病毒感染调控细胞凋亡

病毒感染调控细胞凋亡郭爱珍陆承平（南京农业大学动物医学院,江苏２１００９５）细胞死亡的机制有如下几种：病毒复制损伤宿主细胞、病毒出芽和合胞体形成破坏细胞膜、细胞毒性Ｔ细胞对靶细胞的杀伤作用等。但近年来,越来越多的证据表明,细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ...     

鸡新城疫病毒细胞苗的研究 概况

对鸡新城疫(ND)的研究已有60余年的历史,迄今尚未完全解决本病的控制,ND仍是各国养禽业的主要威胁之一。目前在各种综合防制措施中,免疫预防最为关键,也是本病研究中的热点。用于免疫的疫苗多为鸡胚苗。由于疫苗的广泛使用,使得鸡蛋中母源抗体水平普遍上升,以鸡胚接种制苗就会因母源抗体而影响效价。此外鸡胚还有可     

应用流式细胞术研究瘟热病毒感染细胞的凋亡

用犬瘟热病毒（ＣＤＶ）２种不同毒株感染非洲绿猴肾细胞（Ｖｅｒｏ）,用流式细胞术分析了病毒诱导的感染细胞的凋亡。结果发现,２种毒株感染引起的细胞病变类型不同,分为圆缩型与合胞体型;２种毒株均可诱导感染细胞凋亡,但毒株间的凋亡细胞化例存在差异,即产生合胞体型细胞病变的毒株凋亡出现较晚,凋亡细胞比例显著低于产生圆缩型细胞为的毒株（Ｐ〈０．０１）。结果提示,不同毒株导致细胞死亡的机制可能不同。     

细胞凋亡研究进展

细胞凋亡(apoptosis)是机体正常细胞在受到生理和病理性刺激后出现的一种自发的死亡过程,是一个主动、高度有序、基因控制以及一系列酶参与的过程.细胞凋亡在保证多细胞生物健康生存过程中扮演着关键角色,对个体的正常发育具有重要作用.它在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要意义.机体在产生新生细胞的同时,衰老和突变的细胞通过凋亡机制而被清除,使器官和组织得以正常的发育和代谢.对细胞凋亡的研究进展进行了综述.     

细胞凋亡与病毒的搞细胞凋亡

病毒的侵入可引起机体主细胞的凋亡，细胞凋亡有利于机体清除感染的细胞，保护自身免受病毒的侵害，是机体对病毒侵入的防缺机制之一。一些病毒具有许多抗细胞凋亡和抗CTL活性的机制，如编码免疫调节分子和调亡调节分子，降低细胞凋亡基因的表达以延长感染细胞的存活期，以利于病毒的增殖，现对细胞凋亡及病毒抗细胞凋亡的机制进一综述。     

禽流感病毒与番鸭呼肠病毒感染番鸭免疫器官细胞凋亡的研究

应用原位末端标记法和免疫组化SABC法,分别以H9亚型禽流感和番鸭呼肠病毒单独感染或混合感染雏番鸭后1、3、5、7、10d对胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡和P53的动态变化进行检测。结果显示,H9亚型AIV,MDRV单独感染和混合感染均可导致雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏出现淋巴细胞凋亡增多;病毒感染早期各免疫器官组织细胞凋亡明显,感染后期细胞凋亡量逐渐减少;混合感染组脾脏、胸腺细胞凋亡更为显著。P53表达的变化与细胞凋亡呈现相同变化规律,表明P53表达与病毒诱导的细胞凋亡机制密切相关。     

应用流式细胞术研究犬瘟热病毒感染细胞的凋亡

用犬瘟热病毒 ( CDV) 2种不同毒株感染非洲绿猴肾细胞 ( Vero) ,用流式细胞术分析了病毒诱导的感染细胞的凋亡。结果发现 ,2种毒株感染引起的细胞病变类型不同 ,分为圆缩型与合胞体型 ;2种毒株均可诱导感染细胞凋亡 ,但毒株间的凋亡细胞比例存在差异 ,即产生合胞体型细胞病变的毒株凋亡出现较晚 ,凋亡细胞比例显著低于产生圆缩型细胞病变的毒株 ( P<0 .0 1 )。结果提示 ,不同毒株导致细胞死亡的机制可能不同     

病毒吸附过程中细胞受体的研究

病毒的吸附和进入宿主细胞中起着重要的作用的是细胞受体。病毒与细胞受体的相互作用启动了病毒的生命循环,包括吸附和进入的过程。     

慢病毒介导的生长抑素shRNA对BHK-21细胞生长的影响

采用慢病毒介导的shRNA沉默细胞自身生长抑素（SS）的表达,同时,以pcDNA3．1-SS（pSS）真核表达载体转染细胞作为阳性对照,研究SS对BHK-21细胞的抑制增殖作用,同时观察SS是否具有促进细胞凋亡的作用。MTT法绘制细胞生长曲线可知,pSS转染细胞的生长受到明显抑制,抑制效率为9．63％（P〈0．05）;而LV—sh2组细胞的生长密度是对照组细胞的117．33％（P〈0．05）,表明SS对细胞的增殖具有抑制作用。流式细胞检测细胞凋亡表明,pSS转染组和LV-shRNA感染组凋亡细胞含量分别是对照组凋亡细胞含量的1．97倍（P〈0．05）和24．30％（P〈0．05）,表明SS通过诱导细胞凋亡发挥抑制细胞增殖的作用。本研究为SS及其类似物作为治疗药物的进一步开发应用提供了理论依据。     

犬瘟热病毒对被感染免疫细胞的细胞凋亡过程的选择性抑制

麻疹病毒感染的特征是在临床症状出现之前就有严重的白细胞减少和免疫抑制。为了更加详细的阐明感染第1周病毒对免疫细胞的影响,作者对注射了致死性犬瘟热病毒的雪貂的细胞活性、细胞凋亡水平、细胞周期状态以及不同免疫组织的感染程度进行了评估。最初的试验在犬的上皮细胞系-MDCK细胞中进行,结果显示高水平CDV的感染仅导致少量细胞发生细胞凋亡,被感染的细胞对化学介导的细胞凋亡有更高的抵抗力。在雪貂中,胸腺和淋巴结中细胞活力及感染早期和晚期的细胞凋亡水平是稳定的,在这些组织中80%的细胞被感染,同时在外周血单核细胞和脾中只观察到细胞凋亡有少许的逐渐增加。此外,在被感染细胞中自发的细胞凋亡被抑制,感染细胞附近的非感染细胞的凋亡比例增加。对骨髓中分布于不同细胞周期的细胞数量没有影响,但是胸腺中分裂的细胞减少了50%,脾中细胞分裂增加了10倍。此模型中观察到的感染介导的细胞死亡程度和细胞周期的改变不能单独解释白细胞的明显减少,还需要对其他机制进行研究以便得到确切的结论。     

病毒感染与细胞凋亡

细胞凋亡是机体在生长发育、细胞分化和病理过程中由基因编码调控的细胞主动自杀过程。机体通过凋亡将衰老、畸变和病变的细胞清除。因而 ,凋亡在生理及病理过程中具有同样重要的作用。近年来的研究发现 ,一些病毒及其编码的产物与宿主细胞的凋亡关系密切。研究病毒与细胞凋亡的相互关系 ,不仅有助于深入理解病毒的致病机理 ,开发新的抗病毒制剂 ,还为探索细胞内分子事件打开了窗口 ,而且对治疗人类病毒性疾病意义深远     

A型流感病毒蛋白研究进展

流感是由A型流感病毒引起的一种感染和／或疾病综合征。A型流感病毒已成为鸟类、人类和低等哺乳动物疾病的主要病原之一，其病毒基因组由8个节段组成，共编码10种以上的多肽，每种多肽都有着重要的生物学功能。     

鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究

以鸭肝炎病毒（DHV）病毒株背部皮下接种7日龄健康雏鸭，研究其不同时期诱导淋巴细胞及其他细胞凋亡的能力。结果表明，DHV能引起试验鸭淋巴细胞明显凋亡，维持时间较短，在36h达到高峰。揭示该病毒致病机理与淋巴细胞凋亡从而引起的免疫抑制相关。除淋巴细胞外，肝、肾、脑等器官的细胞凋亡不明显，与对照组无显著差异。     

伪狂犬病病毒感染诱导和抑制细胞凋亡

用伪狂犬病病毒 (pseudorabies virus,PRV)鄂 A株感染非免疫健康初生仔猪 ,5 d后出现典型的伪狂犬病临床症状。从感染 PRV鄂 A株仔猪的肾脏、肝脏、扁桃体、胸腺、腹股沟淋巴结、颈部淋巴结等组织细胞提取的 DNA,经琼脂糖凝胶电泳呈现大小不等的 180～ 2 0 0 bp整倍数的寡核苷酸片段梯状条带 ,经 PCR方法鉴定为 PRV DNA。末端脱氧核苷转移酶原位标记 [terminal deoxynucleotidyl transferase(Td T) - conjugated d UTP nick end labelling,TUNEL ]法显示 ,部分凋亡的阳性细胞呈现染色质凝聚、细胞核固缩、染色质靠核膜边聚集等形态学变化 ,说明 PRV诱导细胞凋亡是造成急性感染时组织器官广泛损伤的重要原因之一 ;而 PRV感染的大脑、小脑、嗅球及脊髓等神经系统组织中未观察到上述细胞凋亡特征 ,说明 PRV可以抑制急性感染时神经细胞发生凋亡。本试验结果显示 ,在 PRV急性感染状态下 ,病毒诱导细胞凋亡是杀伤细胞的重要途径之一 ,同时这一过程又可通过神经系统病毒基因隐性感染及潜伏期的建立而受到抑制     

羊口疮病毒感染对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(ORFV) 引起的一种急性、接触性和高度嗜上皮性人畜共患的动物传染病,主要感染绵羊和山羊,有时威胁人类。本研究将ORFV(OV/HLJ/04株)纯化后作为试验材料,采用巨噬细胞系RAW264.7作为病毒细胞宿主,RAW264.7在LPS体外激活的情况下,接种ORFV,研究ORFV感染对巨噬细胞凋亡的影响。结果表明,用LPS处理的试验组巨噬细胞形态学改变较大,凋亡量也较大;而没用LPS处理过的试验组巨噬细胞变化则相对较少。Western blotting研究结果显示,细胞凋亡信号Caspase-3与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)在24 h时对比,凋亡信号明显减弱,表明在24 h的巨噬细胞凋亡水平有所下降。     

非洲猪瘟病毒诱导猪红细胞凋亡并促进猪外周血单核细胞的吞噬作用

本研究旨在探讨非洲猪瘟病毒（ASFV）对猪红细胞（RBCs）的作用以及对猪外周血单核细胞（PBMs）吞噬能力的影响。试验采用流式细胞术检测ASFV侵染猪原代肺泡巨噬细胞（PAMs）和猪红细胞（RBCs）的能力,并检测ASFV诱导RBCs发生凋亡的百分比;同时采用激光共聚焦试验（Confocal）观察ASFV诱导RBCs发生凋亡是否影响PBMs的吞噬能力。结果显示,ASFV不能入侵RBCs,但以时间和剂量依赖性方式诱导RBCs发生凋亡。0.1 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导1.27%、3.23%、7.39%和8.56%的RBCs发生凋亡;1 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导1.54%、3.73%、8.46%和10.74%的RBCs发生凋亡;3 MOI ASFV接种RBCs后1、3、5和7 d可分别诱导2.65%、5.01%、12.44%和18.61%的RBCs发生凋亡。同时,凋亡的RBCs可以增加PBMs对黄绿色荧光微球的吞噬数量,ASFV诱导RBCs凋亡的百分比越高,PBMs吞噬黄绿色荧光微球的数量越多。综上所述,ASFV不能侵染猪RBCs,但可以以时间和剂量依赖性方式诱导RBCs发生凋亡并增强PBMs的吞噬功能。     

牛病毒性腹泻病毒侵染细胞机制的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是反刍动物和猪体内广泛存在的危害动物健康的重要病原体.BVDV感染牛后主要引起牛的持续性感染、免疫耐受、免疫抑制、繁殖障碍及急慢性黏膜病等临床症状,给养牛业造成重大的损失.其致病机理非常复杂,给该病的治疗和根除带来极大的困难.随着分子病毒学研究的发展以及对猪瘟病毒和黄病毒科其他成员的研究,人们在BVDV分子水平和细胞水平的研究方面也取得了一些进展.就此,作者从BVDV入侵细胞、在细胞内的复制以及与宿主蛋白分子相互作用等方面进行综述,有助于阐明BVDV致病和在体内持续存活的机制,为该病的防治和疫苗研发提供新的思路和对策.     

水泡性口炎病毒诱导BHK-21细胞的凋亡

采用HE、Giemsa染色、透射电镜以及DNA琼脂糖凝胶电泳等研究了水泡性口炎病毒（VSV）诱导BHK-21细胞凋亡的过程。结果显示：VSV感染BHK-21细胞后,光镜下可见细胞圆缩,细胞器固缩、核仁消失、染色质凝聚和核碎裂、凋亡小体出现;电镜下观察到染色质聚集形成典型的新月形,胞浆中充满大量空泡,细胞核因染色质凝聚也发生了空泡化;1％的琼脂糖凝胶电泳出现180-200bp整倍数的DNA梯形条带。结果表明,VSV诱导BHK-21细胞凋亡是其致细胞病变的主要表现形式之一。     

A型塞内卡病毒感染PK-15细胞环状RNA表达谱分析

【目的】分析A型塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)感染猪肾上皮细胞(PK-15)后环状RNA(circular RNA,circRNA)表达谱的变化,探究circRNAs在SVA感染过程中发挥的潜在调控作用。【方法】本研究基于Illumina HiSeq 2000平台对SVA感染及对照PK-15细胞circRNAs转录组进行测序,并对差异表达circRNAs的来源基因进行GO功能及KEGG通路富集分析,通过实时荧光定量PCR对新发现的circRNAs进行表达水平鉴定。【结果】转录组测序结果显示,SVA感染组、PK-15细胞对照组中共有432种circRNAs被发现。在SVA感染PK-15细胞中,87种circRNAs表达水平相对对照组PK-15细胞显著上调,74种circRNAs表达水平显著下调。对差异表达circRNAs的来源基因进行GO功能注释分析表明,SVA感染组差异表达circRNAs来源基因主要富集于核仁、细胞器膜和细胞大分子代谢、发育等生理过程。KEGG通路富集结果显示,SVA感染组差异表达circRNAs来源基因主要富集于胞吞过程、cAMP信号通路、Rap...     

牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证

为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。