淋巴细胞转化试验在鸭体上的应用——Ⅱ.鸭瘟病毒对鸭外周血淋巴细胞转化能力的影响

试验鸭32只分4组,第1组接种鸭瘟强毒,第2组接种鸭瘟弱毒,第3组先接种鸭瘟弱毒,2周后再接种鸭瘟强毒,第4组为对照。采用外周血淋巴细胞转化试验,检测鸭瘟病毒对鸭外周血淋巴细胞转化能力的影响,结果鸭瘟强毒和鸭瘟弱毒对鸭淋巴细胞的PHA反应性均有抑制作用。其中鸭瘟强毒的作用迅速而且强烈,在很短的时间内即造成宿主淋巴细胞对PHA的反应剧烈下降,并很快导致动物死亡,出现典型的鸭瘟病变,但也有个别鸭能够耐过强毒的攻击而生存下来,耐过鸭淋巴细胞对PHA的反应性逐渐恢复正常,剖检未见有鸭瘟病变;鸭瘟弱毒的抑制作用是暂时的,宿主淋巴细胞对PHA的反应性很快即恢复正常,剖检也未见有鸭瘟病变;对于接种鸭瘟弱毒以后再攻强毒的鸭,其对PHA刺激的反应性未受到影响,攻毒后2周,宿主还表现出对PHA的反应能力有增强的趋势,剖检未见有鸭瘟病变。此结果与其他病毒所致的PHA反应抑制和加强作用相类似。     

鲫鱼淋巴细胞转化PHA刺激剂量及流式细胞仪检测参数探讨

从异育银鲫外周血中分离淋巴细胞,利用RPM I-1640培养基培养48 h后,采用流式细胞仪分析方法研究不同浓度的植物凝集素(phytohem agglutin in,PHA)(0μg/mL、80μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1 000μg/mL、1 200μg/mL)对外周血淋巴细胞转化率的影响,旨在探索异育银鲫外周血淋巴细胞体外转化最适刺激剂量。结果表明:(1)在PHA浓度0~400μg/mL的范围内,随着PHA浓度的增加,淋巴细胞转化率也增加,呈浓度依赖的关系,但当PHA的浓度增加到1 200μg/mL,淋巴细胞转化率明显下降。其中PHA浓度为400μg/mL时,淋巴细胞转化率最高,显著高于低浓度组(80μg/mL)和高浓度组(1000μg/mL、1200μg/mL)(P<0.05),略高于中浓度组(200μg/mL、600μg/mL、800μg/mL),差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下,PHA体外刺激异育银鲫淋巴细胞转化的最适剂量为400μg/mL。(2)用流式细胞仪检测细胞内DNA合成情况,Mu lticyc le AV软件进...     

鲫鱼淋巴细胞转化PHA刺激剂量及流式细胞仪检测参数探讨

从异育银鲫外周血中分离淋巴细胞,利用RPM I-1640培养基培养48 h后,采用流式细胞仪分析方法研究不同浓度的植物凝集素(phytohem agglutin in,PHA)(0μg/mL、80μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1 000μg/mL、1 200μg/mL)对外周血淋巴细胞转化率的影响,旨在探索异育银鲫外周血淋巴细胞体外转化最适刺激剂量。结果表明:(1)在PHA浓度0~400μg/mL的范围内,随着PHA浓度的增加,淋巴细胞转化率也增加,呈浓度依赖的关系,但当PHA的浓度增加到1 200μg/mL,淋巴细胞转化率明显下降。其中PHA浓度为400μg/mL时,淋巴细胞转化率最高,显著高于低浓度组(80μg/mL)和高浓度组(1000μg/mL、1200μg/mL)(P<0.05),略高于中浓度组(200μg/mL、600μg/mL、800μg/mL),差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下,PHA体外刺激异育银鲫淋巴细胞转化的最适剂量为400μg/mL。(2)用流式细胞仪检测细胞内DNA合成情况,Mu lticyc le AV软件进...     

鸭淋巴细胞转化试验（MTT法）最佳条件的研究

通过对培养温度、小牛血清及刀豆蛋白A（ConA）的浓度以及培养时间4个参数的研究，确定了鸭淋巴细胞转化试验（MTT法）的最优培养条件。结果表明：采用39.0℃、含10％小牛血清和5μg/mL ConA的 RPMI1640培养66h可获得最大的OD570nm光吸值。     

不同硒源对兔体外淋巴细胞转化功能的影响

将3种硒源配制成不同浓度,分别添加到兔淋巴细胞培养液中,测定它们刺激兔体外淋巴细胞培养24h、48 h的转化率。发现3种硒源在24 h对细胞有很好的刺激作用,其中亚硒酸钠在1×10-8、5×10-8mol/L,硒化卡拉胶在1×10-7mol/L,硒代蛋氨酸在1×10-6、5×10-6mol/L可显著促进PHA对淋巴细胞的刺激作用。另外比较了3种硒源对来自同一个体淋巴细胞刺激24 h的作用差异,结果显示,亚硒酸钠、硒化卡拉胶分别在1×10-7mol/L、1×10-6mol/L浓度时显著促进PHA刺激的淋巴细胞转化,但两者在1×10-5mol/L对淋巴细胞转化有明显抑制;硒代蛋氨酸则在1×10-10~1×10-5mol/L的浓度范围内对细胞均有促刺激作用,浓度越大刺激越明显。     

中华鳖脾淋巴细胞体外转化的实验条件研究

为确定MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测中华鳖脾淋巴细胞体外转化的条件,对脾淋巴细胞浓度和培养时间、丝裂原种类和浓度等影响因素进行优化.结果显示:2×106 cells.mL-1的脾淋巴细胞用10μg·mL-1Con A(伴刀豆蛋白A)诱导培养120 h或用5μg.mL-1 PHA(植物血凝素)诱导培养144 h,能获得良好的检测效果.研究表明,采用MTT法测定中华鳖脾淋巴细胞体外转化方便可行,可为中华鳖脾淋巴细胞体外转化方面的研究提供参考.     

鸭坦布苏病毒感染对鸭T淋巴细胞转化功能的影响

以麻鸭为动物模型,测定鸭坦布苏病毒感染后鸭的T 淋巴细胞增殖转化能力.结果显示鸭坦布苏病毒感染的试验组鸭外周血淋巴细胞刺激指数呈先上升后下降再回升的趋势,其中于第3d试验组淋巴细胞刺激指数极显著高于对照组（P〈0.01）,于第5d下降至对照组水平,于第7、15d显著低于对照组（P〈0.05）,于第21d回升至接近对照组水平.以上结果表明,鸭坦布苏病毒感染鸭后7～21d会抑制鸭T 淋巴细胞的增殖转化功能,造成鸭T 淋巴细胞的免疫抑制.     

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛血清的营养液中培养68 h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果。     

体外诱导猪脾细胞产生白细胞介素2的初步研究

报导了用猪脾淋巴细胞制备白细胞介素2(interleukin 2,IL_2)的方法.用不同来源的植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)作为刺激剂,研究体外诱导猪脾细胞产生IL_2的最适条件.采用IL_2依赖T细胞株(FI_2)的增殖反应3H—TdR掺入法进行IL_2的活性测定.结果表明,诱导IL_2产生的最适条件是:脾细胞悬液浓度为5×10~6个细胞/ml,PHA(国产)的刺激浓度是350μg/ml,培养时间以48小时为宜,用相同剂量的PHA刺激猪脾细胞,Difco产的PHA—P诱导IL_2产生的效果优于国产PHA:在培养液中加入2—巯基乙醇(2—mercaptoethanol,2—ME)未见IL_2的活性增高.     

犬淋巴细胞转化增殖试验最佳条件的确定

试验选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检探讨了不同浓度犊牛血清(FCS)、淋巴细胞、植物血凝素P(PHA-P)和刀豆蛋白A(ConA)对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/ml,用丝裂原PHA-P刺激的最佳浓度为12.5μg/ml时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/ml范围内均可以显著刺激T细胞的增殖(P<0.05),且在浓度为2.5μg/ml时刺激效果最佳。     

亚硒酸钠对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响

[目的]研究亚硒酸钠对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖及脾脏淋巴细胞中细胞因子分泌的影响,进而探讨亚硒酸钠调节机体免疫可能的作用途径。[方法]从BALB/c小鼠脾脏中分离淋巴细胞,采用MTS法检测不同浓度(0、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)和10~(-5) mol/L)的亚硒酸钠培养基培养48 h后的淋巴细胞增殖率并筛选出最适浓度的亚硒酸钠进行脾脏淋巴细胞培养,最后采用ELISA法检测培养48 h后培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6的分泌量。[结果]与对照组相比,10~(-7) mol/L亚硒酸钠处理使淋巴细胞增殖率显著提高,且培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6的分泌量分别为对照组的10.34、2.15、1.06和6.68倍(P<0.05)。[结论]亚硒酸钠可能通过调节脾脏淋巴细胞增殖和细胞因子的分泌来调节机体免疫功能。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度.应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素(PHA-p)、犊牛血清(FCS)对淋巴细胞增殖的影响.在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transfer factor,TF)对犬淋巴细胞增殖的影响,增殖的结果用MTT法测定.试验结果表明,当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml,PHA-P为12.5μg/ml,FCS为10%时,淋巴细胞增殖效果最佳.在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/ml时,对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用.试验结果证实,异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果,同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据.     

无害化鸭粪培育鲢鳙亲鱼技术试验

通过开展无害化鸭粪培育鲢鳙亲鱼技术试验,结果表明:根据季节、天气、水温、水质等变化因素,在春季培育和产后培育中,采用3~5d为周期性投施无害化鸭粪追肥培育鲢鳙鱼亲鱼,其性腺发育正常,怀卵量较饲喂商品精料无差异,较常规堆积方法处理的鸭粪培育的怀卵量增加1万~2万粒/kg。     

育成公鸭硝基苯急性毒性试验

本试验采用Weil′s平移法对金定育成公鸭进行硝基苯(NB)急性毒性试验。结果表明,NB对公鸭的经口急性中毒半数致死量(LD50)为447.20mg·kg-1BW,其可信区间为210.09-951.92mg·kg-1BW。急性中毒公鸭主要表现神经症状,剖检变化以腺胃胃壁增厚、黏膜脱落及肠道充血较明显。说明NB对公鸭具有较强的急性毒性作用。     

石鲽外周血细胞的培养及染色体制备条件的探讨

以石鲽(Kareius bicoloratus)为试验材料研究探讨其外周血细胞培养及染色体制备的条件方法。用RPMI1640全血培养基进行培养,从血液保存时间、刺激源PHA(植物血球凝集素)和ConA(刀豆蛋白A)等方面对外周血淋巴细胞的培养及其染色体制备条件进行探讨,建立较成熟的石鲽外周血淋巴细胞培养及染色体制备的方法。结果表明:血液于4℃保存3d后用全血培养基进行培养,细胞仍可正常生长;在16℃培养温度下,ConA和PHA两种刺激源均能促进石鲽外周血淋巴细胞的分裂增殖,培养时间以72h最好;从培养的血细胞形态和白细胞数目来看,以ConA为刺激源的作用效果好于以PHA为刺激源的作用效果;5ml培养基中加入0.2ml全血,16℃下用终浓度为0.1mg/ml的ConA为刺激源培养72h,在结束培养前4h加入终浓度0.6μg/ml秋水仙素,0.075mol/L的氯化钾低渗35min可获得较好的染色体分裂相。     

SRB 法检测鸡外周血 T 淋巴细胞增殖试验 最佳条件的筛选

【目的】探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件。【方法】体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 mL-1)、ConA质量浓度(5.0,7.5,10.0,12.5和15.0μg/mL)、培养时间(36,48,60h)3个因素进行组合设计培养T淋巴细胞,每个组合设3个重复,SRB显色后用酶标仪在492nm波长处测量OD492值,计算刺激指数(Stimulation index,SI),筛选SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳条件。【结果】SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验的最佳条件为:淋巴细胞含量1×106 mL-1,ConA质量浓度5.0μg/mL,培养时间48h。【结论】确定了体外培养鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳ConA质量浓度、培养时间及淋巴细胞含量,证实用SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖结果可靠,是切实可行的淋巴细胞数量与活性检测方法。     

人与大鼠(SD)外周血淋巴细胞DNA的非程序合成(UDS)水平的比较

以外周全血为材科,紫外线(UV)照射为损伤源,经短期外周血培养和~3H-TdR掺入,观察外周血淋巴细胞DNA的非程序合成(Unscheduled DNA Synthesis,简称UDS)水平,以比较人与大鼠DNA损伤修复能力的差异,并为机体DNA损伤修复的研究提供一个简便可行而有效的实验方法。     

不同来源PHA对人血淋巴细胞分裂影响的差异研究

研究了不同来源PHA对人外周血淋巴细胞分裂的影响.研究表明:自提不同来源的PHA对细胞均有刺激细胞分裂和凝集的效应,其中以四川花豆刺激分裂的效应最好,其次为山西产奶花云豆、红花豆、白云豆.建议在实际中均可以不同浓度使用.     

鸭α干扰素的研究

以鸭胚成纤维细胞——水泡性口膜炎病毒作为鸭干扰素的检测系统,证明北京鸭的脾脏细胞和全血细胞在诱生剂作用下,能够产生鸭外源性干扰素。考虑干扰素的抗病毒活性的效价、操作的简便和提纯的效果,以脾脏细胞诱生法优于全血细胞诱生法。以正交表L9(3~4)安排试验,表明诱生鸭干扰素的最佳条件组合是:水解乳蛋白液——2×10~7脾细胞/毫升——NDV—F系,39℃旋转培养20～24小时,鸭脾干扰素的滴度可达2,000单位/毫升以上.10％的小牛血清对于诱生鸭干扰素是必需的。理化和生物学特性的测定证明本研究的抗病毒物质是鸭干扰素。硫酸铵分级盐析法可以对鸭干扰素进行浓缩和粗提纯,滴度可以提高到10,000单位/毫升。     

鸭α-干扰素基因疫苗肌肉注射免疫鸭抗鸭瘟强毒感染的研究

将本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)分别按每只50、100、200μg3个剂量肌肉注射免疫樱桃谷鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15d后攻击感染鸭瘟强毒,于攻毒后2h、6h、12h、24h、3d、6d、9d、14d、22d、26d、33d和40d采全血,同时取死亡鸭的各组织器官,采用实时荧光定量PCR对鸭瘟病毒在鸭外周血中的动态变化和在各组织器官中的分布及含量进行检测。结果表明:①3个剂量pcDNA-SDIFN-α和鸭瘟弱毒疫苗都对鸭产生良好保护作用,免疫鸭未发生死亡;而PBS和空载体对照组3只鸭中有1只鸭死亡,死亡鸭心、肝、脾、肾、胰和各段肠管中均检测到鸭瘟病毒DNA且其含量大于pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血病毒DNA含量;②3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低,差异显著(P<0.05),特别是在2h差异极显著(P<0.01);攻毒后24h内,3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量均低于鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭,差异显著(P<0.05);3个不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组之间外周血鸭瘟病毒DNA含量差异不显著(P>0.05),攻毒初期,200μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低,100μg次之,50μg最高。研究表明,pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用,并在攻毒初期表现出一定的量效关系。