绵毛优若藜容器育苗试验研究

环境因子影响着绵毛优若藜的发芽、出苗及生长.通过试验研究表明,育苗覆土厚度和覆盖基质对绵毛优若藜发芽有显著影响;种子处理对其发芽影响不显著;覆土类型以细沙覆盖出苗率最高;育苗时间在5月为宜.     

绵毛优若藜在吐鲁番的引种适应性

绵毛优若藜属藜科（Chenopodiaceae）驼绒藜属（Ceratoides）植物，是适应性较强的常绿灌木，其冠幅大，根系发达，耐风蚀沙埋，固沙性能好，是北美洲荒漠草场的重要建群种。在北美洲，从加拿大的育空地区，到美国华盛顿州的东部，北达科他州的西部，堪萨斯州的南部，一直到新墨西哥州和加利福尼亚州的南部均天然分布绵毛优若藜。美国将其用于荒漠草场改良，在美国西部干草原地区，每年冬季大量的草食家畜在绵毛优若藜灌丛中放牧，生长在加拿大北部的绵毛优若藜也是当地沙地牧场的主要饲草。     

枣抑制消减cDNA文库构建与分析

枣树具有独特的开花结果特性,为获得枣花发育基因,以金丝4号枣不同发育时期的花蕾和同时期的叶片cDNA互为试验方和驱动方,利用抑制消减杂交技术分别构建了枣花和枣叶抑制消减杂交cDNA文库(SSH文库)。枣花和枣叶SSH文库重组率分别是92.05%和90.26%,插入片段长度均介于200~2 000 bp之间,主要集中于1 000 bp左右。分别从枣花和枣叶SSH文库中随机挑选1 000个阳性克隆进行DNA测序、组装拼接,结果显示枣花SSH文库中获得96条unigene,其中contigs 43个,singletons 53个,96条unigene预测得到73个ORF,经过同源比对分析获得有注释的序列20条,按功能分为7类;枣叶SSH文库中获得86条unigene,其中contigs 45个,singletons 41个,86条unigene预测得到70个ORF,经过同源比对分析获得有23条注释的序列,按功能分为6类。     

落叶松扦插生根过程抑制消减杂交文库构建及分析

以落叶松扦插生根率存在显著差异的2个全同胞优良无性系茎和根为材料,应用抑制消减杂交技术构建了扦插生根过程中2个差异表达cDNA文库,酶切效率检测、连接效率检测、差减效率检测结果表明:这2个落叶松扦插生根过程差异表达cDNA文库构建成功.利用PCR扩增和点杂交试验筛选阳性克隆,将阳性克隆测序,并经生物信息学分析,最终获得521个UniEST.     

干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片SSH文库构建及CkWRKY1基因克隆

为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制,挖掘干旱响应相关基因,成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑制性差减杂交(SSH)文库,获得1 286条高质量的EST序列,平均长度475 bp,拼接得到Unigenes 645条.对这些Unigenes进行Blast比对注释后发现很多抗旱相关基因,例如LEA蛋白、DHN蛋白编码基因,MYB、bZIP、WRKY、NAC和bHLH转录因子等.通过RACE技术克隆其中1个WRKY转录因子的cDNA全长,命名为CkWRKYI,GenBank登录号为JX987095.CkWRKY1编码330个氨基酸的蛋白质,氨基酸序列中有1个“WRKYGQK”的WRKY转录因子家族保守序列,属于第Ⅱ类WRKY转录因子.利用实时荧光定量PCR技术检测发现,CkWRKY1基因在干旱处理后mRNA的表达水平明显上升,预示该转录因子可能与柠条锦鸡儿抗旱的分子机制相关.     

黑麦草抗冻蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

对多年生黑麦草进行冷胁迫处理后,提取叶片总RNA,采用RT-PCR法获得了LpAFP成熟蛋白的cDNA克隆。序列分析结果表明,该成熟蛋白的开放读码框(ORF)长度为357 bp,编码一条由118个氨基酸组成的多肽。生物信息学分析结果表明,黑麦草成熟抗冻蛋白与其他植物抗冻蛋白的同源性较低,与鱼类抗冻蛋白和昆虫抗冻蛋白则没有同源性。     

白桦雌花序cDNA消减文库的构建及分析

为研究白桦雌花序花期基因表达情况,以两天为间隔对其进行取样.基于SMART策略,通过RT-PCR,将源自最后时期样品的cDNA作为Driver cDNA,源自其他时期样品的cDNA作为Tester cDNA,构建抑制性消减文库.EST序列经blastX分析表明,该文库中的基因大致可以归为五类,分别同代谢、物质运输和信号转导、细胞周期、胁迫反应及调控相关.本文对基因表达同发育的关系做了探讨.     

Construction and analysis of a subtracted cDNA library of Betula platyphylla female inflorescence

Female inflorescence of Betula platyphylla was sampled at an interval of each two days to analyze the background of gene expression in floral phase. On the basis of SMART strategy, the driver cDNA was obtained from total RNA of the last sample and the tester cDNA was from that of the others by RT-PCR which were subsequently used to construct a subtracted cDNA library. The result of the ESTs (expression sequence tags) blastX showed that the genes in the subtracted cDNA library could be mainly clustered into 5 groups related to metabolism, transportation and signal transduction, cell cycle, stress response, and regulation. The relationship between gene expression and development was also discussed.     

油桐LEC1基因的cDNA克隆与序列分析

为了解LEC1(Leafy Cotyledon 1)基因对油桐油脂合成过程的调控机理,以油桐种仁转录组数据库中基因的部分c DNA序列为基础,采用RT-PCR技术从油桐种子中克隆LEC1基因的全长c DNA,并对其进行序列分析。油桐LEC1基因全长c DNA为1 152 bp,编码区为729 bp(142~870),编码243个氨基酸,5′端非编码区和3′端非编码区分别为141 bp和263 bp。该基因编码蛋白质的相对分子质量为27 025.4 Da,理论等电点为6.97;蛋白二级结构以不规则卷曲和α螺旋为主,是不具有跨膜结构的膜外蛋白。经对比发现,油桐LEC1具有典型的HAP3结构特点,在不保守的N端和C端中间有1个十分保守的结构域,与拟南芥、玉米、麻风树、黄连木等的LEC1氨基酸序列高度同源。     

油桐ALDH22A1和ALDH2C4基因克隆及其序列分析

为给油桐ALDH基因的结构与功能研究提供理论依据,以葡萄桐的近成熟种子为材料,根据油桐转录组测序结果设计引物,采用RT-PCR技术克隆了油桐ALDH22A1基因和ALDH2C4基因的全长cDNA序列。ALDH22A1的cDNA序列全长1 782 bp,编码593个氨基酸,该基因编码蛋白质的相对分子质量为65.60 kDa,理论等电点为6.62,蛋白二级结构以α螺旋为主,具有1个明显的跨膜结构,是稳定的非分泌蛋白。ALDH2C4的cDNA序列全长1 506 bp,编码501个氨基酸,该基因编码蛋白质的相对分子质量为54.82 kDa,理论等电点为6.58,蛋白二级结构以α螺旋为主,是不具有跨膜结构的膜外蛋白。BLASTp分析结果表明,这2个基因所编码序列与麻疯树、蓖麻的乙醛脱氢酶一致性最高,高达80%以上,含有醛脱氢酶基因家族的保守结构域。     

马尾松苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析

苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase,PAL)是苯丙烷类代谢的关键酶,催化苯丙氨酸转化为肉桂酸,促进黄酮、木质素等次生代谢产物的合成。根据其他植物PAL基因的DNA保守序列设计的简并引物,经过PCR扩增,得到1条864 bp的特异性片段,编码288个氨基酸。通过分析其序列和编码的氨基酸序列,发现其与其他物种的PAL基因高度同源,证实为马尾松PAL基因的核心序列。所得序列已经登陆在NCBI的Genbank中,序列号为GQ142010。     

小佛肚竹cDNA文库的构建与分析

以同一丛小佛肚竹新萌生的正常杆笋尖和畸形杆笋尖为材料,分别提取总RNA,经纯化成mRNA后,合成cDNA双链,以Uni-ZAP XR vector为载体,构建了两个cDNA文库.正常杆笋和畸形杆笋cDNA文库的滴度分别为7.4×109pfu·mL-1和8.7×109pfu·mL-1,含插入片段的频率均达到是99%以上,插入片段的大小均在500～3 000 bp.这两个cDNA文库的成功构建为探究小佛肚竹秆形变异的分子机理奠定了基础.     

毛竹快速拔节过程节间组织cDNA文库的构建与分析

以同一棵毛竹笋上快速伸长生长的节间组织和基本停止伸长生长的节间组织为材料,分别提取总RNA,纯化成mR-NA后合成cDNA双链;以Uni-ZAP XR vector为载体,构建了2个cDNA文库。快速伸长生长的、停止伸长生长的节间组织cDNA文库的滴度分别为9.7×109、8.4×109pfu.mL-1,含插入片段的频率均达到99%以上,插入片段的大小均在500～3000 bp。cDNA文库的成功构建为探究毛竹快速生长的分子机理奠定了基础。