甜高粱组培苗生根培养的优化

【目的】优化能源作物甜高粱组培苗的生根培养体系,为遗传转化奠定基础。【方法】利用不同基本培养基（MS、1/2MS）对组培苗生根的影响进行筛选试验,得到较有利于生根的基本培养基;在最佳培养基中添加不同浓度的植物激素（IBA、NAA、ABT）,综合根的质量、生根率、生根时间、生根苗的长势等筛选最佳生根培养基配方。【结果】筛选出最佳生根培养基组合：北甜三号（BT3）为1/2MS+2.0 mg/L IBA,辽甜三号（LT3）为1/2MS+3.0 mg/L IBA,且根粗、苗壮,两品种的生根率存在差异。此外,未加激素的MS和1/2MS培养基均无组培苗生根。【结论】在1/2MS上添加2.0 mg/L IBA或3.0 mg/L IBA分别为北甜三号、辽甜三号组培苗生根的最佳途径。     

蜈蚣草快繁及其组培苗对砷的富集研究

【目的】应用不同外植体建立蜈蚣草组织培养快速繁殖的技术体系,并进行组培苗对砷的富集研究。【方法】以蜈蚣草的孢子、幼芽,以及无菌苗的幼叶、幼茎和顶芽为外植体,以不同浓度的蜈蚣草混合匀浆配比不同浓度的植物激素,优选出蜈蚣草组培快繁的最适条件。【结果】幼叶为最佳外植体,其次是孢子,顶芽和茎最差。1/2MS+2,4-D 2 mg/L+蜈蚣草茎叶匀浆混合液(PVCLM)60 g/L为最佳的愈伤诱导培养基,愈伤诱导率可达100%;1/2MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+PVCLM 200 g/L为最佳分化培养基,分化率达98.3%;1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+PVCLM 200 g/L为最佳的丛生芽增殖培养基,增殖系数达1.1;1/4MS+NAA 0.2 mg/L为最佳生根培养基,生根率98%,以上涉及的培养基中琼脂浓度为7.8 g/L,蔗糖浓度为20 g/L,p H为5.8~6.0。组培苗移栽至尾矿库栽种,成熟后检测蜈蚣草中富集的砷的量达到3318 g/hm~2。【结论】摸索出一套适合工厂化的蜈蚣草组培快繁技术体系,组培苗对砷的富集量较野生型高。     

铁皮石斛组培苗生根条件优化研究

【目的】培养生根优良的铁皮石斛组培苗,提高移栽成活率。【方法】在生根培养基中添加不同激素配比（1.0~3.0 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA）进行铁皮石斛组培苗生根培养,并采取正交试验考察光照强度、pH和琼脂用量对铁皮石斛组培苗生根效果的影响。【结果】随着MS培养基中NAA浓度的升高,试管苗的鲜重和生根率呈逐渐降低的趋势,以添加NAA 1. 0 mg/L（处理1）和NAA 2. 0 mg/L（处理3）的试管苗长势最好。极差分析和方差分析结果表明,在3个培养条件中,对试管苗生根的影响大小表现为光照强度>琼脂用量>pH值,生根培养基3因素最优水平组合为光照强度2000 lx,pH 5.5,琼脂用量8.0 g/L。【结论】铁皮石斛试管苗适宜的生根培养基为1/2MS + 10%香蕉泥 + NAA 1.0 mg/L + 2%蔗糖 + 0.05%活性炭,适宜的生根条件为光照强度2000 lx、琼脂用量8.0 g/L、pH 5.5。     

林荫银莲花组培苗生根培养基的优化

以药用植物林荫银莲花不定芽组培苗为试验材料,研究培养基添加不同植物激素、不同质量浓度蔗糖和活性炭对组培苗生根的影响。结果表明:以1/2 MS为基本培养基,添加0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,30 g/L蔗糖作为碳源,另加入1.0 g/L活性炭,培养55 d后,林荫银莲花组培苗的生根率为93.9%,平均根条数为10.5,根长最长达1.73 cm,根较粗且褐化轻微。     

索邦和西伯利亚百合的离体再生体系建立

【目的】确定索邦（Sorbonne）和西伯利亚（Siberia）百合的离体再生体系适合的诱导培养基、增 殖培养基、生根培养基以及最佳转化受体系统。【方法】选用索邦和西伯利亚百合的鳞茎球作为外植体,比较 它们在添加不同激素配比的培养基中的生长状况,得出两种百合诱导愈伤组织和不定芽、继代增殖、诱导生根 培养基和对卡那霉素敏感的最适条件。【结果】索邦百合最佳诱导培养基是 MS+2,4-D 1.5~2.0 mg/L,西伯利亚 百合最佳诱导培养基为 MS+2, 4-D 1.0~1.5 mg/L;两种百合的最佳继代增殖培养基均为 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L：两种百合的最佳生根培养基为 1/2MS+NAA 0.2 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L;筛选转化植株时,质量浓度为 150 mg/L 的卡那霉素足以抑制非转化细胞或细菌的生长。【结论】为东方百合品种种球工厂化生产及遗传转化再 生体系充实理论依据。     

几种影响“赤颜”草莓组培苗生根因素的研究

为提高草莓生根工作效率,以"赤颜"草莓组培苗为材料,研究了培养基种类、生长素浓度及种类、活性炭浓度、糖源种类及浓度对生根的影响。结果表明:"赤颜"草莓组培苗在基本培养基为1/2 MS培养基,IBA浓度为0.5 mg/L时,试管苗生根率达100%,其根鲜重(75.5 mg)和干重(8.5 mg)均达最大值;且根粗壮,根数达16.8条,根长为2.6 cm。当培养基中活性炭浓度为1.0 g/L和蔗糖浓度为30 g/L时,利于"赤颜"草莓组培苗的生根及生长。因此,"赤颜"草莓试管苗生根的适宜培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+活性炭1.0 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。     

易感线虫番茄品种Rutgers遗传转化体系的建立

【目的】旨在建立Rutgers番茄品种的遗传转化体系。【方法】以易感线虫番茄品种Rutgers为实验材料,采用农杆菌介导法,对无菌苗的苗龄、筛选培养基中Hyg的浓度大小、不定芽诱导培养基的激素配比和生根培养基4个方面进行优化,从而建立Rutgers品种的遗传转化体系。【结果】选择9～11 d的无菌苗的叶片分化愈伤组织的效果最好,筛选培养基中Hyg的浓度为10 mg/L时可以有效的筛选转基因的抗性芽,愈伤组织诱导不定芽培养基中最佳激素配比为6-BA 2 mg/L+IAA 0.1 mg/L。以1/2MS添加不同浓度IBA(0.05、0.1、0.15、0.20 mg/L)进行生根比较,再生芽在1/2 MS+IBA 0.1 mg/L生根培养基上生根最好。【结论】首次建立了Rutgers番茄品种的遗传转化体系,为番茄的抗根结线虫转基因育种打下基础。     

葡萄悬浮细胞系的建立

【目的】建立适合葡萄悬浮细胞系快速稳定生长的培养体系。【方法】以鲜食葡萄巨峰的果皮为材料,以B5为基本培养基,通过选择合适的激素配比及浓度、pH、蔗糖浓度等建立并优化葡萄愈伤组织培养体系及细胞悬浮培养体系。【结果】在B5+0.5 mg/L 6-BA+NAA条件下,NAA最适质量浓度为1 mg/L;在B5+0.5 mg/L 6-BA+2,4-D条件下,2,4-D最适质量浓度为1.0~2.0 mg/L;在B5+1 mg/L NAA+6-BA条件下,6-BA最适质量浓度为0.5~1.0 mg/L;在B5+2 mg/L 2,4-D+KT条件下,KT的最适质量浓度0.2 mg/L。在最佳蔗糖质量浓度30g/L、最适pH 5.5~5.8培养基条件下,建立了能快速生长的均一、稳定的巨峰葡萄细胞悬浮体系,优化了培养条件。【结论】适合葡萄愈伤组织生长的培养体系为:B5+250 mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂;适合葡萄细胞悬浮培养的体系为:B5+1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖和B5+250mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖。     

草莓组培苗继代培养基筛选试验

以花药离体培养的草莓组培苗为试验材料,通过转接入不同的继代培养基中,比较培养基中的基本培养基选用、激素配比、所用水质、糖质选用、琼脂添加量对于组培苗增殖的影响情况。结果得出草莓组培苗增殖扩繁的最佳培养基为:基本培养基选用MS,添加2 mg/L的6-BA,采用自来水配制,添加市售白砂糖40g/L,琼脂粉添加量为5 g/L。     

影响冬枣叶片再生不定芽的主要因素

为给冬枣的遗传改良提供依据,以冬枣组培苗叶片为试材,研究了影响其叶片再生不定芽的主要因素,包括基本培养基、pH值、激素种类和浓度配比以及培养条件。结果表明:适宜冬枣叶片分化的基本培养基为MS,适宜的pH值为5.8~6.0,TDZ为诱导冬枣叶片不定芽再生的最佳激素;冬枣叶片不定芽再生的适宜培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,平均再生率达到92.52%,平均出芽数4.64个。接种后暗培养14 d有利于叶片分化。     

白腐真菌对造纸黑液中木质素的降解效果

【目的】应用白腐真菌处理造纸黑液,探讨白腐真菌对造纸黑液中木质素的降解效果及其影响因子,确定最佳降解条件。【方法】从自然界腐朽木材上分离培养白腐真菌,利用专用培养基对其进行分离和纯化,分析木质素溶液质量浓度(污染负荷)、pH值、搅拌速度、碳源和氮源质量浓度、[Fe2+]质量浓度对白腐真菌降解木质素效果的影响。【结果】确定白腐真菌降解造纸黑液中木质素的最佳条件为:木质素质量浓度为153.0 mg/L,pH值为5,搅拌速度为250 r/min,葡萄糖质量浓度为1 g/L,酒石酸铵质量浓度为0.20 g/L,[Fe2+]质量浓度为0.08 mg/L。【结论】得到了白腐真菌降解造纸黑液中木质素的最佳条件,在此条件下白腐真菌对木质素的降解率最高可达64.38%。     

间歇浸没式生物反应器快繁草莓脱毒苗的参数

以茎尖脱毒处理诱导的草莓‘红颜’第3代继代苗为试验材料,利用间歇浸没式生物反应器进行组培苗增殖技术体系的研究。经过40d的增殖培养后,结果表明:(1)利用TIBs系统进行草莓组培苗培养增殖率约是传统培养方式的3倍;(2)TIBs系统中接种密度在2株/0.25L培养基/瓶,有利于草莓组培苗的生长;(3)TDZ和NAA质量浓度均为0.5mg/L时有利于TIBs系统中草莓组培苗的增殖;(4)TIBs系统中蔗糖质量浓度为30g/L较适宜;(5)荧光灯与红蓝LED灯对TIBs系统中草莓增殖无差异。     

不同培养基组分对带叶兜兰离体培养效果的影响

【目的】探讨适宜带叶兜兰(Paphiopedilumhirsutissimum)离体培养的培养基组分,为规模化生产带叶兜兰组培苗提供技术支持。【方法】以带叶兜兰组培苗为外植体,筛选适合其丛生芽诱导、增殖和壮苗生长的基本培养基、附加物种类和生长激素组合。【结果】初步筛选出较适宜带叶兜兰丛生芽诱导的培养基为1/2MS+3.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭,其诱导率较高,为36.1%,且丛生芽诱导出芽较多;丛生芽增殖培养基为1/2MS+0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2,4-D+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭,其增殖系数为2.02,芽生长较快;壮苗生长最适宜培养基为1.0 g/L花宝1号+1.0 g/L花宝2号+MS培养基的有机、微量成分+1.0 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 g/L香蕉汁+1.5 g/L蛋白胨,其幼苗生长较好,生物量大,生根率达75.5%。【结论】在1/2MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭培养基中添加香蕉汁较适宜带叶兜兰丛生芽诱导和增殖培养;在1/2MS+80.0 g/L香蕉汁培养基中添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2,4-D对带叶兜兰的增殖效果较佳;花宝改良培养基适宜带叶兜兰壮苗培养,结合添加NAA和活性炭培养效果更佳,但活性炭浓度不宜过高。     

‘京枣39’离体叶片高效再生体系的建立

【目的】‘京枣39’是一种优质的枣鲜食新品种，目前尚无有效的离体再生体系，影响了自根苗的培育和苗木纯度。为了解决枣遗传转化效率低等问题，本研究探究了枣叶片再生的不同影响因素，以期建立高效的叶片再生体系。【方法】以‘京枣39’组培苗叶片为试材，研究了不同接种方式、基本培养基种类、植物生长调节剂种类和浓度配比对离体叶片直接诱导不定芽再生的影响。【结果】正交试验结果表明：叶片正放的接种方式再生率远高于叶片反放，是‘京枣39’叶片再生不定芽的最佳放置方式；基本培养基对‘京枣39’叶片再生的影响要大于植物生长调节剂，且最优培养基为1/2 MS，最佳植物生长调节剂为细胞分裂素6-BA，本研究确立的‘京枣39’组培苗叶片再生的最优体系为1/2 MS+1 mg/L噻苯隆+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂，再生率可达79.17%，平均每叶片再生不定芽能达到4.67个。进而初探并建立了‘京枣39’组培苗的最佳扩繁体系为：MS+20 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，分枝率高达88%，平均分枝数达2.76枝...     

蓝莓品种布里吉塔的组培无菌体系建立

【目的】探明蓝莓外植体采集时间、不同外植体、玉米素核苷浓度对蓝莓初代培养的影响及细胞分裂素种类对组培苗继代生长的影响，为蓝莓组培无菌体系建立提供参考。【方法】以北高丛蓝莓品种布里吉塔为试验材料，依托组织培养技术建立无菌体系。【结果】蓝莓4—5月均可进行外植体采集，其中5月最佳；最佳外植体茎为中下段和茎下段；初代培养最佳培养基为1/2 MS+1/2 WPM＋ZT 1.0 mg/L；与1.5 mg/L ZT相比，培养基中添加1.5 mg/L反式玉米素核苷（tZR）初代诱导新梢的继代生长更好。【结论】通过组培快繁技术，建立了蓝莓布里吉塔的高效组培无菌体系，初代培养最佳培养基为1/2 MS+1/2 WPM＋ZT 1.0 mg/L，继代培养基为1/2 MS + 1/2 WPM＋1.5 mg/L tZR。     

影响草莓遗传转化率的因子及转CBF1基因植株的获得

以草莓试管苗的叶片为外植体,经农杆菌介导将抗逆相关转录因子CBF1基因转入草莓基因组.探讨酚类物质、农杆菌菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间及选择方式等对草莓转化效率的影响,建立草莓遗传转化体系.在黑暗条件下预培养2～4 d,再用浓度OD6000.3～0.5的菌液侵染3～5 min后共培养2 d,将外植体先接到含有500 mg/L Cef的诱导培养基上进行培养,14 d后再转接到含有选择压20 mg/L Kan和500 mg/L Cef的诱导培养基上进行选择培养,得到卡那霉素抗性草莓植株.经PCR检测证实CBF1基因已整合到草莓基因组中.     

箭杆杨组织培养再生体系的建立

【目的】探讨常温下适宜箭杆杨试管苗腋芽增殖、生根的最佳培养条件。【方法】以MS培养为基本培养基,附加不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)以及6-氨苄基腺嘌呤(6-BA)组成试验培养基,对箭杆杨组织进行培养,观察其生根情况和愈伤组织诱导情况。【结果】箭杆杨脱分化最佳培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的愈伤组织诱导率为90%;不定芽分化诱导培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L6-BA,该条件下的诱导分化率为67.1%;芽增殖培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的增殖数为5.8;最佳生根培养基为:1/2MS+1.0 mg/L IBA,该条件下的生根率为81.3%。【结论】建立了箭杆杨组织培养再生体系,为其种质资源的试管保存奠定了基础。     

根癌农杆菌介导的芥菜型油菜高效遗传转化

【目的】建立芥菜型油菜(Brassica juncea)高效遗传转化体系。【方法】以芥菜型油菜带柄子叶为材料,采用农杆菌介导的转化方法,将外源基因导入芥菜型油菜愈伤组织,并获得再生植株。【结果】外植体在侵染前,预先在含2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+6mg/L AgNO3的MS培养基上进行预培养2³d。侵染63d。侵染6⁸min后转入共培养培养基中28min后转入共培养培养基中2³d,之后转到含10mg/L卡那霉素的MS筛选培养基上进行筛选培养23d,之后转到含10mg/L卡那霉素的MS筛选培养基上进行筛选培养2³周。对成活植株进行GUS染色和PCR验证,证明外源基因已经成功转入芥菜型油菜的基因组中。【结论】通过优化愈伤组织诱导条件和农杆菌侵染时间,可显著提高芥菜型油菜的遗传转化效率。     

根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化

【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50 mg/L和Cb 500 mg/L的筛选生根培养基上进行筛选,在以上最佳遗传转化条件下,初步筛选到54株转化体,经PCR和RT-PCR检测获得25株转化烟草植株。【结论】经卡那霉素筛选、PCR、RT-PCR检测后,初步证明芪合酶基因已被整合到烟草基因组中,并可以正常转录。     

森林草莓‘Hawaii4’高效遗传转化系统的建立

以森林草莓‘Hawaii 4’离体叶片为试验材料,对叶龄、暗培养、植物生长调节剂种类及其配比和抗生素敏感性进行研究,建立森林草莓‘Hawaii 4’高效稳定的遗传转化系统。研究结果显示:49d叶龄的叶片在含有3.0mg/L 6-BA,0.1mg/L IBA的MS培养基上暗培养3d时叶片的再生频率最高,再生频率可达到88%。另外,在农杆菌介导的遗传转化过程中,300mg/L羧苄青霉素具有最适的农杆菌抑制效果;用于阳性植株筛选的卡那霉素,最适质量浓度为20mg/L。通过GFP荧光观察及PCR检测,获得阳性植株的遗传转化效率可达18%。