基质金属蛋白酶-9表达与早产胎膜早破的关系研究

目的 :探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与早产胎膜早破(PPROM)的关系。方法 :采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测早产胎膜早破组58例、足月胎膜早破组46例、对照组31例孕妇的血清基质金属蛋白酶-9的水平,结果早产胎膜早破孕妇的基质金属蛋白酶-9水平明显高于足月胎膜早破者,而且胎膜早破孕妇的血清中基质金属蛋白酶-9水平亦高于对照组(P<0.01)。结论:检测孕妇血清的MMP-9水平可作为早产胎膜早破良好的预测指标,测定孕妇血清的MMP-9水平还有助于胎膜早破的早期诊断。     

基质金属蛋白酶和母猪胚胎着床

提高母猪的繁殖力是养猪生产的重点之一,而胚胎着床是影响母猪的繁殖力的重要环节。基质金属蛋白酶(MMPs)是体内最重要的基质水解酶,在多种因素调节下,对胚胎植入与胎盘形成发挥重要的生理功能。     

猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达条件优化及多抗制备

探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1的蛋白生物学特性,为半胱氨酸蛋白酶（Cysteine proteinase,CP）在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用研究奠定基础。将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转化入大肠杆菌BL21,进行诱导表达并对表达条件进行优化,应用免疫印迹法（Western blot）和动物试验进行重组蛋白的抗原性分析。经SDS—PAGE分析,表达的TsCL-1重组蛋白相对分子质量为61000,与推导结果一致。使用2×YT培养基于28℃、IPTG终浓度为0．1mmol／L的条件下诱导10h,可溶性重组蛋白表达量最高。Western blot检测结果表明,TsCL-1蛋白能与猪囊尾蚴多克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测血清抗体结果表明：制备的抗体能与TsCL-1重组蛋白特异性结合。成功诱导表达出了TsCL-1重组蛋白,表达产物的特异性、敏感性及稳定性良好。对猪囊尾蚴病的诊断及抗寄生虫新药物和疫苗研发提供了一定的理论依据。     

基质金属蛋白酶在寄生虫疾病中的研究进展

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类锌依赖的内源蛋白酶,能降解几乎所有的细胞外基质。研究发现,寄生虫存在MMPs,且感染宿主后可引起宿主MMPs表达改变,从而破坏宿主组织屏障,利于寄生虫入侵,调节寄生虫感染后疾病的发展与转归等。鉴于MMPs在寄生虫疾病中的重要地位,本文重点综述了寄生虫疾病中宿主和寄生虫各自MMPs的研究现状,为寄生虫疾病中基质金属蛋白酶功能的系统性研究提供参考。     

犬泪液中基质金属蛋白酶的表达

细胞外基质(ECM)是角膜的主要结构成分,赋予角膜特殊的生理功能.基质金属蛋白酶(MMPs)是调节ECM降解代谢的主要酶类.MMPs是一族活性依赖金属离子锌并以ECM成分为水解底物的复杂蛋白酶家系.在机体的生长发育和许多病理过程,主要与ECM的破坏和重塑有关.近年来这方面的研究逐渐受到重视,许多角膜病变,如进行性角膜溃疡或无菌性角膜溃疡,普遍认为与泪液中MMPs含量的变化有关.因此,对MMPs活性表达的干扰有可能成为未来治疗犬角膜溃疡新的方向.本试验旨在检测正常犬泪液中MMPs的表达,为今后的临床治疗提供理论依据.     

置质金属蛋白酶和母猪胚胎着彦

提高母猪的繁殖力是养猪生产的重点之一，而胚胎着床是影响母猪的繁殖力的重要环节。基质金属蛋白酶（MMPs）是体内最重要的基质水解酶，在多种因素调节下，对胚胎植入与胎盘形成发挥重要的生理功能。     

一起猪后腿肌肉中寄生囊尾蚴所引起的思考

2001年12月16日,一市民在达州市城区某农贸市场购买一块剥皮猪后腿精瘦肉8.2kg,回家准备灌制香肠,在切肉过程中,在肌肉纤维上发现有不少的灰白色小点.第二天将该肉送到我站,要求检验,我们接到样品后一是对该肉的来源作了详细调查,二是进行感观检查,三是作了实验室检验,现报告如下:     

牦牛骨骼肌中特异基质金属蛋白酶及其功能相关基因的表达分析

【目的】筛选并鉴定在牦牛骨骼肌中特异表达的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)家族成员及其功能相关基因,以期为研究牦牛骨骼肌结构形成机制提供依据。【方法】采集成年公牦牛臀肌和胸肌,利用组织化学染色法(HE和Masson)分析肌纤维特征和胶原纤维数量;通过实时荧光定量PCR鉴定MMPs和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)的mRNA表达量;采用Western blotting技术和免疫组织化学法分析MMPs、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的表达量和组织分布;通过STRING网站分析MMPs及其功能相关基因之间的蛋白质互作网络;采用EnzChek^TM明胶酶/胶原酶试剂盒检测牦牛臀肌和胸肌中明胶酶/胶原酶的酶活性差异。【结果】Masson染色和实时荧光定量PCR分析结果显示,牦牛臀肌中胶原纤维面积、MMP-2和MMP-14基因表达量显著低于胸肌(P<0.05),TIMP-3基因在牦牛臀肌中表达量显著高于胸肌(P<0.05)。Western blotting鉴定发现,MMP-3、MMP-14、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白在牦牛臀肌中的表达量极...     

丹参水提物对山羊子宫内膜上皮细胞炎症模型中基质金属蛋白酶-2表达的影响

为研究丹参水提物(SME)对子宫内膜上皮细胞炎症模型中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响,体外培养山羊子宫内膜上皮细胞(EEC),利用内毒素(脂多糖,LPS)诱导细胞增殖和产生TNF-α,建立EEC炎症模型。然后给予高、中、低不同剂量SME干预。应用MTT比色法检测细胞活力,ELISA试剂盒检测TNF-α含量,实时荧光定量PCR检测细胞MMP-2mRNA表达变化。结果表明,5μg/mL LPS作用EEC 12h时促增殖作用显著(P0.01);SME可显著促进EEC炎症模型中MMP-2的表达,以中、高浓度组的作用较为明显。说明SME对LPS引起的子宫内膜炎症反应有一定的保护作用。     

原花青素对动脉粥样硬化模型家兔MMP-9表达的影响

探讨原花青素对家兔动脉粥样硬化模型基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。将24只新西兰白兔随机分为对照组(n=8)、模型组(n=8)和原花青素组(n=8)。模型组给予高脂日粮,原花青素组在模型组的基础上加用原花青素。采集试验前及喂食12周后试验兔的耳缘静脉血,检测静脉血中血脂水平的变化,观察主动脉病理形态学变化情况,用免疫组织化学方法检测MMP-9的表达。结果显示,在高脂日粮喂养的模型组中MMP-9表达明显升高,主动脉的病理形态学变化严重;而原花青素组主动脉病变明显减轻,MMP-9蛋白表达明显下降(P0.05)。表明原花青素对于动脉粥样硬化的发展具有抑制作用,这一作用可能是通过抑制MMP-9的表达来实现。     

阿苯达唑和奥芬达唑对猪囊尾蚴延胡索酸还原酶的抑制作用

研究测定了阿苯达唑和奥芬达唑对猪囊尾蚴组织匀浆延胡索酸还原酶活性的抑制作用。结果表明两种经物均能抑制延胡索酸还原酶活性，提示苯并咪唑氨基甲酸酯药物的作用机理可能是非竞争性抑制延胡索酸还原酶复合体，从而导致虫体因能量耗竭而死亡。     

猪囊尾蚴特异性单克隆抗体的制备及其识别抗原成分的鉴定

通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。     

猪囊尾蚴抗原成分及其诊断价值分析

猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患寄生虫病。囊尾蚴病的快速诊断是囊尾蚴病治疗和预防的前提,免疫学诊断方法是近年来的囊尾蚴病临床诊断中的重要辅助手段,高特异性诊断抗原的筛选为近年来的研究热点。囊尾蚴抗原组成复杂,包括囊液抗原、头节抗原、囊壁抗原、循环抗原和排泄分泌抗原等。其中的囊液抗原特异性较好,可用于免疫学诊断,而排泄分泌抗原诊断囊尾蚴的价值尚待进一步研究。     

猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达

采用RT—PCR方法扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因，将扩增产物与pGEM—Teasy载体连接，重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序；构建T24基因的pGEX-4T-1原核表达载体，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、Western—blotting；用所表达的蛋白免疫小鼠，经ELISA检测血清抗体，验证其免疫原性。结果显示，所克隆的T24基因片段长716bp，含有1个678bp的开放阅读框，其编码226个氨基酸，与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％；表达的融合蛋白大小为40ku，并能被猪囊虫阳性血清识别；免疫小鼠在免疫1周后即可检测到血清抗体，第30d达到较高水平，表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。     

奥芬达唑和阿苯达唑对猪囊尾蚴作用形态学比较观察

观察了奥芬达唑和阿苯达唑对猪体内及体外培养的不同发育阶段囊尾蚴作用的形态学效果.结果表明奥芬达唑具有显著的疗效,优于阿苯达唑,且对未成熟期猪囊尾蚴的杀灭作用优于成熟期.提示奥芬达唑可能成为抗未成熟期猪囊尾蚴及治疗脑囊虫病的有效药物.     

囊虫病猪循环抗原的研究(初报)

用琼脂凝胶双扩散试验发现了囊虫病猪的循环抗原,并用反向间接血凝技术作了检测。103份囊虫病猪血清琼扩试验对循环抗原的检出率为22.33％(23/103);反向间接血凝试验检出率为32.03％(33/103),其余70份呈阴性反应的血清经免疫复合物解离后,又有25份呈阳性反应,总检出率为56.31％(58/103)。     

小鼠对猪囊虫抗原基因TS76的免疫应答

将猪囊虫抗原基因 TS76的真核表达型质粒 VTS76单独或与 p UC18联合肌肉免疫注射于 BAL B/ c小鼠 ,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞 Con A刺激的增殖反应及 IL - 2的诱生活性 ,EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果发现 ,VTS76免疫小鼠各项细胞和体液免疫应答反应指数均比空白对照组小鼠显著提高 ;联合免疫组小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答反应指数均比 VTS76小鼠提高。由此可见 ,以 VTS76免疫小鼠可诱导其特异性细胞和体液免疫反应 ,而 p UC18又明显提高了 VTS76免疫小鼠的免疫应答水平 ,具有显著的免疫增强作用     

猪囊尾蚴抗原基因Ag1V1的克隆及其序列分析

根据NCBI上已知序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中成功克隆了低分子量抗原基因Ag1V1,同源性和种系发育分析结果显示,河南分离株Ag1V1基因的核苷酸序列和预测氨基酸序列与日本分离株同源性为100％和98.9％,说明Ag1V1蛋白基因具有一定的保守性;通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原.     

抗猪囊虫循环抗原杂交瘤细胞系的建立和鉴定

建立了8株抗猪囊虫循环抗原(CA)的杂交病细胞系。其中6F12和2E7为抗囊虫特异McAb;McAb 1C6、1C7、1B5、4D9、2B9和8D8与囊虫、(?)球蚴、细颈囊尾蚴抗原均可发生反应。这些McAb的腹水ELISA效价为105～107,细胞培养上清液效价为102,并均可与病猪血清中的囊虫CA反应形成沉淀线。用1B5、6F12和8D8分别致敏血球,以反向间接血凝试验检测98份囊虫病猪血清,检出率分别为70.41%(69/98)、6.12%(6/98)和7.14%(7/98)。本研究制备的McAb可用于猪囊虫循环抗原检测。     

猪囊尾蚴B抗原的克隆及鉴定

本实验从猪囊尾蚴虫体中提取 Ｒ Ｎ Ａ, 根据已发表的 Ｂ 抗原（ Ａｇ Ｂ） 核苷酸序列设计一对引物, 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增出 Ａｇ Ｂ 全基因, 以ｐ Ｕ Ｃ１１９ 为载体克隆, 转化到大肠杆菌 Ｊ Ｍ８３ 中, 经分析鉴定所扩增片段为 Ａｇ Ｂ 基因。