铁皮石斛组培技术研究

[目的]为铁皮石斛的产业化发展提供依据。[方法]以铁皮石斛组培幼苗为试材,接种于不同培养基和培养条件下,培养60 d后分别取出全部小苗称重;组培苗移栽后统计成活率。[结果]4种不同基本培养基中,以N6对铁皮石斛幼苗的增殖效果最好,增产率达1619.0%,MS最差;以椰子汁为附加物时,对铁皮石斛苗的增殖促进作用最大,香蕉泥和马铃薯泥的增殖效果相近;日光灯照下的铁皮石斛苗较高,自然光照下培养的铁皮石斛苗粗壮,叶色浓绿,增殖率高。当苗高为(6.0±1.0)cm时,经1周炼苗后,洗净根部培养基移栽至石灰石碎石滤水层5 cm+锯末8 cm+活苔藓2 cm的基质,成活率在95%以上,植株生长良好。[结论]得到了优质、高效、低成本、规模化培育铁皮石斛组培苗的方法。     

铁皮石斛组培诱导研究

利用植物组织培养技术,对铁皮石斛的种子及外植体进行组培诱导试验。结果表明:铁皮石斛种子诱导最佳增殖培养基配方为1/2MS+NAA0.2mg/L+马铃薯汁100mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂;外植体中茎段较适宜诱导,最佳培养基配方为MS+NAA1.0mg/L+BA1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂。     

铁皮石斛的组培技术研究

为了研究铁皮石斛最佳的组织培养方法,本试验以铁皮石斛带节茎段作为外植体,探寻铁皮石斛的最佳基本培养基,最优消毒时间,以及不同浓度的NAA和6-BA对腋芽诱导、丛芽增殖、生根壮苗的影响.结果表明:以铁皮石斛带节茎段作外植体时,最佳的基本培养基是1/2MS培养基,在1‰HgCl2中浸泡消毒的最优时间为10 min;诱导腋芽时以1/2MS+10 g·L-1蔗糖+0.6 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-16-BA为最佳培养基;诱导丛芽增殖的最佳培养基为1/2MS+0.6 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-16-BA;诱导生根的最佳培养基为1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA+0.9 mg·L-1 NAA.     

铁皮石斛和紫皮石斛破壁粉工艺对醇溶性浸出物影响的初步研究

铁皮石斛和紫皮石斛破壁粉工艺对醇溶性浸出物影响的初步研究。使用振动式细胞级粉碎机对铁皮石斛和紫皮石斛进行破壁粉碎,通过分析铁皮石斛和紫皮石斛水分、粉碎时间、粉碎温度等参数探究该工艺对铁皮石斛醇溶性浸出物的影响。铁皮石斛水分、粉碎温度、粉碎时间工艺参数对醇溶性浸出物的影响显著,影响程度由大到小为：B（粉碎时间）>C（粉碎温度）>A（水分）。在水分为6%,粉碎时间为50 min,粉碎温度为-15℃时醇溶性浸出物效果最佳为9.95%。紫皮石斛的水分、粉碎时间工艺参数对醇溶性浸出物的影响显著,而粉碎温度影响较小,影响程度由大到小为：A（水分）>B（粉碎时间）>C（粉碎温度）。在水分为4%,粉碎时间为50 min,粉碎温度为-15℃条件下,醇溶性浸出物效果最佳为6.47%。醇溶性浸出物会随铁皮石斛和紫皮石斛破壁粉的粉碎程度而变化,可作为研究铁皮石斛和紫皮石斛破壁粉工艺研究的检测性指标和关键质量参数,同时也可以作为区分鉴别紫皮石斛和铁皮石斛的一个参数指标。     

铁皮石斛的组培及污染处理技术

铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物。生长于海拔达1600m的山地半阴湿的岩石上,喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境,不耐寒。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数10种,铁皮石斛为石斛之极品,它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值,民间称其为“救命仙草”。     

铁皮石斛组培快繁技术的研究

为了建立铁皮石斛快速繁殖体系,以其茎段为材料,研究了不同培养基组分、激素浓度对铁皮石斛增殖和生根的影响。结果表明:铁皮石斛在初代培养中用酒精消毒30s后再用0.1%升汞杀菌6min最为适宜;最适培养基为MS基本培养基;在MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA中铁皮石斛的增殖效果最佳,在MS培养基中添加3.0mg·L-1 IBA生根效果最好,生根率可达100%;试管苗移栽的最佳基质为苔藓,单独使用成活率可达90.6%。     

铁皮石斛原球茎的增殖培养研究

为探索最适宜铁皮石斛原球茎增殖的固体培养基配方,以获得高质量的组培苗,为工厂化育苗提供技术支撑,在相同的实验室培养条件下,把同一阶段的原球茎接种于不同激素比的4种培养基中,培养周期为60 d,每隔15 d取样检测1次,对不同生长状况的试验结果进行分析研究.结果表明,在基本培养基1/2 MS中加入浓度为1.0 mg/L的6-BA、0.5 mg/L的NAA和浓度为20%的马铃薯提取液进行固体培养,铁皮石斛原球茎的增殖效果好.     

铁皮石斛组培快繁降低污染率的关键措施

铁皮石斛系一种用于中药材生产的珍稀植物,近年来国内开始通过组织培养的方法进行繁殖,其配套的工厂化生产技术日趋成熟.铁皮石斛组织培养、扩大繁殖过程中,可采用综合措施,降低组培过程中污染的发生.     

电刺激对铁皮石斛原球茎中石斛碱含量的影响

[目的]探讨电刺激对铁皮石斛原球茎中石斛碱含量的影响。[方法]采用铁皮石斛原球茎培养基扩增培养铁皮石斛原球茎,并将扩增所得原球茎随机分为试验组和对照组,其中试验组给予不同时间电刺激(25 V),对照组不做处理,正常培养15 d后,以氯仿热回流法提取原球茎中的石斛碱,紫外分光光度法测定石斛碱含量。[结果]与对照组相比,经电刺激(25 V)1和2 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量显著增加(P0.05),而经电刺激(25 V)3 h的试验组铁皮石斛原球茎石斛碱含量下降(P0.05)。[结论]25 V电刺激1、2 h能够促进铁皮石斛原球茎中的石斛碱积累,这可能与电刺激能改变原球茎中细胞的渗透性、增强对培养基中各种成分的吸收,导致内源次生代谢物增加有关。     

铁皮石斛产地环境及产品中重金属的监测与污染评价

抽取浙江省乐清市大荆镇、淡溪镇、虹桥镇、仙溪镇、雁荡镇和芙蓉镇等地人工栽培铁皮石斛样品34份、基质样品27份和水样16份,分别检测其中Pb,Cd,Cu,Hg的含量。采用单因子综合污染指数和Nemerow污染指数法对铁皮石斛鲜条及铁皮枫斗进行污染评价。结果表明:铁皮石斛鲜条和枫斗的单因子综合污染指数和Nemerow污染指数均小于0.6,铁皮石斛产品均未受到重金属污染,水样总体表现良好,未受到Pb,As,Cd,Hg的污染。基质重金属Cd单因子综合污染指数为1.33,1.0P综≤2.0,轻度污染;Nemerow污染指数为0.97,0.7P综≤1.0,达警戒线,说明基质尚清洁,具备发展无公害铁皮石斛的环境条件,但应严格控制基质中重金属Cd的含量。     

铁皮石斛饮片对微生物生长的影响

为探明铁皮石斛超微饮片与传统饮片对微生物生长的影响,明确中药超微饮片的优越性,选用生长受铁皮石斛影响明显的2种微生物,通过液体培养比浊法研究了铁皮石斛超微饮片与传统饮片的作用效果。结果表明,铁皮石斛超微饮片和传统饮片对酿酒酵母的生长都有促进作用,且超微饮片的效果优于传统饮片,其中0.08~0.12 g/m L铁皮石斛超微饮片对酿酒酵母生长的促进效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平。铁皮石斛超微饮片和传统饮片对大肠杆菌的生长都有抑制作用,并且超微饮片的效果强于传统饮片,其中0.04~0.08 g/m L铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果与传统饮片相比差异达显著或极显著水平,0.10 g/m L铁皮石斛超微饮片对大肠杆菌生长的抑制效果与传统饮片相比没有显著性差异。可见,超微饮片的有效物质浸出率高于传统饮片,超微技术有利于中药成分的溶出。     

铁皮石斛种子诱导原球茎组培快繁体系的研究

以铁皮石斛种子为外植体进行组织培养快繁试验,采用对比试验研究不同基本培养基、激素浓度的配比、天然添加物对铁皮石斛种子萌发、原球茎增殖、分化和生根壮苗的影响,从中筛选出适合各个培养阶段的培养基配方,建立一套铁皮石斛组织培养快速繁殖体系。     

铁皮石斛的栽培及管理技术要点

铁皮石斛又名"黑节草",为兰科多年生附生草本植物,是我国名贵中药。铁皮石斛具免疫调节、延缓衰老等功效。但长期以来,人们用此药都是依靠采挖收集野生资源,而野生石斛繁殖率极低,所以发展铁皮石斛的人工种植技术有着极为重要的价值。现将铁皮石斛的栽培技术要点归纳如下。一、备畦     

菊花组织培养中细菌污染的防止

植物组织培养中的污染是一个很普遍的现象,因此无菌操作和培养环境的洁净对减少组培物污染率来说很重要。据报道,多种植物在建立快繁体系后连续继代多次,体系中常会有污染菌的出现,此类污染菌只生长在试管苗插入培养基的切口处,在培养基中生长极其缓慢呈云雾状。本文探讨菊花继     

野生铁皮石斛内生菌的分离及促生作用研究

试验从野生铁皮石斛根、茎中分离获得内生细菌10株、内生真菌21株。以菌液制剂分析其对组培铁皮石斛的促生作用,经筛选及验证,结果表明:内生细菌ZJSH1对铁皮石斛组培苗具有显著的促生作用,且培养液稀释102倍后促生效果最佳。     

不同生长条件下铁皮石斛内生细菌多样性及活性菌株的筛选

目的 比较和分析野生与人工栽培铁皮石斛Dendrobium officinale 内生细菌分布特点,筛选有较强定殖能力的活性菌株,为促进野生铁皮石斛驯化、提高药材品质奠定基础。方法 采用组织块分离法分离铁皮石斛根、茎、叶各部位的内生细菌,利用16S rDNA序列和系统发育树对分离菌株进行分析鉴定,体外筛选具有解磷、解钾、固氮、产铁载体、产IAA、拮抗病原菌的促生活性菌株,回接后再分离,观察内生细菌在组培苗中的定殖动态。结果 从铁皮石斛中分离到285株内生细菌,其中,217株分离自野生铁皮石斛,归类于3门9属,以芽孢杆菌属Bacillus和不动杆菌属Acinetobacter为优势菌群存在于根、茎、叶中,其菌株数分别占总分离菌株数的79.26%和8.76%;68株内生细菌分离自人工栽培铁皮石斛,归类于1门3属,以伯克霍尔德菌属Burkholderia和埃希菌属Escherichia为优势菌群存在于根、茎中,其菌株数分别占总分离菌株数的54.41%和30.88%。泛菌属Pantoea在野生和人工栽培铁皮石斛中均有分布。野生铁皮石斛内生细菌的物种数(9)和多样性指数(0.85)明显高于人工栽培铁皮石斛(物种数为3,多样性指数为0.61)。活性筛选共获得38株菌株,占筛选菌株的45%,4株野生铁皮石斛的活性内生细菌中有3株在人工组培苗具有较好的定殖性。结论 野生与人工栽培铁皮石斛内生细菌的类群结构和生物多样性具有明显差异,铁皮石斛内生细菌蕴含丰富的促生潜力。     

培养过程中添加蔗糖对铁皮石斛生理生化特性的影响

以铁皮石斛类原球茎为材料,研究了在培养过程中添加不同质量浓度的蔗糖对铁皮石斛原球茎干物质量、多糖积累动态变化过程及原球茎在改变渗透压的条件下抗氧化物酶变化的影响,以期找出在培养过程中添加的最适蔗糖质量浓度,以提高原球茎的多糖产量。结果表明:在培养第20天添加5 g/L蔗糖对原球茎多糖积累最为有利,其干质量及多糖含量、多糖产量最高,分别为16.02 g/L、300 mg/g、4 805.85 mg/L。同时,在培养第20天添加5 g/L蔗糖对铁皮石斛原球茎抗性的提高最为有利。     

不同生境下野生铁皮石斛内生真菌多样性的初步研究

采集湖南省新宁县崀山世界自然遗产风景名胜区和广西省乐业县雅长兰科植物自然保护区这两个生境中处于生长期的铁皮石斛（Dendrobium of ficinale）的营养根,并进行分离培养。通过对分离所得的41个菌株进行形态观察和ITS序列测定相结合的鉴定,共获得内生真菌34种。对担子菌和子囊菌分别进行了系统发育树构建结果显示,子囊菌为优势种类（31种）,以炭角菌目（Xylariales）和肉座菌目（Hypocreales）的种类为主,担子菌则以胶膜菌科（Tulasnellaceae）为主。Simpson多样性指数分析结果表明,不同生境下野生铁皮石斛内生真菌的多样性都很高,且雅长的高于崀山的。     

铁皮石斛害虫独角仙的生物学特性及防治技术研究

独角仙是铁皮石斛上新出现的一种重要害虫。在用药技术研究的基础上,综合作物栽培特点、生境等因素,对其生物学特性进行了研究,总结出高效安全的防治技术。独角仙在浙江省杭州地区年发生一代,成虫于6至8月发生,幼虫共3龄,其中三龄幼虫危害最大,历期最长,约为265～290 d。独角仙成虫昼伏夜出,具趋光性、喜湿性、趋化性。田间防治试验及农药残留分析结果表明,1%联苯菊酯·噻虫胺颗粒剂防效907%,但其有效成分噻虫胺药后14 d残留量仍超过欧盟MRL值,建议延长安全间隔期;04%氯虫苯甲酰胺颗粒剂防治效果次之,农药残留极低;其余生物防治、农业防治等处理有一定作用。对于铁皮石斛独角仙的防治,建议采用综合防治的方法控制其为害。