利用RAPD和ISSR分析百日草自交系间的种质遗传多样性

首次运用RAPD与ISSR技术分析了百日草20个自交系的种质遗传多样性.结果表明：从供试材料中147条RAPD引物和44条ISSR引物筛选到具有多态性的RAPD引物12条,ISSR引物9条.RAPD引物共扩增出147条带,多态性位点数为100,多态性位点比率为68.03%,平均多样性指数为0.3559,有效等位基因数为1.4169;ISSR引物共扩增出128条带,多态性位点数为97,多态性位点比率为76.38%,平均多样性指数为0.4013和有效等位基因数为1.4728.试验表明,RAPD、ISSR及两种分子标记整合后的结果较为相似,呈极显著的正相关.聚类结果将20个自交系基本分为2类：一类群来源虹越种子集团公司;另一类群来源甘肃酒泉种子集团公司,分类与原产地相关.RAPD与ISSR标记是研究百日草种质遗传多样性有效的工具,在分析百日草的亲缘关系特别是系谱关系时,ISSR是一种多态性和重复性优于RAPD的分子标记.两种分子标记整合后既能鉴定出自交系的系谱先后关系,也能反应来源相同自交系的亲缘关系.     

刚竹属14个品种遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记手段,研究刚竹属部分竹子品种的遗传多样性。实验从50条ISSR引物中筛选出10条重复性好、条带清晰的引物进行PCR扩增。通过对75条谱带进行相似系数的聚类分析,结果同形态学分类结果基本吻合;运用特殊谱带,建立竹子品种的分子检索表,说明ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性。     

四川不同地区硬头黄竹RAPD和ISSR分析

以四川不同地区硬头黄为研究对象,通过随机扩增多态性DNA标记（RAPD）和简单序列重复区间（ISSR）标记进行扩增,探讨硬头黄竹的遗传多样性。研究表明,6个RAPD引物扩增出42条条带,多态性高达69．05％;5个ISSR引物扩增出47条条带,多态性为61．70％。利用Popgen32和NTYS软件进行聚类分析,可将不同地区硬头黄竹类型区分开来,其遗传距离分别为0．1823～0．6022和0．0435～0．6721,RAPD和ISSR分子标记为硬头黄竹的遗传改良提供理论依据。     

金银花ISSR分子标记及遗传多样性分析

以湖南、山东、河南的22个金银花主要栽培品种为材料,利用ISSR分子标记对22个金银花品种进行了遗传多样性分析.结果表明:从100条ISSR引物中筛选出10条能够扩增出清晰、稳定条带的引物;这10条引物对22个金银花品种基因组DNA扩增,共扩增出108条带,其中多态性条带96条,多态性条带比率为88.89%;22个金银花品种间的遗传相似性系数范围在0.41~1.00,平均遗传相似性系数为0.68.利用U PGM A进行系统聚类分析,22个供试金银花品种划分为2大类,第1类为忍冬种群,第2类为灰毡毛忍冬种群,每一大类又分为北方种群与南方种群.而且主成分分析结果支持以上的聚类分析结果.可见,利用ISSR标记可有效地分析金银花种质资源的遗传多样性,为金银花品种鉴别、分类、种质资源的有效利用提供理论依据.     

云南核桃品种遗传多样性的RAPD和ISSR标记研究

利用RAPD和ISSR分子标记技术对11份云南核桃(Juglans silillata Dode)品种进行了遗传多样性研究。研究结果表明,筛选出的8条RAPD和8条ISSR引物分别产生86和102条扩增带,其中多态性条带分别为53和62条,分别占总数的61.63%和60.78%。用POPGENE对两种标记方法的遗传多样性进行计算,有效等位基因数分别为1.3552和1.3707,基因多样性为0.2110和0.2143,Shannon信息指数为0.318 8和0.3216。以Nei氏遗传距离矩阵按UPGMA方法聚类分析结果RAPD和ISSR标记的遗传距离分别为0.0355~0.4113和0.1423~0.4011,平均值各为0.2288和0.2338,以上数据表明分析品种具有比较丰富的遗传变异,同时也说明尽管Mantel相关性检测两种标记方法相关性较低(r=0.543 9,P<0.05),但都可以有效地揭示核桃品种的遗传多样性状况。     

乐昌含笑不同类型鉴定的ISSR-PCR分析

利用inter -简单重复序列 (ISSR)标记对乐昌含笑 6种类型的遗传变异进行了研究 ,从 30个引物中筛选出 12个多态性引物用于正式扩增 ,共扩增出 134条DNA带 ,其中多态性DNA带 6 7条 ,占 5 0 % ,平均每个引物扩增的DNA带的数目为 11 16 7条。其中引物ISSR16、ISSR19能区分全部类型。引物ISSR16、ISSR19和ISSR2在不同的类型中扩增出了一些特有条带 ,对乐昌含笑类型和品种鉴定以及检验品种的真实性方面非常有价值。本研究对ISSR分析技术的关键步骤进行了讨论 ,并利用DNA扩增结果对供试类型进行了聚类分析     

28种杜鹃亲缘关系ISSR分析

为探究杜鹃不同种之间的亲缘关系,从而为杜鹃属植物准确分类提供参考及杂交选育新品种奠定基础。利用ISSR分子标记技术对28个杜鹃品种进行遗传多样性分析。从50条ISSR引物中筛选出12条多样性较为丰富的引物对供试材料进行DNA扩增,共获得132条清晰条带,其中有127个位点具有多样性,多样性比例为96.21%,平均每条引物可以扩增11个片段和10.58个多态性片段。利用NTSYS 2.1软件进行遗传相似系数计算,其值介于0.285 7~0.925 8之间。基于其遗传距离数据进行UPGMA聚类分析,将28个品种分为3个类群,分类与品种形态学如花型、花期等性状相关联且可以反映出品种间的演变。ISSR扩增图谱差异显著,可用于杜鹃属植物的鉴定与区分。     

适于草果遗传多样性分析的RAPD引物筛选

以云南省文山州西畴县和德宏州陇川县的12株草果优良无性系为材料,利用RAPD标记技术,选用192个RAPD随机引物,对草果进行PCR扩增,并用UPGMA法对RAPD引物扩增条带进行聚类分析,计算其遗传相似系数,以期筛选出适用于草果遗传多样性分析的RAPD有效引物。实验共筛选出21个条带清晰、多态性丰富并具有可重复性特点的有效引物。21个引物在实验选用的12份样品中共扩增出177条DNA带,其中多态性带数为119条,占扩增总带数的67.2%,每个引物平均扩增出8.4条带。结果表明,12份草果样品聚为A组和B组,其中A组又分为两个亚组,聚类结果与所选用材料的地理来源基本一致,这也说明该研究所筛选得到的21个RAPD引物适用于草果的遗传多样性分析。该研究为应用RAPD标记技术对草果进行遗传多样性分析等研究奠定了基础。     

新疆枣资源亲缘关系的ISSR和RAPD分析

利用RAPD和ISSR标记对24份新疆主产区枣资源进行分析。9条RAPD引物共在75个位点获得了扩增,多态性位点比例为62.7%;8条ISSR引物共有48个位点获得了扩增,多态性位点比例为56.3%。基于RAPD和ISSR标记,利用UPGMA法分别构建了24份枣资源的亲缘关系图谱。结果表明,RAPD和ISSR的聚类结果相似但是不完全相同,在大类的分析上2种方法的聚类结果表现出差异,但是在细节的表现上趋向一致;综合2种方法的聚类结果,以相似系数0.80为标准,将供试的24份新疆枣种质划分为4大类群。     

李品种的RAPD分析

从96条S系列RAPD引物中筛选出能稳定扩增并具有多态性的13条引物,对25个李品种进行了RAPD分析.结果表明,只用S17、S459和S1169等3条引物就能鉴别出所供试的25个李品种.利用PopGene软件中的UPGMA方法对供试25个李品种进行分子聚类分析,取LD=0.45,可将这25个李品种分为8类.     

濒危小灌木长叶红砂种群的遗传多样性

采用RAPD和ISSR2种分子标记对濒危小灌木长叶红砂5个种群的遗传多样性进行检测。18个RAPD引物和14个ISSR引物分别扩增出118和114个位点,多态位点比率(P)分别为88.98%和89.47%。在物种水平上,RAPD标记的结果为:Shannon’s信息多样性指数(I)为0.4656,Nei’s指数(H)为0.3303;ISSR检测的结果:I=0.4688,H=0.3083。2种分子标记均表明濒危小灌木长叶红砂具有较高的遗传多样性水平。Nei基因多样性指数表明,大部分遗传变异存在于种群内。RAPD分析发现86.22%的遗传变异发生在种群内;ISSR分析发现89.29%的遗传变异发生在种群内。种群间遗传变异低的主要原因是种群间存在较强的基因流(Nm)分别为3.0097和4.1787)。长叶红砂较高的遗传多样性水平与物种特性和对高胁迫环境的长期适应有关,濒危植物并不一定表现为遗传变异水平的降低。     

竹类植物基因组学研究进展

概述竹类植物基因组学研究进展,包括RAPD,RFLP,AFLP,ISSR等分子标记的开发与应用,开花、细胞壁生物合成、光合作用、抗逆等相关的重要功能基因研究,基因组测序与比较基因组学等;在分析和综述的基础上,提出竹类植物分子生物学研究基础薄弱、功能基因鉴定困难等不足,并明确遗传转化体系的建立、比较基因组学与功能基因组学研究、分子标记辅助育种是今后竹类植物基因组学研究的重点。     

Molecular evidence for natural interspecific hybridization in Prosopis

Interspecific hybridization can occur under natural conditions among species of the Prosopis genus, potentially giving rise to hybrid individuals with increased adaptation values. A study was conducted to assess the occurrence of interspecific hybridization among Prosopis in the Argentinian Chaco region and the species involved. The survey included seven hybrid individuals and their potential parents. Principal component analysis (PCA) was carried out based on 16 morphological characters. The molecular marker study was carried out by the comparison of RAPD patterns of amplification using six primers. A total of 91 RAPD fragments were analysed, yielding 33 species-specific markers, 24 bands that were common to two or three parental lines, and 22 bands of unknown origin. The dendrograms arising from Nei’s genetic distances derived from the molecular data showed a clustering pattern in agreement with the grouping obtained by the PCA of the morphological traits. The results demonstrate the occurrence of interspecific hybridization involving Prosopis alba, P. nigra and P. hassleri in the Argentinian Chaco.     

利用RAPD分析药用石斛的遗传多样性及亲缘关系

通过对9种药用石斛进行遗传多样性和亲缘关系的分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。采用RAPD技术,应用NTSYS软件对9种石斛的RAPD-PCR结果进行分析。利用从103条随机引物中筛选出的70条随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到520条带,其中多态性带有491条,多态性百分率为94.42%。采用UPGMA类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离（D）=0.44处,可将供试材料分为2类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。试验结果表明,RAPD技术可有效地应用于药用石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。     

用RAPD技术估测柳树种及无性系的变异

利用１２个引物对柳树２种１６个无性系基因组分别进行了ＲＡＰＤ检测，从电泳图谱可直观看出，引物ＣＨＬ－１可对柳树两种识别：引物Ｄｅｃａ－４可对１６个无性系基因组扩增产物经电泳产生的图谱中ＤＮＡ条的统计，利用ＮＴ－ＳＹＳ对其进行分析建立系统树，结果表明，利用ＲＡＰＤ获得的两种柳树种的分类结果与经典方法得到的结果一致。     

四种竹子的RAPD指纹图谱的初步研究

本实验以RAPD技术对考顺竹、凤尾竹、绿竹、白绿竹四个品种用20种已知序列的10nt引物进行PCR反应扩增。其中有17种可扩增出DNA条带,构成RAPD指纹图谱。各种引物PCR扩增的DNA条带数目在0—6条之间,大小在0．3—2．0kb之间。各种竹子的17种引物扩增的DNA条带总数在23—44条之间。四种竹子两两之间的相似系数在36—73％之间。     

分子标记法和形态学特征对杏仁栽培种及野生种基因型的遗传关系构建的辨别

应用23个形态学特征,19个扩增片段长度多态性(AFLP)引物组合,80个随机扩增多态DNA(RAPD)引物和32个简单序列重复(SSR)引物对,比较三种分子标记法在29个杏仁栽培种和3个野生种遗传关系构建中的信息景和效率.根据预期杂合度的评价,与AFLPs和RAPDs相比,SSRs具有较高水平的多态性和较大的信息量.AFLPs预期朵合度值最低,但其辨别效率值最高,因为AFLPs能揭示每个反应中的大量条带,导致各种类型的多样性指数均较高.三种分子标记法对杏仁基因型的辨别效率均较高,只是SSRs无法辨别‘Monagha'和‘Sefied'杏仁基因型.三种分子标记法基因型相似性相关系数统计上显著,但SSR数据要低于RAPDs和AFLPs的值.尽管三种分子标记法树形图拓扑结构存在一些差异,但相似性水平均较高.SSRs、RAPDs和AFLPs的系统树图及其综合数据都能依据地理散布反映大多数栽培种的关系.AMOVA检测到每个地理组中栽培种和野生种的变异.辅助程序分析表明,实验所应用的标记物数量足以保证基因相似性估计的可靠性和标记法间的比较是有意义的.     

Evaluation of genetic fidelity among micropropagated plants of Gloriosa superba L. using DNA-based markers — a potential medicinal plant

Malabar glory lily (Gloriosa superba L.) is a medicinally potent plant species used for the production of alkaloid colchicine. With ever increasing demand, there is a pressing need to conserve it through biotechnological approaches. A large number of complete plantlets were obtained by direct regeneration from the non-dormant tuber explants on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2.0 mg/l 6-benzylaminopurine (BAP) + 0.5 mg/l α-naphthalene acetic acid (NAA). Large number of plants can be produced in vitro under aseptic conditions, but there is always a danger of producing somaclonal variants by tissue culture technology. Thus, the genetic stability of micropropagated clones was evaluated using random amplified polymorphic DNA (RAPD) and inter simple sequence repeat (ISSR) analysis. During the study a total of 80 (50 RAPD and 30 ISSR) primers were screened, out of which 10 RAPD and 7 ISSR primers produced a total of 98 (49 RAPD and 49 ISSR) clear, distinct and reproducible amplicons. The amplification products of the regenerated plants showed similar banding patterns to that of the mother plant thus demonstrating the homogeneity of the micropropagated plants. This is the first report that evaluates the use of genetic markers to establish genetic fidelity of micropropagated G. superba using RAPD and ISSR, which can be successfully applied for the mass multiplication, germplasm conservation and further genetic transformation assays for colchicine production to meet the ever increasing demand of this medicinally potent plant for industrial and pharmaceutical uses.     

白桦种群间木材纤维性状的表型变异与分子标记的遗传多态性

以东北地区的5个白桦天然种群为研究材料,在木材纤维形态性状测定的基础上,采用ISSR、RAPD分子标记研究了5个种群的遗传变异以及种群间纤维形态性状与DNA分子标记的相关性.结果表明:白桦天然林成熟材(18～31年生)的木材纤维长度在种群间差异不显著,纤维宽度和长宽比差异显著,帽儿山种群的木材纤维形态性状最好,汪清最差;利用ISSR和RAPD 2种标记检测5个白桦种群的遗传多样性,所得的研究结果基本一致,多态位点比率最高的为辽宁新宾种群,其次是帽儿山和汪清,而塔河和金山屯最低;ISSR标记的AMOVA分析表明白桦种群间的遗传变异占总遗传变异的10.82%;RAPD标记的AMOVA分析表明白桦种群间的遗传变异占总遗传变异的12.94%,研究结果均显示白桦的遗传变异主要发生在种群内部.利用2种标记技术的种群聚类结果基本一致,这一结果与基于木材纤维性状的表型聚类基本一致, 而且种群间遗传距离和地理距离之间存在一定的相关性.