齐口裂腹鱼维氏气单胞菌１６ＳｒＤＮＡ序列分析

报告齐口裂腹鱼病原菌的检测和生物学特性。从齐口裂腹鱼肠道中分离出菌株Spc0408, 采用常规形态特征的观察、生理生化试验、结合16SrDNA基因序列分析对其进行鉴定并构建系统发育树。该菌为革兰氏染色呈阴性,短杆形,无芽孢。生化鉴定结果显示具该菌有动力性,H2S、尿素阴性、不发酵木糖、鼠李糖、山梨醇等;β-半乳糖苷酶、葡磷胨水、枸橼酸盐阳性等。菌株16SrDNA的长度为1443 bp,登录号为JF929912,其和Genbank中多株维氏气单胞菌相似性高达97%,系统发育树显示菌株Spc0408和多株维氏气单胞菌聚为一簇。结合分离菌的表型特征及分子鉴定结果,可以判定该菌株在分类上属于维氏气单胞菌,本研究可以对相关病原菌的分类鉴定提供参考。     

齐口裂腹鱼败血症的病原分离与鉴定

从发生败血症的齐口裂腹鱼体内分离出2株致病菌，通过细菌的形态特征、培养特性和生化实验鉴定为嗜水气单胞菌和温和气单胞菌。经人工感染健康鱼表现出与自然病鱼相同的症状，并从人工感染死亡鱼中分离获得同种细菌，证实齐口裂腹鱼败血症的病原为嗜水气单胞菌和温和气单胞菌。药敏实验结果表明新霉素、头孢三嗪、庆大霉素对其高度敏感，红霉素、羧苄青霉素、氮苄青霉素和磺胺等不敏感。     

齐口裂腹鱼生长激素基因全长cDNA克隆与序列分析

鱼类生长激素是一种单一肽链蛋白激素,主要作用是促进机体的生长.采用RT-PCR方法,首次从齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)脑垂体总RNA中克隆出生长激素(gFowth hormone,GH)cDNA的开放阅读框ORF(open reading frame)序列,全长633bp.经DNA Star软件分析,该基因编码210个氨基酸,分子量为23.55 kD,等电点为5.46,含有1个疏水区和1个N-糖基化位点.空间结构含有4个α螺旋和4个β折叠,形成2个二硫键.序列比较发现,齐口裂腹鱼GH与草鱼、鲤的GH同源性分别为99.8%、99.4%;与黄鳝、花鲈和大黄鱼的GH同源性分别为57.4%、63.5%和64.2%.     

齐口裂腹鱼的营养需要

文中阐述了齐口裂腹鱼(Schizothorax(schizothorax.)prenanti)的主要生物学特性和营养需要研究进展情况,包括摄食习性、消化系统特点等生物学特性,蛋白质、脂肪、能量等主要营养需要量。以期为大力开展齐口裂腹鱼的人工养殖业及对齐口裂腹鱼的自然资源保护提供理论依据。     

齐口裂腹鱼流水养殖试验

齐口裂腹鱼又名雅鱼,丙穴鱼,细鳞鱼。属鲤科,裂腹鱼亚科,裂腹鱼属。为高档食用鱼,有着广阔的市场前景。我们对齐口裂腹鱼进行流水养殖成鱼,取得了成功。现将技术要点介绍如下。一、流水池条件1.水源条件齐口裂腹鱼生活于天然水流条件中,要求水质清新、溶氧充足、水环境稳定。我     

齐口裂腹鱼肌肉的营养成分分析

对天然齐口裂腹鱼鱼种、成鱼以及人工养殖的齐口裂腹鱼成鱼的肌肉营养成分进行了测定。结果表明，人工饲养的成鱼与天然成鱼相比，粗蛋白水平、灰分含量、氨基酸总量和鲜味氨基酸含量都有所增加，而必需氨基酸与粗脂肪含量比天然成鱼低。并通过与月鳢、鳜鱼的相应成分以及鸡蛋蛋白标准、WHO/FAO标准比较，说明齐口裂腹鱼具有较好的养殖前景。     

齐口裂腹鱼的人工繁殖与苗种培育

流水培育齐口裂腹鱼,选择3龄以上雌雄亲鱼各60尾,使用绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素A2和地欧酮3种药物混合对雌鱼进行注射催产,催产率为85%,受精率为79%,适宜催产的水温为9～16℃;在14～16℃的水温条件下,受精卵在202h内全部出膜,孵出仔鱼约61万尾,孵化率为80%。对孵出的61万尾仔鱼进行了逾90d的培养,共计出塘45万尾,成活率约为74%。试验结果表明,人工培育的齐口裂腹鱼亲鱼性腺能够发育成熟,经催产能成功繁殖。     

野生齐口裂腹鱼驯化注意事项

齐口裂腹鱼[Schizothorax (S.)prenanti(Tchang)](图见彩中插2),属鲤科、裂腹鱼亚科、裂腹鱼属鱼类,别名雅鱼、细鳞鱼、鲤鱼。随着市场对齐口裂腹鱼需求量的增加,其天然资源量供不应求,为满足市场对齐口裂腹鱼的需要,四川、重庆一些地区已开展流水池塘和网箱养殖。齐口裂腹鱼的养殖近几年发展比较快,     

齐口裂腹鱼无乳链球菌的分离鉴定及其感染的病理损伤

2012–2013年四川齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病, 在肝、肾涂片检查中发现链状G⁺球菌。从自然发病齐口裂腹鱼分离到2株形态与涂片检查一致的G⁺球菌(DML120817, YZH130830), 其在脑心浸液培养基(BHI)平板上28℃培养48 h, 形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落。经人工感染实验证实分离菌株为该病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae); 16S rRNA基因序列分析表明, 2分离株 (GenBank登录号分别为KF773744和KF761304) 与GenBank中无乳链球菌(S. agalactiae)16S rDNA序列同源性达96.5%以上。在以分离菌16S rDNA序列 (GenBank登录号分别为KF773744和KF761304) 及其GenBank中同源性较高的链球菌16S rDNA序列构建的系统发育树上, 分离菌与无乳链球菌聚为一族; 同时在基于无乳链球菌cfb基因进行的特异性PCR检测中, 分离菌均为阳性, 进而鉴定2株分离菌为无乳链球菌。2株无乳链球菌对强力霉素、阿莫西林、先锋霉素V、氧氟沙星和左氧氟沙星等均敏感, 但在新霉素与丁胺卡拉霉素上存在差异。病理学观察发现, 无乳链球菌感染齐口裂腹鱼对多组织器官都造成明显的病理损伤, 尤其是肝、肾、脑的损伤较为严重, 表现为明显的变性、坏死以及炎症细胞浸润, 且细菌侵入肝、肾、脾以及神经元细胞内, 导致线粒体、内质网等细胞器损伤。     

齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血清指标的变化

给体质量380~420g的齐口裂腹鱼腹腔注射密度为2.0×108 cfu/mL的嗜水气单胞菌液后6、12、24、48、72、90h,尾静脉抽取血液,测定其血清超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力、黄嘌呤氧化酶和过氧化氢酶的活性指标。结果显示,齐口裂腹鱼在感染72h后出现明显的发病症状,腹部肿大,胸鳍、腹鳍基部出血;在感染90h内活力先升后降,在12h上升出现极显著性差异(P0.01)。感染初期总抗氧化能力开始上升,48h达到峰值后下降。感染后过氧化氧酶活性明显增强,但在48h后逐渐下降。在感染90h内,黄嘌呤氧化酶指标呈直线上升趋势。表明血清指标可作为判定齐口裂腹鱼感染细菌的参考指标。     

东北三省9株嗜水气单胞菌16S rDNA序列比较研究

采用特异性引物对采自黑龙江、吉林及辽宁省的9个嗜水气单胞菌分离株的保守基因16SrDNA部分序列进行PCR特异性扩增,对所得686bp扩增产物进行测序并比较研究。序列分析显示,东北三省的9个分离株同源性极高,都在百分之九十以上,测得基因序列共有保守位点613个,变异位点73个,简约信息位点3个。辽宁省与吉林省分离株遗传距离为0.005049;辽宁省与黑龙江省为0.005049;而吉林省与黑龙江省为0.004232。以致伤弧菌为外群的MP及NJ聚类树聚类结果一致,黑龙江省的第一和第二分离株聚成一个分支,而其他各分离株聚成另外一个大的分支,其中辽宁省的第二分离株与吉林省的第一和第二分离株又聚为一个较小的分支。实验结果表明,9个分离株相应保守区16SrDNA片段变化较小,同源性极高,聚类不明显,没有形成明显的区域性或特异性的变化。     

发病鲆鲽类分离菌株的16S rRNA基因测序分析

细菌性疾病是中国海水养殖鲆鲽类的主要病害,为全面了解病原菌种类,本研究对1999~2012年从山东、江苏、河北、天津等沿海地区养殖场发病鲆鲽鱼类中分离得到的124株优势菌株进行了16S rRNA基因测序和系统发育学分析。将基因序列与GenBank核酸序列数据库进行相似度比对分析,结果显示,有83株与弧菌属(Vibriosp.)细菌相似度最高,11株与气单胞菌属(Aeromonas sp.)细菌相似度最高,4株与爱德华氏菌属(Edwardsiella sp.)细菌相似度最高,26株为其他15种属的细菌。根据系统发育学分析结果,进一步将66株菌鉴定为16个种,优势种为溶藻弧菌(V.alginolyticus)、哈氏弧菌(V.harveyi)、鳗弧菌(V.anguillarum)、杀鲑气单胞菌(A.salmonicida)和迟缓爱德华氏菌(E.tarda)。选择其中的9株鳗弧菌和4株迟缓爱德华氏菌进行人工感染实验,结果显示,其中7株鳗弧菌和3株迟缓爱德华氏菌对大菱鲆(Scophthalmus maximus)有较强的致病性。研究结果可为阐明中国海水养殖鲆鲽类的流行病发生历史、病原种类、病原监测及疾病控制提供重要参考。     

齐口裂腹鱼人工养殖技术

齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）,俗称雅鱼、齐口、细甲鱼、齐口细鳞鱼,为四川省级保护动物,是我国特有的重要名优经济鱼类。由于其品质优良,肉嫩鲜美,营养丰富,颇受广大消费者喜爱。目前,齐口裂腹鱼作为一种新的名优养殖鱼类,其引种驯化、规模化养殖与人工繁殖越来越受到广大水产科技人员及养殖者的重视。本文就齐口裂腹鱼人工养殖技术进行阐述,以期为齐口裂腹鱼的驯养提供依据,促进该鱼产业化养殖的发展。     

齐口裂腹鱼肌肉营养成分分析

采用一般营养物质测定方法及液相色谱仪测定氨基酸方法测定齐口裂腹鱼肌肉营养品质，结果表明：水分占80.90%，蛋白质16.35%，脂肪1.60%。灰分1.15%。17种氨基酸总量为干物质的78.48%。必需氨基酸含量占氨基酸总量42.76%，赖氨酸含量极为丰富，高达82.90mg/g干物质，齐口裂腹鱼高含量的赖氨酸可作为人类赖氨酸的强化食品，从而提高蛋白质的利用率。     

鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌的鉴定及系统发育分析

从鲫鱼中分离到一株弗氏柠檬酸杆菌,采用PCR方法扩增该菌株16SrDNA基因,并运用Clusta l x1.8和MEGA3.0软件对其进行序列相似性比较和系统发育学分析。试验结果表明:该菌株16SrDNA长度为1450bp,GenBank收录号为JN002104.1。此序列与GenBank数据库中弗氏柠檬酸杆菌16SrDNA序列的相似性达99%,在系统发育树中和弗氏柠檬酸杆菌聚在一起,亲缘关系最近。     

齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血液生化指标与组织病理学研究

为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)血液生理生化指标的影响,将180尾齐口裂腹鱼平均分成6组(4、24和48 h对照组;4、24和48 h感染组)。对照组腹腔注射0.2 mL0.65%的无菌生理盐水,感染组腹腔注射0.2 mL 2.5×10~7CFU/mL的嗜水气单胞菌液。分别测定4、24和48 h对照组和感染组齐口裂腹鱼各项血液生理生化指标,并对肾脏、肝脏和肌肉组织进行病理学观察。结果显示:谷丙转氨酶、白蛋白、总胆固醇、葡萄糖、乳酸脱氢酶、钾、钠、氯、钙和磷含量均有显著变化。谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总蛋白、球蛋白、甘油三酯则没有受到显著影响。由此可见,嗜水气单胞菌感染后对齐口裂腹鱼血液指标产生了显著的影响。对病鱼的病理学观察发现病鱼体表多处出现充血出血,溃疡和腹水,尤其是肝脏、肾脏和肌肉组织均出现不同程度的损伤,变性和局部坏死。     

齐口裂腹鱼人工繁殖的研究

齐口裂腹鱼 (Ｓｃｈｉｚｏｔｈｏｒａｘｐｒｅｎａｎｔｉ)是川西高原特有的冷水性鱼类之一 ,它是继虹鳟、黑龙江鲟科鱼类、青海湖裸鲤等冷水鱼之后又一条具有开发潜力的冷水鱼。 2 0 0 1年 5～ 7月 ,我们在岷江、大渡河上游河段进行了齐口裂腹鱼产卵场调查及亲鱼捕捞 ,并进行了亲鱼暂养、催产和苗种培育方面的试验 ,人工繁殖取得成功 ,但还有一些技术需要提高。现将初步研究的情况公诸于众 ,以供广大水产工作者参考。1　野外产卵场调查及亲鱼捕捞四川西部高原是青藏高原的一部分 ,山高壁陡 ,河谷深 10 0～ 70 0ｍ ,平均海拔 2 70 0ｍ以上 ,…     

PCR扩增特异性16SrDNA和溶血素基因检测致病性嗜水气单胞菌

根据已发表的气单胞菌16S rDNA基因序列及气单胞菌气溶素(aerolysin)基因序列，设计了2对引物，建立了检测致病性嗜水气单胞菌的PCR方法。通过对12株气单胞菌的检测，发现16S rDNA引物具有高度的特异性，仅对嗜水气单胞菌扩增阳性。而Aero基因引物检测结果与采用生物学方法(鲜血平板法)检测的结果符合率为97．2％，且具有高度的敏感性，可检测最低1fg的模板。将16S rDNA与Aero基因结合PCR方法检测致病性嗜水气单胞菌与用致病性嗜水气单胞菌检测试剂盒的符合率为94．4％。该方法的建立为致病性嗜水气单胞菌的检测提供了一种简便、快速的途径，是一种比较实用的致病性嗜水气单胞菌的检测方法。