及受体HYAL2的mRNA表达,通过统计学分析enJSRV mRNA的表达量于妊娠50d时最低,70d和110d相对较高,且差异都极显著(P<0.01),到130d时又降低到起始水平;受体HYAL2的表达于130d时表达量最低,90d相对较高,且差异极显著(P<0.01)。而enJSRV与其受体HYAL2 mRNA表达量之间无线性相关性。研究结果提示,enJSRV在绵羊胚胎发育过程中可能参与调节绒毛膜滋养层细胞的生长并影响胎盘的发育。